gtgtggtaggggagatcggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcagga ggaacaccggtggcgaaggcggatctctgggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggatt agataccctggtagtccacgccgtaaacgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgcagcta acgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcg gcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatataccggaaacactcagagat gggtgcccccttgtggtcggtatacaggtggtgcatggctgtcgtcagetcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcc cgcaacgagcgcaacccttgtcctgtgttgccagcatgcccttcggggtgatggggactcacaggagaccgccgggg tcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatgccccttatgtcttgggctgcacacgtgctacaatggc cggtacaatgagetgcgataccgtgaggtggagcgaatctcaaaaagccggtctcagttcggattggggtctgcaac tcgaccccatgaagtcggagtcgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtaca caccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaagccggtggcccaacccgtaagggagggagctgtcgaagg tgggactggcga。
[0019] 本發(fā)明另外還提供了利用上述淡紫灰鏈霉菌hK6>/?Wa6〇UN-8制 備α -葡萄糖苷酶抑制劑的方法，該方法包括如下具體步驟： 第一、發(fā)酵：常規(guī)液體發(fā)酵，培養(yǎng)淡紫灰鏈霉菌，使其發(fā)酵液中積累一定量的α -葡萄 糖苷酶抑制劑； 第二、發(fā)酵液前處理：離心去除菌體及不溶性顆粒后，采用截留分子量為3000~30000 Da的膜系統(tǒng)，去除發(fā)酵液中殘留的可溶性淀粉、蛋白質(zhì)以及部分色素，得到澄清濾液； 第三、脫色及濃縮：將前處理獲得的澄清濾液利用活性炭脫色后，采用截留分子量為 100~1000 Da的膜系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，并去除大部分無機(jī)鹽小分子，得到澄清濃縮液； 第四、樹脂吸附與洗脫：將澄清濃縮液流加至001X7型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂，并采 用0. 1~0. 5 M的氨水溶液洗脫，收集具有α -葡萄糖苷酶抑制活性的洗脫液； 第五、濃縮與干燥：將從樹脂洗脫的α-葡萄糖苷酶抑制劑溶液采用50~500 Da 的膜系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥后得到α -葡萄糖苷酶抑制劑精制品 AGI256。
[0020] 該α -葡萄糖苷酶抑制劑AGI256的物理化學(xué)與生物學(xué)性質(zhì)如下： α -葡萄糖苷酶抑制劑AGI256為白色無定型粉末，易溶于水和二甲基亞砜，微溶于甲 醇、乙醇和丙酮，不溶于其它有機(jī)溶劑；強(qiáng)酸強(qiáng)堿處理不會對影響其抑制活性。
[0021] α -葡萄糖苷酶抑制劑AGI256在紫外光譜下無特征吸收峰，紅外光譜吸收集中在 3312 cm 1和1039 cm \結(jié)合核磁共振和元素分析，該抑制劑AGI256由C、Η、0、N四種元素 構(gòu)成。
[0022] α -葡萄糖苷酶體外抑制實驗結(jié)果表明，該抑制劑AGI256具有強(qiáng)烈的α -葡萄糖 苷酶抑制活性，其IC5。（抑制率達(dá)50%時的抑制劑濃度)是市售α -葡萄糖苷酶抑制劑阿卡 波糖的321倍。
[0023] 小鼠體內(nèi)α -葡萄糖苷酶抑制實驗結(jié)果表明，該抑制劑AGI256可以降低正常小鼠 的餐后血糖水平，對餐后高血糖的形成有明顯改善作用，效果與阿卡波糖相當(dāng)，可以用于糖 尿病的預(yù)防和治療。
[0024] -種α -葡萄糖苷酶抑制劑的應(yīng)用，該α -葡萄糖苷酶抑制劑AGI256制備治療糖 尿病的藥物或功能性食品方面的應(yīng)用。
[0025] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是： 1、本發(fā)明提供了一種新的α-葡萄糖苷酶抑制劑產(chǎn)生菌，即淡紫灰鏈霉菌，并利用該 菌株發(fā)酵生產(chǎn)α -葡萄糖苷酶抑制劑；采用離心、膜過濾、脫色和樹脂吸附洗脫等工藝，從 淡紫灰鏈霉菌發(fā)酵液中分離得到α -葡萄糖苷酶抑制劑精制品AGI256。
[0026] 2、本發(fā)明得到的α -葡萄糖苷酶抑制劑精制品AGI256抑制劑能強(qiáng)烈抑制α -葡 萄糖苷酶，其IC5。（抑制率達(dá)50%時的抑制劑濃度)是市售α -葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖 的321倍。
[0027] 3、小鼠體內(nèi)α -葡萄糖苷酶抑制實驗結(jié)果表明，該抑制劑可以降低正常小鼠的餐 后血糖水平，對餐后高血糖的形成有明顯改善作用，效果與阿卡波糖相當(dāng)，可以用于糖尿病 的預(yù)防和治療。
[0028] 4、本發(fā)明得到的α -葡萄糖苷酶抑制劑精制品AGI256抑制劑制備治療糖尿病的 藥物或功能性食品方面的應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0029] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式并不局限于 實施例表示的范圍。
[0030] 實施例1:淡紫灰鏈霉菌UN-8的分離篩選 (1)制備菌懸液：稱取5g 土壤樣品接入裝有45mL無菌生理鹽水的250mL三角瓶中，室 溫下磁力攪拌30分鐘，制成菌懸液。
[0031] (2)菌懸液稀釋、菌落挑?。簩⑸鲜鏊镁鷳乙翰捎?0倍稀釋法梯度稀釋成不同 濃度的菌懸液，選擇1〇 4,1〇5, IO6倍的菌懸液100 μ L涂布于固體分離培養(yǎng)基平板上；28°C培 養(yǎng)5天后，根據(jù)放線菌的菌落形狀、大小及所產(chǎn)色素的顏色挑取單菌落。
[0032] (3)劃線純化：用平整、圓滑的接種環(huán)，在無菌操作條件下，將獲得的單菌落在高 氏一號固體培養(yǎng)基平板上連續(xù)劃線純化，28°C培養(yǎng)5天后，挑取平板上的純種單菌落至試 管斜面，經(jīng)培養(yǎng)后保存。
[0033] (4)傳代培養(yǎng)：用平整、圓滑的接種環(huán)，在無菌操作條件下，挑取少量斜面保存的 純化菌種轉(zhuǎn)接至另一支新鮮試管斜面上，28°C恒溫條件下，傳代培養(yǎng)5天。
[0034] (5)發(fā)酵培養(yǎng)及搖瓶檢測發(fā)酵性能：用平整、圓滑的接種環(huán)挑取斜面上長度為 Icm的菌苔接入裝有30mL液體種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，搖床轉(zhuǎn)速160rpm，28°C培養(yǎng) 36h，將種子液按10%接種量接入裝有50mL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，搖床轉(zhuǎn)速 160rpm，28°C培養(yǎng)5天后，采用PNPG法檢測發(fā)酵液對α -葡萄糖苷酶的抑制活性，如下表3 所示，選取抑制率最高者為目標(biāo)菌株。
[0035] 其中，用蒸餾水配制固體分離培養(yǎng)基的濃度組分如下：可溶性淀粉20g/L，KNO3 0· 5g/L，NaCl 0· 5g/L，K2HPO4 1.0 g/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· Olg/L，K2Cr2O7 0· 25g/L，瓊脂 20g/L，pH 值 7. 2 ; 用蒸餾水配制試管斜面培養(yǎng)基的濃度組分如下：可溶性淀粉20g/L，KN03 0.5g/L， NaCl 0· 5g/L，K2HPO4 lg/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 01g/L，瓊脂 20g/L，pH 值 7. 2 ； 用蒸餾水配制液體種子培養(yǎng)基的濃度組分如下：可溶性淀粉20g/L，KN03 0.5g/L， NaCl 0· 5g/L，K2HPO4 lg/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 01g/L，pH 值 7· 2 ; 用蒸餾水配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基濃度組分如下：可溶性淀粉20g/L，酵母膏10g/L，NaCl 0· 5g/L，K2HPO4 lg/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L，F(xiàn)eSO4 · 7H20 0· 01g/L，pH 值 7. 2。
[0036] 實施例2:淡紫灰鏈霉菌UN-8的培養(yǎng)特征 將淡紫灰鏈霉菌UN-8接種于裝有50mL無碳液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，分別以添 加2. 5g/L和10g/L葡萄糖的液體培養(yǎng)基作為對照組，搖床轉(zhuǎn)速160rpm，28°C培養(yǎng)7h后，采 用干重法或比濁法判定菌株生長情況，結(jié)果表明淡紫灰鏈霉菌UN-8在無碳液體培養(yǎng)基和 2. 5g/L葡萄糖液體培養(yǎng)基中的生長情況良好，且優(yōu)于10g/L葡萄糖液體培養(yǎng)基中淡紫灰鏈 霉菌UN-8的生長情況。
[0037] 將淡紫灰鏈霉菌UN-8接種于裝有50mL無氮液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，分別 以添加 lg/L酵母膏和lg/L KNO3的液體培養(yǎng)基作為對照組，搖床轉(zhuǎn)速160rpm，28°C培養(yǎng)7h 后，采用干重法或比濁法判定菌株生長情況，結(jié)果表明淡紫灰鏈霉菌UN-8在無氮液體培養(yǎng) 基和含酵母膏或KNO3的液體培養(yǎng)基中的生長情況相當(dāng)。
[0038] 其中，用蒸餾水配制無碳液體培養(yǎng)基的濃度組分如下=NaCl 0. 5g/L，K2HPO4 · 3H20 0· 5g/L，KNO3 I. 0g/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L，pH 值 7· 2 ; 用蒸餾水配制無氮液體培養(yǎng)基的濃度組分如下：NaCl 0. 5g/L，K2HPO4 · 3H20 0. 5g/L， MgSO4 · 7H20 0· 5g/L，葡萄糖 2. 5g/L，pH 值 7· 2。
[0039] 實施例3:淡紫灰鏈霉菌UN-8制備α -葡萄糖苷酶抑制劑的方法 (1) 發(fā)酵：用平整、圓滑的接種環(huán)挑取斜面上長度為3cm的菌苔接入裝有IOOmL液體種 子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，搖床轉(zhuǎn)速160rpm，30°C培養(yǎng)24h，將種子液按10%接種量接入 裝有800mL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的3L三角瓶中，搖床轉(zhuǎn)速160rpm，30°C培養(yǎng)3天后，收集5個三