一種冠突散囊菌及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來說涉及一種冠突散囊菌，同時(shí)涉及該冠突散囊 菌在產(chǎn)花果香類物質(zhì)中的用途。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 醬香型白酒是中國(guó)主要香型白酒，其獨(dú)特的釀造工藝形成了其獨(dú)具風(fēng)格的醬香風(fēng) 味。而目前對(duì)醬香型白酒的主要香味成分還沒有一個(gè)統(tǒng)一論斷，這種情況的出現(xiàn)主要是由 于醬香型白酒的風(fēng)味物質(zhì)在形成過程中在酒體中存留了許多有機(jī)物，所以很難確定酒的主 體香成分。酒體成分的復(fù)雜同時(shí)也表明呈香物質(zhì)的多樣性，各種香味物質(zhì)的共同作用才形 成醬香型白酒的獨(dú)特風(fēng)味。
[0004] 霉菌亦既有一定的生香功能，對(duì)醬香型白酒的風(fēng)味成分具有貢獻(xiàn)作用。目前用于 產(chǎn)酯香的主要是紅曲霉屬的紫色紅曲霉，在醬香酒中產(chǎn)香物質(zhì)的研究較少，沒有相關(guān)的文 章或?qū)＠?br>[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種促進(jìn)酒體風(fēng)味的產(chǎn)花果香類物質(zhì)的冠突散囊菌。
[0007] 本發(fā)明的另一目的在于提供該冠突散囊菌在產(chǎn)花果香類物質(zhì)中的用途. 本發(fā)明的一種冠突散囊菌FBKL3.0002(Eurotium cristatus FBKL3.0002)，其形態(tài)特 征： 該菌株在CA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，25 °C7天直徑15-20 mm，14天25-30 mm;基部菌絲 薄，菌絲在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)1 一2 mm，在新菌落和老菌落的邊緣為橄欖淺黃色，中心部分顏色 較深，近于橄欖褐至丁香褐色;呈現(xiàn)大量黃色具飾菌絲，老后變成褐色；閉囊殼大量產(chǎn)生，黃 色；20天菌落直徑達(dá)50-60 mm，顏色全部變成褐橄欖色至丁香褐色，有極少量分生孢子結(jié) 構(gòu);菌落反面黑褐色。球狀閉囊殼正常成熟，達(dá)到150 μπι，分生孢子頭很少，反面和瓊脂深處 紅褐色，分生孢子頭非常疏松輻射狀，分生孢子梗短，光滑，無色，接近囊軸處7 -12 μπι，囊 軸球形或研棒形，直徑大多在15 - 20 μπι，小梗單層，3 · 0-3 · 5 X 5 · 0-7 · 0 μπι。分生孢子橢圓 形到近球形，可以清楚的看到小刺，通常在2.5-3.3 μπι到3.3-4.0 μπι，但是有3.5-5.0 μπι 的；閉囊殼球形到近球形，直徑100-200 wii，球形到近球形;子囊孢子雙凸鏡形，具兩個(gè)明 顯的縱向雞冠狀突起，寬約0.8-1 μπι，孢子體5-6 μπιΧ4-5 μπι，凸面不平粗糙，具尖疣。
[0008] 該菌種已于2015年8月5保藏到中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國(guó)武漢武漢 大學(xué)），保藏號(hào)：CCTCC NO :Μ2015479，名稱：冠突散囊菌FBKL3 · 0002(Eurotium cristatus FBKL3.0002)。
[0009] 本發(fā)明的一種冠突散囊菌FBKL3.0002(Eurotium cristatus FBKL3.0002)的分 離，包括以下步驟： (一）冠突散囊菌FBKL3.0002(Eurotium cristatus FBKL3.0002)的分離步驟： 從貴州某酒廠酒曲中，稱取10 g大曲樣品放入盛90 ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒 瓶中，振蕩約30 min。取1 mL樣品懸液進(jìn)行10倍梯度稀釋分別由10-4、10-5稀釋度的樣品懸 液中各取1 mL涂布于分離培養(yǎng)基上，30 °C靜止培養(yǎng)5 d，挑取單菌落進(jìn)一步篩選，斜面培 養(yǎng)基上保藏。
[0010](二)冠突散囊菌采用的培養(yǎng)基： 分離培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)，馬鈴薯浸粉5 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂 15 g/L，氯霉素0.1 g/L，pH5.8 - 6.2。
[0011] 保藏培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基。
[0012]鑒定培養(yǎng)基:查氏培養(yǎng)基(CA)，硝酸鈉3 g/L，磷酸氫二鉀1 g/L，硫酸鎂0.5 g/L， 氯化鉀0.5 g/L，硫酸亞鐵0.01 g/L，蔗糖30 g/L，瓊脂15 g/L。馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基， 馬鈴薯浸粉5 g/L，葡萄糖20 g/L，氯霉素0.1 g/L，pH5.8 - 6.2。
[0013] 固體發(fā)酵培養(yǎng)基:高粱麥粒培養(yǎng)基，高粱與小麥質(zhì)量比為1:1，小麥全部粉碎，高粱 整粒:碎粒質(zhì)量比為3:1，攪拌均勻，取30 g，加10 mL蒸餾水，攪拌均勻，121 °C滅菌20 min。
[0014] (三)菌種的保種和傳代： 保藏培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基 保存方法有3種： (1)傳代培養(yǎng)霉菌菌種保存法:將霉菌接種于Η)Α斜面培養(yǎng)基上，置溫箱7 d培養(yǎng)后，移 至4 °C冰箱保存，一般霉菌在4 °C冰箱內(nèi)可以保存1~6月。（2)砂土管霉菌菌種保存法:將 砂洗凈、烘干、過篩(60目篩），分裝于小試管中，砂的高度約1 cm，濕熱滅菌完成后，50 °C烘 干備用。將需要保藏的菌株并已培養(yǎng)充分的斜面培養(yǎng)物以無菌水制成1〇8~101°個(gè)/mL菌懸 液或孢子懸液滴入砂土管中與載體混勻，而后置于干燥器中抽真空約2~4 h，用火焰熔封 管口（或用石蠟封口），置于干燥器中，在4 °C保藏，保藏期可達(dá)1~10年。
[0015] (3)冷凍干燥霉菌菌種保存法:將待保存的微生物細(xì)胞或者孢子懸浮在合適的保 護(hù)劑中，使成1〇 8個(gè)/mL濃度，取0.1 mL至滅菌安瓿管中，隨即進(jìn)行速凍，然后在加有強(qiáng)力干 燥劑的容器中真空抽1 d左右，使其中冰水升華，最后熔封管口，置4 °C保藏，保藏期可達(dá)5 ~15年。
[0016] (四）菌種的生態(tài)特征： 該菌株在CA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，25 °C7天直徑15-20 mm，14天25-30 mm;基部菌絲 薄，菌絲在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)1 一2 mm，在新菌落和老菌落的邊緣為橄欖淺黃色，中心部分顏色 較深，近于橄欖褐至丁香褐色;呈現(xiàn)大量黃色具飾菌絲，老后變成褐色；閉囊殼大量產(chǎn)生，黃 色；20天菌落直徑達(dá)50-60 mm，顏色全部變成褐橄欖色至丁香褐色，有極少量分生孢子結(jié) 構(gòu);菌落反面黑褐色。
[0017](五)菌種的培養(yǎng)特性 (1) 培養(yǎng)溫度25 °C~35 °C，最適溫度28 °C~30 °C; (2) 培養(yǎng)pH 5.8~6.2;最佳范圍為pH4~6。
[0018] 閉囊殼球形或近球形，黃色，直徑100 - 200 μπι，成熟較快；子囊球形至近球形， 10-15 μπι;子囊孢子雙凸鏡形，具兩個(gè)明顯的縱向雞冠狀突起，寬約0.8-1 μπι，孢子體5- 6 μπιΧ4-5 μπι。分生孢子頭幼時(shí)球形，老后呈疏松放射形，直徑可達(dá)150 μπι，少數(shù)呈疏松短 柱形；分生孢子梗一般生自基質(zhì)，孢梗莖壁光滑;頂囊近球形或燒瓶形，直徑10-25 μπι;產(chǎn) 孢結(jié)構(gòu)單層，瓶梗著生于頂囊上半部;分生孢子橢圓形，少數(shù)近球形，4-4.8 μπιΧ3.2-4 μπι， 具小刺。根據(jù)《中國(guó)真菌志》描述，鑒定該菌株屬于散囊菌屬的冠突散囊菌（Eurotium cristatus strain)，取名為冠突散囊菌FBKL3.0002(Eurotium cristatus FBKL3.0002)。
[0019] 本發(fā)明的冠突散囊菌FBKL3.0002(Eurotium cristatus FBKL3.0002)對(duì)溫度、pH 等自然環(huán)境條件的適應(yīng)范圍廣，對(duì)不良環(huán)境的耐受力強(qiáng)，容易培養(yǎng)和保存及工業(yè)化生產(chǎn)，生 產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，不破壞生態(tài)平衡。
[0020]
【具體實(shí)施方式】
[0021 ] 1.冠突散囊菌FBKL3·0002(Eurotium cristatus FBKL3·0002)菌株分離方法： 從貴州某酒廠酒曲中，稱取10 g大曲樣品放入盛90 mL無菌水并帶有玻璃珠的三角燒 瓶中，振蕩約30 min。取1 mL樣品懸液進(jìn)行10倍梯度稀釋，分別由10-4、10-5稀釋度的樣品懸 液中各取1 mL涂布于分離培養(yǎng)基上，30 °C靜止培養(yǎng)5 d，挑取單菌落進(jìn)一步篩選，斜面培養(yǎng) 基上保減。
[0022] 2.菌株鑒定方法： 將已經(jīng)分離純化的菌株接種到CA培養(yǎng)基上，在25 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-20 d，觀察菌落的 形態(tài)特征，挑取少量菌體做前處理后，制片在S-3400N掃描電鏡下觀察菌絲及其孢子形態(tài)特 征，通過《中國(guó)真菌志》及相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定為冠突散囊菌（Eurotium cristatus strain)，取名為冠突散囊菌FBKL3.0002。
[0023] 3.菌株產(chǎn)花果香能力測(cè)定： 取培養(yǎng)7 d的散囊菌斜面試管一支用10 mL的無菌水洗下，然后以1%的接種量接入高粱 與小麥固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 °C培養(yǎng)7~9 d。進(jìn)行感官評(píng)定，具有花果香味，無霉味。通過 GC/MS對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物的易揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行分析，具有花果香味類物質(zhì)的相對(duì)含量占52.11%。
[0024] 表1冠突散囊菌GC-MS揮發(fā)性成分

【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種冠突散囊菌？8乩3.0002化1^〇丨丨11111(^丨8丨3加8?81^3.0002)，其特征在于所述 菌種的保藏號(hào)為:CCTCCN0:M2015479。2. 如權(quán)利要求1所述的冠突散囊菌FBKL3.0002在產(chǎn)花果香物質(zhì)中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種冠突散囊菌及其用途，其形態(tài)特征：該菌株在CA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢；基部菌絲薄，菌絲在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)1-2mm，在新菌落和老菌落的邊緣為橄欖淺黃色，中心部分顏色較深，近于橄欖褐至丁香褐色；呈現(xiàn)大量黃色具飾菌絲，老后變成褐色；閉囊殼大量產(chǎn)生，黃色；20天菌落直徑達(dá)50-60mm，顏色全部變成褐橄欖色至丁香褐色，有極少量分生孢子結(jié)構(gòu)；菌落反面黑褐色。本發(fā)明能促進(jìn)酒體風(fēng)味的產(chǎn)花果香類物質(zhì)。CCTCC NO：M201547920150805
【IPC分類】C12N1/14, C12R1/645, C12G3/02
【公開號(hào)】CN105483018
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510928693
【發(fā)明人】王曉丹, 邱樹毅, 陳琳琳, 徐佳
【申請(qǐng)人】貴州大學(xué)
【公開日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2015年12月15日