，DMS0-d6)Sl2.91 (s， 1H，-NH)，8.42(s，1H，6-H)，7.25(d，J = 8.0Hz，lH，-HC = CH)，6.93(d，J = 8.0Hz，lH，-HC = CH)，5.71(d，J = 4.0Hz，lH，l，-H)，4.n-4.10(m，lH，2，-H)，4.04-4.02(m，lH，3，-H)，3.90-3.89(m，lH，4'-H)，3.78(dd，J=12.0,4.0Hz，lH，5'-H)，3.62(dd，J=12.0,8.0Hz，lH，5'-H). 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5l88.06(-C = S),147.49(C-2),134.88(C-6),131.68(C-HC = CH)，118.23(C-HC = CH)，106.50(C-5)，90.00(s，3H，C-r )，84.89(C-4'），74.57(C-2'）， 68.98(03'），60.07(C-5'）.HRMS: [M+Na]+386.9626calculated for CiiHi3BrN2〇5SNa; found388·9610·UV-Vis(in CH3CN)Amax/nm:230，279，351·IR(fim)-1:3405·2(0H)，1684·4 (C = 0), 1603.9(C = C), 1459.1,1391.1(NH).
[0080]實施例2:試驗體外抗人黑色素瘤A375細胞活性 [0081 ] 1、對人黑色素瘤細胞A375的抑制作用
[0082] 取對數(shù)生長期的A375細胞(人黑色素瘤細胞），用含10%胎牛血清和抗菌素的DMEM 培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細胞濃度為10X105/mL，加入兩個96孔平底細胞培養(yǎng)板，每孔100yL(約104個細 胞），放入37°C，5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。次日，將含(E)-4-硫-5-(2-溴乙烯基)-尿苷(4-SBVU)和對照測試藥物(E)-5-(2-溴乙烯基)-尿苷(BVU)的培養(yǎng)液加入實驗組96孔 板中，每種藥物組合設(shè)三個平行孔。每孔體積為l〇〇yL，加入適量藥物溶液，使得藥物最終濃 度為100μΜ/L，空白對照組96孔板中只加培養(yǎng)液，不加藥物。將兩板放在37 °C，5 %二氧化碳 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。
[0083] 2、MTT實驗(噻唑藍比色法）
[0084] 培養(yǎng)結(jié)束后每孔加入20yL MTT溶液(5mg/mL)繼續(xù)培養(yǎng)3小時，取出96孔板，棄去孔 內(nèi)全部上清液，并用干凈的紙巾輕輕蘸干96孔板內(nèi)的殘留液，不要破壞孔內(nèi)晶體。每孔加入 100yL DMS0,溶解30分鐘，然后用酶標儀測定波長570nm處的吸光值，即0D值。記錄實驗結(jié) 果，處理數(shù)據(jù)，得到細胞存活率％ = (0D實驗/0D對照）X 100%。
[0085] 光照對比實驗所用藥物為100μΜ/1(Ε)-5-(2-溴乙烯基)-尿苷，（E)-4-硫-5-(2-溴 乙烯基)_尿苷，（E)_2'，3'，5'-〇_二乙?；?5-(2-溴乙烯基)-尿苷，（E)-4_硫-2'，3'，5'-〇_ 三乙?；?5-(2-溴乙烯基)-尿苷，光照組用紫外光照射96孔板，對照組相同條件下不用紫 外光照射培養(yǎng)，紫外光劑量為15KJ/m 2,分別測量其0D值，計算細胞存活率。實驗結(jié)果如圖1 所示。
[0086] 從圖1可以看出：1)空白實驗中，不加入BVU和4-SBVU兩種藥品時，僅使用紫外光照 對癌細胞具有一定的殺傷作用;2)不使用紫外照射的情況下，兩種藥物濃度相同時，4-SBVU 作用的癌細胞存活率明顯比BVU的存活率低，說明核苷硫代后抗癌活性明顯增強;3)使用紫 外照射的情況下，兩種藥物濃度相同時，4-SBVU作用的癌細胞存活率明顯比BVU的存活率 低，說明核苷硫代后與紫外線協(xié)同作用后抗癌活性相較于相應(yīng)核苷與紫外線協(xié)同作用的抗 癌性明顯增強;4)分別加入同種藥物作用的情況下，紫外光照條件下明顯比不用紫外照射 時癌細胞的存活率低，說明紫外光的協(xié)同作用有利于使藥物對癌細胞的殺傷作用增強。
【主權(quán)項】
1. 一種含硫尿巧抗癌化合物，為4-硫-5-(2-面代乙締基）尿巧，其特征在于，4-硫-δ? η-面代乙締基) 尿巧的化學通式 （I) 為： 化代表徑基0的保護基團或者Η;化代表OR域者0Η; X代表面素。2. -種含硫尿巧抗癌化合物的中間體，為4-硫-5-(2-面代乙締基)尿巧的中間體，其特 征在于，所述中間體的化學通式(I)為：化代表徑基0的保護基團或者H; 化代表〇扣； X代表面素、簇基或者醋基。3. -種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，包括如下步驟： A. 艦化反應(yīng)，將尿巧在酸性條件下進行5位艦化反應(yīng)； B. 5位取代反應(yīng)，用丙締酸醋取代艦，獲得巧)-5-(2-丙締酸醋基)-尿巧； C. 面代反應(yīng)，用步驟B中獲得的產(chǎn)物與面代試劑反應(yīng)合成巧)-5-(2-面代乙締基)尿巧； D. 保護糖環(huán)上的徑基，將化)-5-(2-面代乙締基）尿巧經(jīng)由通式（I)所示0保護基團保 護； E. 硫取代氧，將使用通式（I)所示保護基團保護后的化合物與五硫化二憐反應(yīng)，得到4- 硫-5-(2-面代乙締基)尿巧及其類似物； F. 脫去通式(I)所示的徑基0保護基團，將步驟E中所得產(chǎn)物溶入制備好的氨甲醇溶液， 可得4-硫-5- (2-面代乙締基)尿巧。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，其特征在于:所述 的步驟C進一步包括： C1.用步驟B所得產(chǎn)物與氨氧化鋼溶液進行水解反應(yīng)合成巧)-5-(2-簇乙締基)-尿巧； C2.用(E)-5-(2-簇乙締基)-尿巧進行面化反應(yīng)合成(E)-5-(2-面代乙締基)尿巧； 所述的步驟Cl具體為:將化)-5-(2-丙締酸醋)-尿巧溶液逐滴加入到氨氧化鋼溶液中， 反應(yīng)完全后在冰浴條件下逐滴加入濃鹽酸，直到抑為1，靜置后抽濾得到白色固體;所述的 步驟C2,具體為：取化)-5-(2-丙締簇基)-尿巧在100°C條件下與無水碳酸鐘及面代試劑反 應(yīng)，旋蒸除去一半溶劑，置于冰箱中過夜，抽濾后得到產(chǎn)品。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，所述的步驟A具體 為:在110°C條件下，尿巧和單質(zhì)艦在0.212mol/L的稀硝酸溶液中反應(yīng)，通過薄層色譜法監(jiān) 測反應(yīng)情況，展開劑為C此Cb:C曲0H = 7:1;產(chǎn)物用石油酸萃取，收集下層溶液;靜置后收集 析出的白色固體。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，所述步驟B具體 為:將無水1，4-二氧六環(huán)加氣氣保護，加熱至70°C，依次加入醋酸鈕、Ξ苯基麟和Ξ乙胺，攬 拌到溶液變成深紅色;加入步驟A的產(chǎn)物，與丙締酸醋反應(yīng)，通過薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)情況， 展開劑為C出Cl2:CH3〇H=7:l;過濾收集濾液，靜置至濾液中有大量固體析出；用無水乙醇重 結(jié)晶，得到白色絮狀固體。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，所述的步驟D具體 為：取步驟C產(chǎn)物在冰浴條件下與無水化晚W及醋酸酢反應(yīng);通過薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)情 況;減壓條件下除去溶劑，得到粘稠狀物質(zhì)，用無水乙醇重結(jié)晶得到灰白色固體。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，所述的E步驟具體 為:取D步驟產(chǎn)物溶于1，4-二氧六環(huán)，在105 °C條件下與P2S5反應(yīng)，用博層色譜法檢測反應(yīng)情 況，展開劑為陽:EA=1:1;減壓條件下除去溶劑，得到棟紅色固體;用PE:EA = 2:1做洗脫劑， 柱分離得到黃色固體。9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備含硫尿巧抗癌化合物的合成方法，所述F步驟具體 為：取E步驟產(chǎn)物在氨甲醇溶液中反應(yīng)，通過薄層色譜法檢測反應(yīng)情況，展開劑為CHCb : C出地=7:1;減壓條件下除去溶劑，得到黃色固體，用CHC12: C出細=7:1柱分離，得到產(chǎn)品。10. 權(quán)利要求1或2中任一權(quán)利要求所述的化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種對UVA光有較強敏感性的具有抗癌活性的4-硫-5-(2-鹵代乙烯基)尿苷化合物及這種化合物的中間體和制備方法。所述方法包括下列反應(yīng)：碘化反應(yīng)，鹵代反應(yīng)，保護糖環(huán)上的羥基，硫取代氧，以及脫去O保護基團，可得4-硫-5-(2-鹵代乙烯基)尿苷。本發(fā)明具有反應(yīng)時間短，產(chǎn)率高，產(chǎn)品純度高的優(yōu)點，避免了傳統(tǒng)合成方法的耗時耗能，產(chǎn)率低下等缺點。為進一步開發(fā)含硫核苷類藥物提供了有利條件。
【IPC分類】C07D405/04, A61P35/00, A61K31/506
【公開號】CN105566304
【申請?zhí)枴緾N201610021792
【發(fā)明人】張曉輝, 馬克東, 李德鵬, 閆德峰, 高瑞琦, 赫玲爽
【申請人】大連大學
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月13日