受體激動劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域中利用轉(zhuǎn)錄標(biāo)志物檢測動物組織中β2受體激動劑的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] β受體激動劑包括非選擇性的β受體激動劑如異丙腎上腺素及選擇性屯、臟01 受體激動劑如多己酪下胺，選擇性02受體激動劑如沙下胺醇、叔下、喘寧等。β2受體激動 劑其通過興奮氣道平滑肌和肥大細(xì)胞膜表面的β2受體，舒張氣道平滑肌、減少肥大細(xì)胞和 嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒及其介質(zhì)的釋放、降低微血管的通透性、增加氣道上皮纖毛的擺動等 緩解哮喘癥狀。β2受體激動劑包括：西馬特羅，噴布特羅，妥布特羅，西布特羅，漠不特羅， 馬布特羅，特布他林，氯丙那林，萊克多己胺，克倫特羅，沙下胺醇，班布特羅，利托君，克倫 普羅，齊帕特羅，馬責(zé)特羅等。
[0003] 02受體激動劑在動物體內(nèi)的作用機(jī)理相同，為：02受體激動劑作用于細(xì)胞膜上 的02腎上腺素能受體（02AR)受體，刺激受體與鳥巧酸結(jié)合蛋白偶聯(lián)，激活G蛋白與腺巧 酸環(huán)化酶的偶聯(lián)，腺巧酸環(huán)化酶將Ξ憐酸腺巧轉(zhuǎn)化為3,5-環(huán)憐酸腺巧（cAMP)，從而誘發(fā)體 內(nèi)的一系列反應(yīng)。
[0004] 現(xiàn)行我國標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)雖已明令禁止在動物飼料和飲水中添加β2受體激 動劑，但仍屢禁不止，而目前主流的藥物殘留分析方法如儀器分析、免疫分析、傳感器及忍 片分析等均是基于已知藥物的檢測，新藥作為監(jiān)測的漏桐，繼續(xù)威脅著消費(fèi)者的人身安全。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何同時有效實現(xiàn)對β2受體激動劑家族藥物尤其 是02受體激動劑家族新藥的監(jiān)測。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了檢測或輔助檢測待測動物組織和/或器 官中02受體激動劑的方法。
[0007] 本發(fā)明所提供的檢測或輔助檢測待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑的方 法，為方法1、方法2、方法3、方法4或方法5 :
[000引所述方法1包括：
[0009] 利用巧光定量PCR分別擴(kuò)增所述待測的離體的動物組織和/或器官中的 ADRB2 (β2腎上腺素受體）基因、Ρ服ACB(cAMP依賴性蛋白激酶）基因、ADCY3 (腺巧酸環(huán)化 酶）基因、ATP1A3(化7K+-ATP酶）基因、ATP2A3(Ca"-ATP酶）基因、PTH(甲狀旁腺激素）基 因、MYLK(肌球蛋白輕鏈激酶）基因、TNF-a(腫瘤壞死因子α)基因、IL1B(白介素-10) 基因與內(nèi)參基因，根據(jù)xl、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9、公式l和公式2分別得出yl和y2;
[0010] 按照如下方法確定所述待測動物組織和/或器官中是否含有或候選含有β2受體 激動劑：如yl>y2,所述待測動物組織不含或候選不含02受體激動劑，如如<y2,所述 待測動物組織含有或候選含有02受體激動劑；
[0011] 所述Xl為ADCY3基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct 值的差值；
[0012] 所述x2為ADRB2基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct 值的差值；
[001引所述x3為ATP1A3基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct值的差值；
[0014] 所述x4為ATP2A3基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct 值的差值；
[0015] 所述巧為IL1B基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct 值的差值；
[0016] 所述x6為MYLK基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct 值的差值；
[0017] 所述巧為P服ACB基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct 值的差值；
[0018] 所述x8為PTH基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct值 的差值；
[001引所述x9為TNF-a基因的巧光定量PCR體系與內(nèi)參基因的巧光定量PCR體系的Ct值的差值；
[0020] 公式 1:yl=8. 682Xxl巧.407XX2-10. 405XX3+16. 787Xx4巧.522X巧+6. 955 Xx6-7. 0922X巧+10. 165Xx8+4. 047Xx9-263. 3690 ;
[0021] 公式 2 :y2 = 6. 093Xxl+4. 302Xx2-8. 498Xx3+14. 236Xx4+5. 065Xx5+7. 206X x6-5. 875X巧+8. 845Xx8巧.588Xx9-173. 868。
[002引所述方法2包括：
[0023] 根據(jù)所述xl、所述x2、所述x3、所述x4、所述巧、所述x6、所述巧、所述x8、所述 x9、公式3和公式4分別得出A1和A2 ;
[0024] 按照如下方法確定所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑的含量：如A1 >Α2,所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑含量< 2g/l〇9g組織和/或器官或候 選< 2g/109g組織和/或器官，如A1 <A2,所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動 劑含量> 2g/109g組織和/或器官或候選> 2g/109g組織和/或器官，如Α1 =Α2,所述待 測動物組織和/或器官中β2受體激動劑含量=2g/l〇9g組織和/或器官或候選=2g/109g 組織和/或器官；
[00巧]公式 3 :A1 = 8. 686Xxl+10. 357Xx2巧.030Xx3巧.383Xx4巧.787X巧+10. 575Xx6-7. 840X巧+17. 031Xx8-5. 895Xx9-181. 935 ;
[0026] 公式 4 :A2 = 5. 375Xxl巧.732Xx2+l. 873Xx3+l. 456Xx4+3. 392X巧+9. 776XX 6-6. 827X巧+15. 417Xx8-5. 785Xx9-l：M. 157。
[0027] 所述方法3包括：
[0028] 根據(jù)所述xl、所述x2、所述x3、所述x4、所述巧、所述x6、所述巧、所述x8、所述 x9、公式5和公式6分別得出B1和B2 ;
[0029]按照如下方法確定所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑的含量：如B1 > B2,所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑含量<lOg/10 9g組織和/或器官或 候選<l〇g/l〇9g組織和/或器官，如B1 <B2,所述待測動物組織和/或器官中β2受體激 動劑含量>l〇g/l〇9g組織和/或器官或候選>l〇g/l〇9g組織和/或器官，如Β1 =Β2,所 述待測動物組織和/或器官中@2受體激動劑含量=i〇g/i〇9g組織和/或器官或候選= 10g/109g組織和/或器官；
[0030]公式5 :B1 = 4. 681Xxl巧.554Xx2+0. 698Xx3-l. 830Xx4+4. 694X巧巧.915XX 6-3. 642X巧+8. 573Xx8-4. 294Xx9-91. 620 ;
[0031]公式6:B2 = 2. 954Xxl+2. 594XX化0. 978Xx3-l. 279Xx4+4.868Xx5+7. 042XX 6-3. 986X巧+10. 244Xx8-5. 059Xx9-81. 790。
[003引所述方法4包括：
[0033] 根據(jù)所述xl、所述x2、所述x3、所述x4、所述巧、所述x6、所述巧、所述x8、所述 x9、公式7和公式8分別得出C1和C2 ;
[0034]按照如下方法確定所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑的含量：如C1 > C2,所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑含量<ioog/10 9g組織和/或器官 或候選< 100g/109g組織和/或器官，如C1 <C2,所述待測動物組織和/或器官中02受 體激動劑含量> 100g/109g組織和/或器官或候選> 100g/109g組織和/或器官，如C1 = C2,所述待測動物組織和/或器官中0 2受體激動劑含量=i〇〇g/i〇9g組織和/或器官或候 選=100g/109g組織和/或器官；
[0035]公式 7 :C1 = 3. 672Xxl+6. 769Xx2+0. 615Xx3-2. 250Xx4+6. 423X巧+6. 205XX 6-3. 747X巧+11. 794Xx8-7. 041Xx9-98. 164 ;
[0036]公式8:C2 = 2. 875Xxl+4. 035XX化0. 858Xx3-l. 651Xx4+5. 747Xx5+6. 897XX 6-3. 951X巧+11. 522Xx8-6. 326Xx9-85.Ill。
[0037] 所述方法5包括：
[003引 根據(jù)所述X1、所述x2、所述x3、所述x4、所述巧、所述x6、所述巧、所述x8、所述x9 和公式9得出所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑含量預(yù)測值Pv，根據(jù)公式10和所述預(yù)測值PV得出所述待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑含量av;
[0039]公式 9:pv= 714. 571-14. 881Xxl-2. 948Xx2巧0. 71Xx3-12. 638Xx4+17. 078X x5-35. 274Xx6-17. 073X巧-1. 029Xx8-26. 623Xx9 ;
[0040] 公式10:av= (pv-21. 423)/0. 6911 ;所述預(yù)測值pv和所述β2受體激動劑含量 av的單位均為g/109g組織。
[0041]上述方法中，所述利用巧光定量PCR分別擴(kuò)增所述待測動物組織和/或器官中的 ADRB2基因、P服ACB基因、ADCY3基因、ATP1A3基因、ATP2A3基因、PTH基因、MYLK基因、IL1B 基因、TNF-a基因與所述內(nèi)參基因的引物對可分別為P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9和 P10 ;
[004引所述P1為由序列1和序列2所示的單鏈DNA組成的引物對；
[004引所述P2為由序列3和序列4所示的單鏈DNA組成的引物對；
[0044]所述P3為由序列5和序列6所示的單鏈DNA組成的引物對；
[004引所述P4為由序列7和序列8所示的單鏈DNA組成的引物對；
[0046]所述P5為由序列9和序列10所示的單鏈DNA組成的引物對；
[0047] 所述P6為由序列11和序列12所示的單鏈DM組成的引物對；
[004引所述P7為由序列13和序列14所示的單鏈DNA組成的引物對；
[0049] 所述P8為由序列15和序列16所示的單鏈DNA組成的引物對；
[0050] 所述P9為由序列17和序列18所示的單鏈DNA組成的引物對；
[005。 所述P10為由序列19和序列20所示的單鏈DNA組成的引物對。
[0052] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了檢測待測動物組織和/或器官中β2受體 激動劑的成套試劑。
[0053] 本發(fā)明提供的檢測待測動物組織和/或器官中β2受體激動劑的成套試劑，為所 述Ρ1-Ρ9中的至少一種。
[0054] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了下述任一應(yīng)用：
[00巧]I、Ml在作為檢測或輔助檢測動物組織和/或器官中β2受體激動劑的標(biāo)志物中的應(yīng)用；所