經(jīng)歷后續(xù)[2+2]環(huán)加成的自由基正離 子。因此，無論是經(jīng)過還原淬滅循環(huán)（reductive quenching cycle)還是氧化淬滅循環(huán)， Ru*(bpy)32+均證明為烯烴的[2+2]光環(huán)加成的有力光氧化還原催化劑（艾斯查等，2008 ; 2010;杜等，2009 (Ischay et al·，2008 ;2010;Du et al·，2009))。其雙途徑光催化機(jī)制 使Ru(bpy)32+成為可進(jìn)行缺電子烯烴和富電子烯烴兩者的[2+2]環(huán)加成的多功能光催化劑 (圖12)。所述優(yōu)點(diǎn)提供了廣泛的缺電子烯烴和富電子烯烴兩者，從其中可篩選和優(yōu)化可用 于設(shè)計(jì)和合成AdoMet類似物的合適的含雙鍵種類。當(dāng)通過使用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶和這樣的 AdoMet類似物作為底物將光反應(yīng)性部分連接在CpG位點(diǎn)的5位上時(shí)，通過Ru2+-可見光光 催化完成后續(xù)的C向U轉(zhuǎn)化。
[0387] 用吸電子基團(tuán)或供電子基團(tuán)修飾的多個(gè)互補(bǔ)的雙鍵種類可用于衍生AdoMet類似 物。在這些修飾的雙鍵與C的5, 6雙鍵之間的距離也考慮為空間和能量有利的分子內(nèi)環(huán)加 成。
[0388] 圖13示出Ru (bpy) 32+_可見光催化DNA中的5位修飾的C向U的光轉(zhuǎn)化的兩個(gè)實(shí) 例。Ru (bpy) 32+復(fù)合物的實(shí)例可以為Ru (bpy) 3(：12和Ru (bpy) 3 (PF6)2?？梢姽夤獯呋磻?yīng)混 合物包含Ru (bpy) 32+復(fù)合物、叔胺（例如，N，N-二異丙基乙胺Q-Pr2Net))、季銨陽離子（如 MV (PF6)2、甲基紫或MV2+)、Mg2+或Li +。光源可以為普通家用燈泡或激光（波長為400nm至 600nm)
[0389] 實(shí)例11 :光轉(zhuǎn)化反應(yīng)的講一步測試
[0390] 測試合成的單鏈DNA分子中的5位用光活性基團(tuán)修飾的C向U類似物轉(zhuǎn)化的可替 代方法利用合成的雙鏈DNA分子，其利用簡單的基于凝膠的限制性內(nèi)切核酸酶測定。
[0391] 將至少50個(gè)堿基對的DNA分子的兩個(gè)鏈合成為含有在CpG環(huán)境中的一個(gè)修飾的C 的寡核苷酸。使用標(biāo)準(zhǔn)的基于亞磷酰胺的合成化學(xué)法將在兩個(gè)鏈中的相同CpG部分中的C 用之前所述的5位修飾的可光轉(zhuǎn)化類似物中的一個(gè)來替代。以這樣的方式設(shè)計(jì)寡核苷酸， 在PCR之后，將所得雙鏈DNA分子在不存在光轉(zhuǎn)化的情況下用一種限制性酶裂解，在存在光 轉(zhuǎn)化的情況下用不同的限制性酶裂解。光轉(zhuǎn)化事件的確認(rèn)是通過在瓊脂糖凝膠上檢測所得 限制性片段，或者隨后變性，通過MLDI-TOF質(zhì)譜檢測單鏈片段來進(jìn)行。另外的限制性位點(diǎn) 使得在凝膠上的片段易于辨別，而在合成的DNA分子長度中在別處的另外可修飾CpG位點(diǎn) 提供了用于在彼此不同的短距離下測試多個(gè)C類似物的光轉(zhuǎn)化的另外選項(xiàng)。示出了這樣的 測定的實(shí)例（圖14)。
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