冠突散囊菌菌粉及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體地，涉及冠突散囊菌菌粉及其制備方法和應(yīng)用。更具 體，本發(fā)明涉及冠突散囊菌菌粉及其制備方法，冠突散囊菌菌粉在制備藥物、食品或飼料中 的用途、藥物、食品以及飼料。
【背景技術(shù)】
[0002] 冠突散囊菌（Eurotiumcristatum)作為一種散囊菌屬的真菌，俗稱為"金花"菌， 其生物學(xué)特性與一般真菌尤其是和曲霉、青霉等霉菌有高度的相似性。該菌菌絲體富含15 種氨基酸，其中包括所有的人體必需氨基酸。
[0003] 冠突散囊菌屬灰綠曲霉屬，分布廣泛，生長(zhǎng)基質(zhì)包括土壤、茯磚茶、冬蟲夏草、中藥 片和木屑。冠突散囊菌由子囊果和菌絲組成，子囊果即黃色球形或近球形閉囊殼，直徑約為 150~200iim，子囊果破裂釋放直徑為5iim的球形、近球形或雙凸鏡形子囊孢子，有寬約為 0. 8~I. 0iim的冠狀突起；菌絲直徑約8~10iim，呈白色，屬于冠突散囊菌。該菌為無(wú)性 型屬曲霉屬，稱為小冠曲霉，為同宗配合菌。在低滲透壓誘導(dǎo)下產(chǎn)有性孢子，在高滲透壓誘 導(dǎo)下產(chǎn)生無(wú)性孢子，在高滲透壓誘導(dǎo)下產(chǎn)生無(wú)性孢子。
[0004] 然而，目前關(guān)于冠突散囊菌的研究仍有待深入。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的 在于提出一種冠突散囊菌菌粉及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種制備冠突散囊菌菌粉的方法。根據(jù)本發(fā) 明的實(shí)施例，該方法包括：冠突散囊菌的培養(yǎng)；冠突散囊菌液體培養(yǎng)基的制備；以及冠突散 囊菌菌粉的制備。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用該方法能夠有效地制備冠突散囊菌菌粉。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述冠突散囊菌的培養(yǎng)包括以下步驟：將茯磚茶塊上的黃 色閉囊殼并接種于察氏培養(yǎng)基上，于28°C培養(yǎng)72h，以便獲得經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的黃色閉囊殼；將所 述經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的黃色閉囊殼平板劃線分離2~3次，以便獲得初步純化的菌落；將所述初步純 化的菌落置于無(wú)菌水中，振搖制成均勻的孢子懸液，并進(jìn)行10倍遞增稀釋，制成1〇_ 3~1〇_5 稀釋度的孢子懸液；將經(jīng)過(guò)稀釋的孢子懸液在空白查氏培養(yǎng)基上進(jìn)行平板涂布，然后置于 28°C下培養(yǎng)，以便獲得純培養(yǎng)菌落。由此，獲得的純培養(yǎng)菌落基本無(wú)其他雜菌生長(zhǎng)。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述冠突散囊菌液體培養(yǎng)基的制備包括以下步驟：將所 述純培養(yǎng)菌落制備成KT1~1〇_3稀釋度的孢子懸液，并將孢子濃度調(diào)整至I. 5XIO6~ 2. 0XIO6個(gè)/ml;將經(jīng)過(guò)孢子濃度調(diào)整的孢子懸液接種于液體CZG培養(yǎng)基中，于28°C，150r/ min條件下培養(yǎng)96h，以便獲得冠突散囊菌孢子懸液。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述冠突散囊菌菌粉的制備包括以下步驟：將所述孢子懸 液進(jìn)行離心處理，以便獲得菌泥；向所述菌泥中加入凍干保護(hù)劑，進(jìn)行凍干處理，以便獲得 冠突散囊菌菌粉。其中，凍干保護(hù)劑的成分和凍干條件不受特別限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以 根據(jù)具體情況靈活選擇。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，凍干保護(hù)劑由如下質(zhì)量百分比濃度的 物質(zhì)組成：谷氨酸鈉I.O~3. 0%、乳糖2. 3~3. 5%、海藻糖4~5%、脫脂乳20~24%，其 余為水；凍干條件為將乳化后的菌懸液預(yù)凍1~2小時(shí)、冷凝溫度-80~-40°C、真空度1~ 10Pa、凍干時(shí)間24~32小時(shí)。由此，能夠有效制備冠突散囊菌菌粉。
[0010] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種冠突散囊菌菌粉。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施 例，所述冠突散囊菌菌粉是通過(guò)前面所述的方法制備獲得的。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，對(duì)動(dòng)物提 供本發(fā)明的冠突散囊菌菌粉，能夠有效增強(qiáng)其免疫力，預(yù)防或治療糖尿病、高血脂或腫瘤等 疾病。
[0011] 在本發(fā)明的再一個(gè)方面，本發(fā)明提出了前面所述的冠突散囊菌菌粉在制備藥物、 食品或飼料中的用途。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述藥物、食品或飼料用于增強(qiáng)免疫力，預(yù)防 或治療糖尿病、高血脂或腫瘤等疾病。
[0012] 需要說(shuō)明的是，在本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"動(dòng)物"所指的動(dòng)物種類不受特別限制。根 據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該動(dòng)物可以為任何生命體，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選大鼠、小鼠、人，最優(yōu) 選人。在本文中所使用的表達(dá)方式"預(yù)防或治療"主要是指預(yù)防或輔助治療糖尿病、高血脂 或腫瘤等疾病。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了一種藥物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該藥物 包含：冠突散囊菌菌粉；以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的藥物能 夠有效用于增強(qiáng)免疫力，預(yù)防或治療糖尿病、高血脂或腫瘤等疾病。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，賦形劑的種類不受特別限制，只要能夠使藥物形成容易進(jìn) 行給藥的劑型即可。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，所述賦形劑為選自粘合劑、填料、涂膜聚 合物、增塑劑、助流劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑的至少一種。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的藥物的劑型不受特別限制，只要能夠便于進(jìn)行給 藥即可。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，所述藥物呈選自膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液 體、內(nèi)服膏劑、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。根據(jù)本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施例，所述 藥物呈膠囊劑的形式。由此，易于進(jìn)行給藥。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的藥物的給藥劑量不受特別限制，實(shí)際應(yīng)用中，可以 根據(jù)給藥對(duì)象的健康狀況靈活選擇。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，所述藥物的給藥劑量為不 低于4XIO4CFU冠突散囊菌Akg?d)。由此，被給藥動(dòng)物免疫力增強(qiáng)，血糖、血脂以及藥物 抑瘤率明顯降低，。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述藥物能夠發(fā)揮增強(qiáng)免疫力、降血糖、降血脂、抗腫瘤等 功效。因而，根據(jù)本發(fā)明的另一些實(shí)施例，所述藥物用于增強(qiáng)免疫力，預(yù)防或治療糖尿病、高 血脂或腫瘤。
[0018] 在本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還提供了一種食品。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該食品包 含：冠突散囊菌菌粉；以及食品學(xué)上可接受的添加劑。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的食品 能夠有效用于增強(qiáng)免疫力，預(yù)防或治療糖尿病、高血脂或腫瘤。
[0019] 需要說(shuō)明的是，在本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"食品"應(yīng)作廣義理解，其可以是任何可被 食用的形式，即除了常規(guī)的食品形式外，本發(fā)明的食品還可以為保健品、飲品等。在本文中 所使用的術(shù)語(yǔ)"給藥"應(yīng)作廣義理解，除了常規(guī)的藥物給藥外，針對(duì)食品或飼料時(shí)可以理解 為對(duì)動(dòng)物進(jìn)行飼喂或提供該食品。
[0020] 在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了一種飼料。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述飼料 包含冠突散囊菌菌粉。由此,對(duì)動(dòng)物提供本發(fā)明的飼料,能夠有效增強(qiáng)其免疫力，降低其血 糖、血脂以及藥物抑瘤率。
[0021] 此外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，包含冠突散囊菌菌粉的本發(fā)明的藥物、食品或飼料， 增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的作用優(yōu)于單一成分的黃芪、低聚果糖、殼寡糖或酵母葡聚糖的作用效果。
[0022] 還需要說(shuō)明的是，本發(fā)明的冠突散囊菌菌粉及其制備方法和用途，正是本發(fā)明的 發(fā)明人經(jīng)過(guò)艱苦的創(chuàng)造性勞動(dòng)和大量的實(shí)驗(yàn)工作才意外發(fā)現(xiàn)的。
[0023] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā) 明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的 文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件(例如參考J.薩姆布魯克等著，黃培堂等譯的《分子克隆實(shí)驗(yàn)指 南》，第三版，科學(xué)出版社）或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者， 均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品，例如可以采購(gòu)自Illumina公司。
[0025] 實(shí)施例1 :冠突散囊菌菌粉的制備
[0026] 冠突散囊菌的培養(yǎng)：
[0027] 用無(wú)菌接種針挑取茯磚茶塊上的黃色閉囊殼并接種于察氏培養(yǎng)基上，于30°C進(jìn)行 培養(yǎng)。待培養(yǎng)72h時(shí)，挑取少量黃色閉囊殼作平板劃線分離，經(jīng)2~3次平板劃線后該菌已 得到初步純化。待初步純化的菌落生長(zhǎng)處于旺盛期時(shí)，用接種環(huán)刮取黃色閉囊殼放入盛有 IOml無(wú)菌水的無(wú)菌小瓶?jī)?nèi)，振搖20min，制成均勻的孢子懸液并進(jìn)行10倍遞增稀釋，制成 KT3~KT5稀釋度的孢子懸液。
[0028] 用無(wú)菌吸管分別吸取0.Iml各稀釋度的孢子懸液在空白查氏培養(yǎng)基上進(jìn)行平板 涂布，然后置于30°C下培養(yǎng)。選取僅長(zhǎng)有1~2個(gè)單菌落的平板，該平板上的單菌落就是該 菌的純培養(yǎng)，觀察其菌落特征，并結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征。
[0029] 察氏培養(yǎng)基：硝酸鈉2g/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化鉀0? 5g/L，硫酸鎂0? 5g/L，硫酸 鐵 0? 01g/L，蔗糖 30g/L，瓊脂 15 ~20g/L。
[0030] 冠突散囊菌液體培養(yǎng)基的制備：
[0031] 將純培養(yǎng)菌落制備成KT1~KT3稀釋度的孢子懸液，然后對(duì)孢子懸液進(jìn)行血球計(jì) 數(shù)板計(jì)數(shù)，將孢子濃度調(diào)整至I. 5XIO6~2. 0XIO6個(gè)/ml。用移液器吸取Iml孢子懸液接 種于已經(jīng)制備好的裝有99ml液體CZG培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于30°C，150r/min進(jìn)行 培養(yǎng)96h，將菌液上樣于血球計(jì)數(shù)板在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行孢子計(jì)數(shù)。
[0032] CZG培養(yǎng)基：蔗糖40g/L，磷酸氫二鉀lg/L，硝酸氨3g/L，氯化鈉50g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，瓊脂 15 ~20g/L。
[0033] 冠突散囊菌菌粉的制備：
[0034] 將上述獲得的菌液加入離心管，5