從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭iii對(duì)照品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種分離純化技術(shù)，尤其是一種從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭III 對(duì)照品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫杉醇自1992年美國FDA批準(zhǔn)臨床應(yīng)用以來，便以它獨(dú)特的作用機(jī)制，確切的療 效和副作用較小的特點(diǎn)在國際抗腫瘤藥物研究領(lǐng)域聲名鵲起，成為治療晚期卵巢癌、乳癌、 非小細(xì)胞肺癌和Kaposi'S肉瘤等惡性腫瘤的頭號(hào)藥物。
[0003] 然而，天然紫杉醇在紅豆杉中的含量極低，僅為0. 001-0. 002%，提取1公斤的天然 紫杉醇要消耗紅豆杉樹皮30噸。而與紫杉醇母核結(jié)構(gòu)極為相似的巴卡亭-III和10-去乙 ?；涂ㄍII(10-DABIII)在紅豆杉枝葉中含量豐富，同時(shí)在紫杉類其他植物中也發(fā) 現(xiàn)其大量存在，這樣就給紫杉醇的半合成提供了便利條件，其方法是人工合成紫杉醇的苯 基異絲氨酸側(cè)鏈，將其與植物提取物巴卡亭-III或10-去乙酰基巴卡亭III(10-DABIII) 進(jìn)行對(duì)接獲得紫杉醇類化合物。
[0004] 從貴州紅豆杉的分布面積可以看出，南方紅豆杉較紅豆杉的分布范圍廣。但目前 對(duì)貴州產(chǎn)南方紅豆杉的化學(xué)成分研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。如何從貴州產(chǎn)南方紅豆杉植物中獲得 巴卡亭類化合物，是需要解決的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭III對(duì) 照品的方法，它能從貴州產(chǎn)南方紅豆杉植物中分離獲得純度極高的巴卡亭III。
[0006] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭III對(duì)照品的方法，包括 如下步驟： 1) 取南方紅豆杉枝葉，將枝葉晾干后，再將其粉碎，獲得干燥的碎料；將干燥的碎料采 用石油醚進(jìn)行預(yù)處理后，再用甲醇進(jìn)行浸漬，在浸漬的同時(shí)進(jìn)行攪拌、超聲，將浸漬液過濾， 再將濾液減壓濃縮，獲得濃縮液，將濃縮液用正己烷反復(fù)萃取之后，再蒸干制成浸膏； 2) 將步驟1)中制得的浸膏用氯仿/水反復(fù)抽提6次，萃取分液，得到氯仿的抽提物， 將抽提物與硅膠按1:10的質(zhì)量比，以體積比為15:1的石油醚-氯仿為洗脫劑進(jìn)行梯度洗 脫，加壓柱層析，收集含巴卡亭III極性相近的混合物，收集的Rf值的范圍是在巴卡亭III 標(biāo)準(zhǔn)品Rf值±0. 2的范圍，分離得到粗分離物； 3) 將粗分離物加硅膠，首次加入的原料與細(xì)分離的硅膠的質(zhì)量比為1:10,以體積比為 12:1的石油醚-氯仿為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，加壓柱層析，收集含巴卡亭III極性非常接近 的混合物，收集的Rf值的范圍是在巴卡亭III標(biāo)準(zhǔn)品Rf值±0. 1的范圍，分離得到細(xì)分離 物； 4) 將細(xì)分離物中加入丙酮，細(xì)分離物與丙酮的體積比為1:10,以甲醇和水為流動(dòng)相洗 脫，甲醇與水的體積為80:20,流速為8mL/min，同時(shí)以紫外分光光度計(jì)檢測，洗脫段流出液 在波長237nm出峰，對(duì)照巴卡亭III標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，確定巴卡亭III的吸收峰，收集得到純度 為99. 1%的巴卡亭III對(duì)照品。
[0007] 巴卡亭III為白色粉末，熔點(diǎn)191.5-191.9 °C，紫外吸收峰為237nm，可溶于甲 醇、乙醇、丙酮，不溶于水，其分子式為，分子量為，結(jié)構(gòu)式為：
由于采用了上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以南方紅豆杉枝葉制成浸膏；然后 用氯仿/水反復(fù)抽提浸膏，萃取分液，得到氯仿的抽提物，抽提物用正相硅膠柱粗分離得到 粗分離物；粗分離物再用正相硅膠柱細(xì)分離得到細(xì)分離物；細(xì)分離物采用高效液相色譜分 離制備得到巴卡亭III對(duì)照品，純度為99. 1%符合含量測定用中藥化學(xué)對(duì)照品的要求。
【附圖說明】
[0008] 附圖1及附圖2為本發(fā)明的實(shí)施例1的巴卡亭III核磁譜圖； 附圖3為本發(fā)明的實(shí)施例1的巴卡亭III高效液相圖。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 本發(fā)明的實(shí)施例：從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭III對(duì)照品的方法，包括如下 步驟： 1) 取l〇〇g南方紅豆杉枝葉，將干燥(晾干）的枝葉進(jìn)行粉碎，獲得碎料；將干燥的碎料 采用1L石油醚進(jìn)行浸泡脫脂（以除去大量存在的此類非極性雜質(zhì)），再用4L甲醇進(jìn)行冷浸， 在浸漬的同時(shí)進(jìn)行攪拌、超聲1小時(shí)，自然冷卻半小時(shí)；反復(fù)3次（自然冷卻的目的是避免因 攪拌和超聲使溶液溫度過高而產(chǎn)生高溫萃取)，將浸漬液過濾，將濾液減壓濃縮至150mL， 獲得濃縮液，將濃縮液用100mL正己烷反復(fù)萃取3次之后，棄去正己烷層，萃取液旋干溶 劑，制成浸膏； 2) 將步驟1)中制得的浸膏用氯仿/水反復(fù)抽提6次，萃取分液，得到氯仿的抽提物， 將l〇g抽提物與300-400目的硅膠100g混合均勻，以體積比為15:1的石油醚-氯仿為洗 脫劑進(jìn)行梯度洗脫，加壓柱層析，收集含巴卡亭III極性相近的混合物，收集的Rf值的范圍 是在巴卡亭III標(biāo)準(zhǔn)品Rf值±0. 2的范圍，分離得到粗分離物約lg; 3) 將lg粗分離物與300-400目的硅膠10g混合均勻，以體積比為12:1的石油醚-氯 仿為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，加壓柱層析，收集含巴卡亭III極性非常接近的混合物，收集的 Rf值的范圍是在巴卡亭III標(biāo)準(zhǔn)品Rf值±0. 1的范圍，分離得到細(xì)分離物〇. 2g; 4) 將0. 2細(xì)分離物中加入丙酮，細(xì)分離物與丙酮的體積比為1:10,以甲醇和水為流 動(dòng)相洗脫，甲醇與水的體積為80:20,流速為8mL/min，同時(shí)以紫外分光光度計(jì)檢測，柱子為 HederacC1S 200mm，洗脫段流出液在波長237nm顯示1個(gè)強(qiáng)度很高的吸收峰，對(duì)照巴卡 亭III標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，確定巴卡亭IV的吸收峰，收集得到純度為99. 1%的巴卡亭III對(duì)照品 25mg〇
[0010] 核磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下,Η NMR (⑶Cl3，400 MHz) 1.10 (s, 6H), 1.66 (s, 3H), 1.82-1.89 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.17 (s, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.28 (s, 6H), 2.51-2.59 (m, 1H), 3.87 (d, / = 8.0 Hz, 1H), 4.15 (d, / = 8. 0 Hz, 1H), 4. 30 (d, / = 8. 0 Hz, 1H), 4. 44-4. 48 (m, 1H), 4. 85-4. 89 (m, 1H), 4.98 (d, /= 8.0 Hz, 1H), 5.61 (d, / = 8.0 Hz, 1H), 6.32 (s, 1H), 7.46-7.50 (m, 2H)，7. 59-7.63 (m, 1H)，8.08-8. 10 (m, 2H) ; 13C NMR (CDC13, 100 MHz)δ： 9. 4,15. 6, 20. 9, 22. 5, 26. 9, 35. 5, 38. 6, 42. 6, 46. 1, 58. 6, 67. 8, 72. 2, 74. 8, 76.2, 79.0, 80.6, 84.4, 128.6, 129.2, 130.0, 131.6, 133.6, 146.5, 167.0, 170.6, 171.3, 204.2; HRMS (ESI) Calcd. for C33H40Na012 [M+Na] + : 651.2417; Found: 651.2419〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭III對(duì)照品的方法，其特征在于：包括如下步 驟： 1) 取南方紅豆杉枝葉，將枝葉晾干后，再將其粉碎，獲得干燥的碎料；將干燥的碎料采 用石油醚進(jìn)行預(yù)處理后，再用甲醇進(jìn)行浸漬，在浸漬的同時(shí)進(jìn)行攪拌、超聲，將浸漬液過濾， 再將濾液減壓濃縮，獲得濃縮液，將濃縮液用正己烷反復(fù)萃取之后，再蒸干制成浸膏； 2) 將步驟1)中制得的浸膏用氯仿/水反復(fù)抽提6次，萃取分液，得到氯仿的抽提物， 將抽提物與硅膠按1:10的質(zhì)量比，以體積比為15:1的石油醚-氯仿為洗脫劑進(jìn)行梯度洗 脫，加壓柱層析，收集含巴卡亭III極性相近的混合物，收集的Rf值的范圍是在巴卡亭III 標(biāo)準(zhǔn)品Rf值±0. 2的范圍，分離得到粗分離物； 3) 將粗分離物加硅膠，首次加入的原料與細(xì)分離的硅膠的質(zhì)量比為1:10,以體積比為 12:1的石油醚-氯仿為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，加壓柱層析，收集含巴卡亭III極性非常接近 的混合物，收集的Rf值的范圍是在巴卡亭III標(biāo)準(zhǔn)品Rf值±0. 1的范圍，分離得到細(xì)分離 物； 4) 將細(xì)分離物中加入丙酮，細(xì)分離物與丙酮的體積比為1:10,以甲醇和水為流動(dòng)相洗 脫，甲醇與水的體積為80:20,流速為8mL/min，同時(shí)以紫外分光光度計(jì)檢測，洗脫段流出液 在波長237nm出峰，對(duì)照巴卡亭III標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，確定巴卡亭III的吸收峰，收集得到純度 為99. 1%的巴卡亭III對(duì)照品。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從南方紅豆杉植物中提取巴卡亭III對(duì)照品的方法。以南方紅豆杉枝葉制成浸膏；然后用氯仿/水反復(fù)抽提浸膏，萃取分液，得到氯仿的抽提物，抽提物用正相硅膠柱粗分離得到粗分離物；粗分離物再用正相硅膠柱細(xì)分離得到細(xì)分離物；細(xì)分離物采用高效液相色譜分離制備得到巴卡亭III對(duì)照品，純度為99.1%符合含量測定用中藥化學(xué)對(duì)照品的要求。
【IPC分類】C07D305/14
【公開號(hào)】CN105418543
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510864915
【發(fā)明人】劉雄利, 余章彪, 張敏, 田民義, 劉雄偉
【申請(qǐng)人】貴州大學(xué)
【公開日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年12月1日