結(jié)合肌肉生長抑制素的抗體、組合物和方法
【專利說明】結(jié)合肌肉生長抑制素的抗體、組合物和方法
[0001 ]本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2011年08月15日和發(fā)明名稱為"結(jié)合肌肉生長抑制素的抗體、 組合物和方法"的201180044739.7號(hào)發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 與相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0003] 本申請(qǐng)基于35 U.S.C.§119要求提交于2010年8月16日的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/ 374，095的權(quán)益，該申請(qǐng)通過引用并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0004] 本申請(qǐng)一般而言涉及肌肉生長抑制素及與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。特別地，本發(fā)明涉及 肌肉生長抑制素抑制劑及其用途。
[0005] 發(fā)明背景
[0006] 也被稱為肌肉生長抑制素的生長/分化因子8(⑶F-8)是TGF-β家族成員，其大部分 在發(fā)育中的和成人骨骼肌組織的細(xì)胞中表達(dá)。肌肉生長抑制素看起來在對(duì)骨骼肌生長的負(fù) 控制中發(fā)揮關(guān)鍵作用(McPherron等，Nature (London) 387，83-90( 1997))。肌肉生長抑制素 基因中的突變已被展示于多個(gè)物種中，包括牛、豬、狗和人，并且已導(dǎo)致產(chǎn)生增加的肌肉組 織（Kocamis和Killefer,Domestic Animal Endocrinology 23:447;2002)。此外，已顯不， 詰抗肌肉生長抑制素能在動(dòng)物中增加瘦肌肉的質(zhì)量(McFerron等，見上文；Zimmers等， Science 296:1486(2002))〇
[0007]已在人臨床試驗(yàn)中評(píng)估了肌肉生長抑制素拮抗劑。在具有多種形式的肌營養(yǎng)不良 癥的患者中評(píng)估了被稱為MY0-29的人抗體。使用該肌肉生長抑制素拮抗劑的早期臨床結(jié)果 展示出良好的安全性和耐受性，而在肌肉強(qiáng)度或功能方面沒有顯著的改善(但該研究沒有 被推動(dòng)以展示療效）；在有限數(shù)量的受試者中注意到趨向于肌肉尺寸增加的趨勢(shì)(Wagner 等，Ann. Neuro 1.63: 561; 2008)。在隨后的報(bào)道中，經(jīng)治療的患者中總的定量肌肉強(qiáng)度測量 沒有改善，但是若干患者顯示出單根肌纖維收縮特性的改善（Krivickas等，Muscle Nerv.39:3;2009)〇
[0008] 人們相信，對(duì)肌肉生長抑制素途徑的調(diào)控需要將潛在肌肉生長抑制素復(fù)合體加工 為成熟肌肉生長抑制素。潛在復(fù)合體是切割的前肽結(jié)構(gòu)域形成的，其與成熟C-末端二聚體 非共價(jià)連結(jié)并且沒有生物活性。認(rèn)為組織特異性因子負(fù)責(zé)將無活性復(fù)合體轉(zhuǎn)化為生物活性 形式。肌肉生長抑制素還與卵泡抑素相關(guān)基因（FLRG)和生長及分化相關(guān)的因子相關(guān)的血清 蛋白-1 (GASP-1)形成復(fù)合體，這兩種復(fù)合體均已在血清中被鑒定。
[0009] 成熟的肌肉生長抑制素以高親和性與活性IIB型受體(ActRIIB)結(jié)合，并以較低的 親和性與激活素(activin)受體(ActRIIA)結(jié)合。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞通過二聚肌肉生長抑制素 與ActRIIB的結(jié)合接著募集低親和性I型受體（激活素樣激酶4(ALK4)或激活素樣激酶5 (ALK5))而啟動(dòng)。I型受體的磷酸化導(dǎo)致負(fù)責(zé)肌肉生長抑制素生物作用的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞途 徑的啟動(dòng)。
[0010] 肌肉生長抑制素拮抗劑的體內(nèi)利用已不僅被牽連于肌肉生長抑制素途徑的調(diào)控 和信號(hào)傳遞本質(zhì)，還被牽連于肌肉生長抑制素與生長和分化因子11(GDF-11;也被稱為骨形 態(tài)形成蛋白11或BMP-11)的高度相似性，該因子在活性結(jié)構(gòu)域中在氨基酸水平上與肌肉生 長抑制素90%相同。雖然在信號(hào)傳遞機(jī)制中的高度序列同一性和相似性暗示肌肉生長抑制 素和GDF-11共享某些功能，但對(duì)這兩種TGF-β家族成員的靶向基因破壞卻顯示非常不同的 結(jié)果。肌肉生長抑制素敲除小鼠顯示肌纖維的增生和肥大，而GDF-11敲除小鼠則在出生后 很快死亡并且具有大量的異常；雙敲除動(dòng)物顯示在單敲除小鼠中未觀察到的額外異常 (McPherron等，BMC Dev Biol .9:24;2009)〇
[0011] 因此，本領(lǐng)域中仍需要結(jié)合肌肉生長抑制素并且拮抗其活性、同時(shí)消除或最小化 抑制其和相關(guān)途徑的不利作用的試劑。
[0012] 附圖簡述
[0013] 圖1描述了給予肌肉生長抑制素抑制劑(抗肌肉生長抑制素抗體12A5-5,實(shí)心菱 形）的小鼠與對(duì)照(PBS;空心圓）相比的總體重，如實(shí)施例4所示。
[0014]圖2展示了通過核磁共振(NMR)測定的第4周的瘦體質(zhì)量的改變。
[0015] 圖3展示了具有指定的分子內(nèi)和分子間二硫鍵的成熟形式的人肌肉生長抑制素的 氨基酸序列。二硫鍵 〇7815-〇7874、〇7843-〇78106和〇7847_〇78108形成胱氨酸結(jié)(1〇1〇1:)結(jié) 構(gòu)。
[0016] 圖4描述了肽G-級(jí)結(jié)構(gòu)，其顯示二硫鍵將四個(gè)LycC肽連接到一起形成胱氨酸結(jié)， 另一個(gè)二硫鍵將兩個(gè)55-78序列在Cys73連接到一起。肽G顯示與抗體結(jié)合。
[0017] 圖5展示了肽N-級(jí)結(jié)構(gòu)，其顯示二硫鍵將四個(gè)糜蛋白酶肽連接到一起形成胱氨酸 結(jié)，另一個(gè)二硫鍵將兩個(gè)63-82序列在Cys73連接到一起。肽N不結(jié)合抗體。
[0018] 圖6代表了針對(duì)非還原和tcep還原肽樣品的BIAcore?競爭檢驗(yàn)的結(jié)果。肽A、c、 E、G、0和P全部能結(jié)合抗體12A5-5由此防止12A5-5結(jié)合成熟肌肉生長抑制素。測試的其他肽 (包括來自肽G和肽N的TCEP還原的那些，胱氨酸結(jié)糜蛋白酶肽)均不顯示與抗體結(jié)合。、
[0019] 圖7描述了針對(duì)肽A、C、E和G以及肌肉生長抑制素的直接BIAcore?結(jié)合檢驗(yàn)的 結(jié)果。
[0020] 圖8代表了源于肌肉生長抑制素/卵泡抑素復(fù)合體的共結(jié)晶結(jié)構(gòu)的肌肉生長抑制 素二聚體和單體的結(jié)構(gòu)(Cash等，見下文）。示出了參與二硫鍵的Cys殘基，以及被認(rèn)為對(duì)于 12A5-5的結(jié)合來說重要的區(qū)域中的另外的氨基酸殘基（以陰影長菱形示出）。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021] 本發(fā)明提供了一種分離的肌肉生長抑制素特異性抗體，其以小于ΙΟΟρΜ的Kd結(jié)合 肌肉生長抑制素。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種分離的肌肉生長抑制素特異性抗 體，其以小于1〇〇ρΜ的Kd結(jié)合肌肉生長抑制素并且以高于10nM的Kd結(jié)合GDF-11。在另一實(shí)施 方式中，本發(fā)明提供了一種分離的肌肉生長抑制素特異性抗體，其以是其對(duì)GDF-11的親和 性至少5000倍高的親和性結(jié)合肌肉生長抑制素。在又一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種分 離的肌肉生長抑制素特異性抗體，其展示出針對(duì)肌肉生長抑制素的選擇性，該選擇性是針 對(duì)GDF-11的至少5000倍高。
[0022] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種分離的肌肉生長抑制素特異性抗體，其結(jié)合肌 肉生長抑制素并且阻礙肌肉生長抑制素與ALK4的相互作用。在另一方面，提供了一種分離 的肌肉生長抑制素特異性抗體，其結(jié)合肌肉生長抑制素并阻礙肌肉生長抑制素與ALK4的相 互作用但是與肌肉生長抑制素 /ActRIIA復(fù)合體和/或肌肉生長抑制素 /ActRIIB復(fù)合體共結(jié) 合。
[0023] 在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離的肌肉生長抑制素特異性抗體，其結(jié)合肌 肉生長抑制素，其中肌肉生長抑制素中對(duì)于肌肉生長抑制素與肌肉生長抑制素特異性拮抗 劑的結(jié)合所需的兩個(gè)區(qū)域位于成熟肌肉生長抑制素 （SEQ ID N0: 25)的第21至31位和第50 至60位附近的序列。還提供了一種分離的肌肉生長抑制素特異性抗體，其與肌肉生長抑制 素中位于成熟肌肉生長抑制素的第21至31位和第50至60位附近的序列的兩個(gè)區(qū)域相互作 用，以防止這些區(qū)域內(nèi)肽鍵的糜蛋白酶切割。
[0024] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，肌肉生長抑制素特異性拮抗劑是包含至少一條輕鏈 和至少一條重鏈的抗體，其中輕鏈包含恒定區(qū)和含有三個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)（CDRs)的可變區(qū)， 并且重鏈包含恒定區(qū)和含有三個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)（CDRs)的可變區(qū)。該實(shí)施方式可并入本發(fā)明 的前述實(shí)施方式和/或方面中的一種或多種。在某些實(shí)施方式中，重鏈和輕鏈CDRs的序列是 如本文中所公開的。在一種實(shí)施方式中，輕鏈⑶Rs是SEQ ID N0:10中公開的那些，并且重鏈 CDRs是SEQ ID N0:20中公開的那些。在另一實(shí)施方式中，輕鏈CDRs選自SEQ ID NO: 1中公開 的輕鏈CDRs、SEQIDN0:2中公開的輕鏈CDRs、SEQIDN0:3中公開的輕鏈CDRs、SEQIDN0: 4中公開的輕鏈CDRs、SEQ ID N0:5中公開的輕鏈CDRs、SEQ ID N0:6中公開的輕鏈CDRs、SEQ ID NO: 7中公開的輕鏈CDRs、SEQ ID NO: 8中公開的輕鏈CDRs和SEQ ID NO: 9中公開的輕鏈 CDRs構(gòu)成的組；以及重鏈CDRs選自SEQ ID NO: 11中公開的重鏈CDRs、SEQ ID NO: 12中公開 的重鏈CDRs、SEQIDN0:13中公開的重鏈CDRs、SEQIDN0:14中公開的重鏈CDRs、SEQID N0 :15中公開的重鏈CDRs、SEQIDN0:16中公開的重鏈CDRs、SEQIDN0:17中公開的重鏈 CDRs、SEQ ID NO: 18中公開的重鏈CDRs和SEQ ID NO: 19中公開的重鏈CDRs構(gòu)成的組。
[0025] 在某些實(shí)施方式中，重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的序列是如本文所公開的。在一種 實(shí)施方式中，輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID N0:10中示出的氨基酸序列，重鏈可變區(qū)包含SEQ ID N0:20中示出的氨基酸序列。在另一實(shí)施方式中，輕鏈可變區(qū)選自SEQ ID NO: 1中公開的輕 鏈可變區(qū)、SEQ ID NO: 2中公開的輕鏈可變區(qū)、SEQ ID NO: 3中公開的輕鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:4中公開的輕鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:5中公開的輕鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:6中公開的輕鏈 可變區(qū)、SEQ ID N0:7中公開的輕鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:8中公開的輕鏈可變區(qū)和SEQ ID N0:9中公開的輕鏈可變區(qū)構(gòu)成的組，并且重鏈可變區(qū)選自SEQ ID NO: 11中公開的重鏈可變 區(qū)、SEQ ID N0:12中公開的重鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:13中公開的重鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:14 中公開的重鏈可變區(qū)、SEQ ID NO: 15中公開的重鏈可變區(qū)、SEQ ID NO: 16中公開的重鏈可 變區(qū)、SEQ ID N0:17中公開的重鏈可變區(qū)、SEQ ID N0:18中公開的重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 19中公開的重鏈可變區(qū)構(gòu)成的組。
[0026] 還提供了前述抗體的變體。在一種實(shí)施方式中，變體抗體與抗體之一（例如抗體 12A5-5)90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% 相同。在另一實(shí)施方式 中，變體抗體與前述抗體(例如12A5-5)在一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九 個(gè)或十個(gè)氨基酸殘基處不同（通過氨基酸的取代或缺失）。在另一實(shí)施方式中，一個(gè)(或多 個(gè))氨基酸被翻譯后修飾(例如通過環(huán)化或轉(zhuǎn)化為另外的氨基酸;和/或通過脫酰胺化、異構(gòu) 化、糖化和/或氧化）。
[0027 ] 在本發(fā)明的又一方面，抗體輕鏈恒定區(qū)選自κ和λ輕鏈構(gòu)成的組，并且重鏈恒定區(qū) 選自μ、δ、γ、α和ε重鏈恒定區(qū)構(gòu)成的組。又一實(shí)施方式提供了一種抗體，所述抗體屬于選自 IgGl、IgG2、IgG3和IgG4構(gòu)成的組的亞類。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的這些方面可同等應(yīng)用于之前 描述的方面和實(shí)施方式。
[0028] 本發(fā)明還提供了編碼任何前述肌肉生長抑制素特異性拮抗劑的分離的核酸、以及 包含此類核酸的載體、用此類載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的分離的宿主細(xì)胞和用于生產(chǎn)肌肉生長抑制 素特異性拮抗劑的方法，所述方法包括在促進(jìn)表達(dá)的條件下培養(yǎng)此類宿主細(xì)胞以及從培養(yǎng) 基中回收肌肉生長抑制素特異性拮抗劑。還提供了包含前文描述的肌肉生長抑制素特異性 拮抗劑和生理上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑的組合物，以及抑制肌肉生長抑制素的至 少一種活性的方法，所述方法包括將此類組合物施用至個(gè)體使得肌肉生長抑制素的至少一 種活性被部分或完全抑制。
[0029] 在本發(fā)明的另外一些實(shí)施方式中，個(gè)體患有選自下述病況構(gòu)成的組的病況:性功 能減退(包括雄激素剝奪療法導(dǎo)致的性功能減退，和年齡相關(guān)的性腺機(jī)能減少導(dǎo)致的性功 能減退），惡病質(zhì)；心源性惡病質(zhì)；腎源性惡病質(zhì)，心臟萎縮；心發(fā)育不良；心衰（heat failure);肌肉減少癥;外傷性骨折;骨質(zhì)疏松性骨折;骨損失（例如骨質(zhì)疏松癥或骨質(zhì)減 少）；阿狄森氏?。患∥s性側(cè)索硬化或運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病(ALS ;MND;盧格里格?。回悹柭楸?(和/或面部神經(jīng)問題）；肉毒桿菌中毒;腦性麻痹;進(jìn)行性神經(jīng)性腓骨肌萎縮癥(〇^^〇卜 Marie-Tooth disease)和其它外周神經(jīng)病;庫欣綜合征;糖尿病性神經(jīng)病;格林-巴利綜合 征；多發(fā)性硬化;肌萎縮(包括進(jìn)行性肌萎縮和脊髓性肌萎縮）；肌營養(yǎng)不良癥(其有多種形 式;包括Becker型肌營養(yǎng)不良，先天性肌營養(yǎng)不良，Duchenne型肌營養(yǎng)不良，遠(yuǎn)端型肌營養(yǎng) 不良，Emery-Dreifuss型肌營養(yǎng)不良，面肩肱型肌營養(yǎng)不良癥，肢帶型肌營養(yǎng)不良癥，強(qiáng)直 性肌營養(yǎng)不良癥，眼咽型肌營養(yǎng)不良，脊髓性肌萎縮，131'0￥11-'\^3161：1：0-'\^111^6代綜合征 (BVVL)、Fazi 〇-L〇nde(FL)綜合征和特征在于進(jìn)行性骨骼肌無力的其它綜合征，肌肉蛋白質(zhì) 中的缺陷，以及肌肉細(xì)胞和組織的死亡）；重癥肌無力；脊髓灰質(zhì)炎；多肌炎;肌肉、肌腱和/ 或韌帶的扭傷和拉傷；中風(fēng)(和其他導(dǎo)致肌肉消耗的病況，例如長期不活動(dòng)或臥床，肢固定 (例如通過打石膏和/或上夾板)和太空飛行）；和可通過生長激素、胰島素生長因子-UIGF-1)、生長激素促分泌素和與激素-IGF-1軸相關(guān)的其他試劑治療的病況。
[0030] 發(fā)明詳述
[0031 ]本發(fā)明提供了與和肌肉生長抑制素結(jié)合(例如抗肌肉生長抑制素抗體、抗體片段 和抗體衍生物)并且至少抑制肌肉生長抑制素的生物活性的分子相關(guān)的組合物、試劑盒和 方法。在本文中使用時(shí)，術(shù)語"肌肉生長抑制素拮抗劑"與"肌肉生長抑制素抑制劑"可互換 使用。根據(jù)本發(fā)明的肌肉生長抑制素拮抗劑抑制或阻礙肌肉生長抑制素的至少一種活性， 或者，阻礙肌肉生長抑制素或其受體的表達(dá)?？蓪?shí)現(xiàn)對(duì)肌肉生長抑制素活性的抑制或阻礙， 例如通過利用一種或多種干擾肌肉生長抑制素與其受體的結(jié)合和/或阻礙肌肉生長抑制素 與其受體的結(jié)合導(dǎo)致的信號(hào)傳導(dǎo)的抑制性試劑來實(shí)現(xiàn)。拮抗劑包括與肌肉生長抑制素自身 結(jié)合的試劑，或者與肌肉生長抑制素受體結(jié)合的試劑。例如，肌肉生長抑制素拮抗劑包括但 不限于：卵泡抑素、肌肉生長抑制素前結(jié)構(gòu)域(prodomain)、生長和分化因子ll(GDF-ll)前 結(jié)構(gòu)域、前結(jié)構(gòu)域融合蛋白質(zhì)、與肌肉生長抑制素結(jié)合的拮抗性抗體、與激活素 IIB型受體 結(jié)合的拮抗性抗體或抗體片段、可溶性激活素 IIB型受體、可溶性激活素 IIB型受體融合蛋 白質(zhì)、可溶性肌肉生長抑制素類似物(可溶性配體）、寡核苷酸、小分子、肽性模擬物和肌肉 生長抑制素結(jié)合試劑。這些在下文中被更詳細(xì)地描述。
[0032] 本發(fā)明還提供了包含編碼與肌肉生長抑制素結(jié)合的多肽的全部或部分的核苷酸 序列的核酸及其衍生物和片段，例如，編碼抗肌肉生長抑制素抗體、抗體片段或抗體衍生物 的全部或部分的核酸;包含此類核酸的質(zhì)粒和載體，以及包含此類核酸和/或載體和質(zhì)粒的 細(xì)胞或細(xì)胞系。提供的方法包括，例如，制造、鑒定或分離與肌肉生長抑制素結(jié)合的分子(例 如抗肌肉生長抑制素抗體)的方法，測定分子是否與肌肉生長抑制素結(jié)合的方法，制造包含 與肌肉生長抑制素結(jié)合的分子組合物例如藥物組合物的方法，以及用于將結(jié)合肌肉生長抑 制素的分子施用至受試者的方法，例如，用于治療由肌肉生長抑制素介導(dǎo)的病況或用于體 內(nèi)或體外拮抗(或抑制)肌肉生長抑制素的生物活性的方法。肌肉生長抑制素的一種此類生 物活性是與肌肉生長抑制素受體的結(jié)合;另一種此類活性是對(duì)骨骼肌生長的負(fù)調(diào)控。
[0033] 使用標(biāo)準(zhǔn)的單字母或三字母縮寫來示出多核苷酸和多肽序列。除非另有指明，每 條多肽序列具有左邊的氨基末端和右邊的羧基末端;每條單鏈核酸序列以及每條雙鏈核酸 序列的第一鏈(top strand)在左邊具有5'末端以及在右邊具有3'末端。還可通過解釋與參 照序列有何不同來描述特定的多肽或多核苷酸序列。
[0034] 除非另有指明，用于本發(fā)明的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語將具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常 理解相同的含義。此外，除非上下文另有要求，單數(shù)術(shù)語將包括多數(shù)，并且復(fù)數(shù)術(shù)語將包括 單數(shù)。通常，本文描述的與細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)和蛋白 質(zhì)及核酸化學(xué)和雜交相關(guān)使用的命名法和技術(shù)是本領(lǐng)域中公知和常用的那些。
[0035] 除非另有指明，本發(fā)明的方法和技術(shù)通常是根據(jù)本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法進(jìn)行 的，并且如在本申請(qǐng)文件中通篇提到和討論的多篇一般性和更具體的參考文獻(xiàn)所述。見例 如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press , Cold Spring Harbor ,N·Y·(1989)和Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates(1992)，和Harlow和 Lane Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor，N.Y. (1990)，其通過引用并入本文。酶反應(yīng)和純化技術(shù)按照廠商說明、如本 領(lǐng)域通常進(jìn)行的那樣或如本文所述來進(jìn)行。本文所述的與分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)藥 和制藥化學(xué)相關(guān)使用的術(shù)語是本領(lǐng)域公知和常用的那些。可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行化學(xué)合成、 化學(xué)分析、藥物制備、配方和遞送以及對(duì)患者的治療。
[0036] 除非另有指明，下述術(shù)語應(yīng)當(dāng)被理解為具有下述含義。
[0037] 術(shù)語"分離的分子"（其中分子例如是多肽、多核苷酸或抗體)是由于其來源或衍生 的來源而（1)不與在其天然狀態(tài)下伴隨其的天然連結(jié)的組分連結(jié)，（2)基本上不含來自相同 物種的其它分子，（3)通過來自不同物種的分子表達(dá)或(4)沒有人工干預(yù)時(shí)在自然界不存在 的分子。因此，化學(xué)合成的、或在不同于其天然來源的細(xì)胞的細(xì)胞體系中合成的分子將是與 其天然連結(jié)的組分分離的。還可使用本領(lǐng)域公知的純化技術(shù)通過分離而是分子基本上不含 天然連結(jié)的組分?？赏ㄟ^本領(lǐng)域公知的多種手段來檢驗(yàn)分子純度或同質(zhì)性(homogeneity)。 例如，可使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)，使用聚丙烯酰胺凝膠電泳以及對(duì)凝膠染色以觀察多肽，來 檢驗(yàn)多肽樣品的純度。就某些目的而言，可通過使用HPLC或本領(lǐng)域公知用于純化的其它手 段來提供更高的分辨力。
[0038] 術(shù)語"肌肉生長抑制素抑制劑"和"肌肉生長抑制素拮抗劑"可互換使用。每種均為 可檢測到抑制肌肉生長抑制素的至少一種功能的分子。相反，"肌肉生長抑制素激動(dòng)劑"是 可檢測到增加肌肉生長抑制素的至少一種功能的分子。肌肉生長抑制素抑制劑導(dǎo)致的抑制 無須是完全的，只要其可檢測到即可，例如通過使用檢驗(yàn)來檢測?？墒褂脤?duì)肌肉生長抑制素 功能的任何檢驗(yàn)，其例子提供于本文?？杀患∪馍L抑制素抑制劑抑制(或可被肌肉生長抑 制素激動(dòng)劑增加）的肌肉生長抑制素的功能的例子包括與肌肉生長抑制素受體(或表達(dá)此 類受體的細(xì)胞)的結(jié)合，和對(duì)骨骼肌生長的負(fù)調(diào)控。肌肉生長抑制素抑制劑和肌肉生長抑制 素激動(dòng)劑的類型的例子包括但不限于:肌肉生長抑制素結(jié)合多肽，例如抗原結(jié)合蛋白質(zhì)(例 如肌肉生長抑制素抗原結(jié)合蛋白質(zhì)）、抗體、抗體片段和抗體衍生物。
[0039] 術(shù)語"肽"、"多肽"和"蛋白質(zhì)"均表示包含通過肽鍵互相相連的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸 殘基的分子。這些數(shù)據(jù)包括例如天然和人工蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段和蛋白質(zhì)序列的多肽類似 物(例如突變蛋白質(zhì)、變體和融合蛋白質(zhì)）以及經(jīng)翻譯后修飾或共