一種實體腫瘤組織消化液的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及細(xì)胞分離領(lǐng)域，具體涉及一種實體腫瘤組織消化液。
【背景技術(shù)】
[0002]在對實體腫瘤組織的細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行分析研究(如細(xì)胞放射敏感性檢測等)時，需先將樣品組織塊制備成分散的單細(xì)胞懸液。只有當(dāng)樣品組織中的各種細(xì)胞成分處在單細(xì)胞狀態(tài)下，才能有效地對其進(jìn)行各種細(xì)胞效應(yīng)的檢測分析，而細(xì)胞懸液質(zhì)量的好壞與消化液配方和消化方法密切相關(guān)?，F(xiàn)有技術(shù)中的各消化液對腫瘤組織的消化效果尚有待改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種實體腫瘤組織消化液，能有效、快速地將實體腫瘤樣品分散為單細(xì)胞。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0005]—種實體腫瘤組織消化液，由以下重量份的組分制備而成:
[0006]I型膠原酶25-35份、I型蛋白激酶45_55份、分散酶1-4份、透明質(zhì)酸酶15_25份、泊洛沙姆10-30份、緩沖液202.56-320.35份、濃度為15-85mg/mL的超順磁性納米粒子溶液10-20份。
[0007]優(yōu)選地，所述緩沖液包含5-15mmo I/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，0.4_0.6mmol/L二氨基乙烷四乙酸，5-15mmol/L氯化鈉、0.015yg.yl^-0.0SSyg.μΓ1甲基磺酸乙酯。
[0008]優(yōu)選地，由以下重量份的組分制備而成:
[0009 ] I型膠原酶25-30份、I型蛋白激酶45-50份、分散酶I _3份、透明質(zhì)酸酶15_20份、泊洛沙姆10-25份、緩沖液202.56-300份、濃度為15-80mg/mL的超順磁性納米粒子溶液10-15份。
[0010]優(yōu)選地，由以下重量份的組分制備而成:
[0011 ] I型膠原酶30份、I型蛋白激酶50份、分散酶2.5份、透明質(zhì)酸酶20份、泊洛沙姆20份、緩沖液261.455份、濃度為50mg/mL的超順磁性納米粒子溶液15份。
[0012]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0013 ]細(xì)胞膜損傷小、細(xì)胞懸液分散度好，且操作方便、效果穩(wěn)定。
【具體實施方式】
[0014]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0015]以下實施例中的表面羧基化的超順磁性納米粒子制備方法如下:
[0016]將8-10份的FeC13.6H20溶于140-150份mL去離子水，攪拌加熱至70_80°C ;將5-6份的FeCl2.4H20溶于1mL去離子水，過濾;將兩種溶液混合后劇烈攪拌，快速加入18ml濃氨水，之后逐滴加入4.66g油酸，繼續(xù)在70°C的溫度下快速攪拌I小時；制得的溶液用酒精沉淀、洗滌2-3次，再用去離子水洗滌至中性，然后加入160-180ml的濃度為10-15mg/mL KMn04溶液，超聲波清洗儀超聲振蕩8h，最后將制得的溶液用去離子水洗滌2-3次，冷凍干燥后得表面羧基化的超順磁性納米粒子。
[0017]實施例1
[0018]—種實體腫瘤組織消化液，由以下重量份的組分制備而成:
[0019]I型膠原酶25份、I型蛋白激酶45份、分散酶I份、透明質(zhì)酸酶15份、泊洛沙姆10份、緩沖液202.56份、濃度為151^/1^的超順磁性納米粒子溶液10份。所述緩沖液包含5臟01/1三輕甲基氨基甲燒-鹽酸，0.4mmol/L二氨基乙燒四乙酸，5mmol/L氯化鈉、0.015yg.μΓ1甲基磺酸乙酯。
[0020]實施例2
[0021 ] 一種實體腫瘤組織消化液，由以下重量份的組分制備而成:
[0022]I型膠原酶35份、I型蛋白激酶55份、分散酶4份、透明質(zhì)酸酶25份、泊洛沙姆30份、緩沖液320.35份、濃度為851^/1^的超順磁性納米粒子溶液20份。所述緩沖液包含1511111101/1三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，0.6mmol/L二氨基乙烷四乙酸，15mmol/L氯化鈉、0.055yg.μΓ1甲基磺酸乙酯。
[0023]實施例3
[0024]—種實體腫瘤組織消化液，由以下重量份的組分制備而成:
[0025]I型膠原酶30份、I型蛋白激酶50份、分散酶2.5份、透明質(zhì)酸酶20份、泊洛沙姆20份、緩沖液261.455份、濃度為50mg/mL的超順磁性納米粒子溶液15份。所述緩沖液包含10mmol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，0.5mmol/L二氨基乙烷四乙酸，1mmoI/L氯化鈉、0.035μgll-1甲基磺酸乙酯
[0026]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種實體腫瘤組織消化液，其特征在于，由以下重量份的組分制備而成: I型膠原酶25-35份、I型蛋白激酶45-55份、分散酶1-4份、透明質(zhì)酸酶15_25份、泊洛沙姆10-30份、緩沖液202.56-320.35份、濃度為15-85mg/mL的超順磁性納米粒子溶液10-20份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種實體腫瘤組織消化液，其特征在于，所述緩沖液包含5-15mmo I /L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸，0.4-0.6mmo I /L 二氨基乙烷四乙酸，5-15mmo I /L氯化鈉、0.015yg.Ur1-O-OSSyg.μΓ1 甲基磺酸乙酯。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種實體腫瘤組織消化液，其特征在于，由以下重量份的組分制備而成: I型膠原酶25-30份、I型蛋白激酶45-50份、分散酶1-3份、透明質(zhì)酸酶15_20份、泊洛沙姆10-25份、緩沖液202.56-300份、濃度為15-80mg/mL的超順磁性納米粒子溶液10-15份。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種實體腫瘤組織消化液，其特征在于，由以下重量份的組分制備而成: I型膠原酶30份、I型蛋白激酶50份、分散酶2.5份、透明質(zhì)酸酶20份、泊洛沙姆20份、緩沖液261.455份、濃度為50mg/mL的超順磁性納米粒子溶液15份。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種實體腫瘤組織消化液，由以下重量份的組分制備而成：I型膠原酶25-35份、I型蛋白激酶45-55份、分散酶1-4份、透明質(zhì)酸酶15-25份、泊洛沙姆10-30份、緩沖液202.56-320.35份、濃度為15-85mg/mL的超順磁性納米粒子溶液10-20份。本發(fā)明細(xì)胞膜損傷小、細(xì)胞懸液分散度好，且操作方便、效果穩(wěn)定。
【IPC分類】C12N5/09
【公開號】CN105543173
【申請?zhí)枴緾N201610077129
【發(fā)明人】楊留中, 寇衛(wèi)政, 李秋萍, 楊慶輝, 蔡衛(wèi)梅
【申請人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月30日