一種貝利司他異構(gòu)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及的是抗腫瘤藥物belinostat順式異構(gòu)體的 制備方法。
【背景技術(shù)】
[000引 貝利司他度elinostat，PXD101)是由丹麥TopotargetAS公司開發(fā)的一種組蛋白 脫乙酷基酶抑制劑（HDACi)。組蛋白去乙酷化酶（HDAC)的過度表達(dá)或異常調(diào)控會使組蛋白 過度去乙酷化，使染色質(zhì)被重塑為抑制轉(zhuǎn)錄的構(gòu)型，引起相應(yīng)基因表達(dá)下降，導(dǎo)致癌變的產(chǎn) 生，因此對HDAC的抑制作用被認(rèn)為是具有發(fā)展前景的抗癌藥物祀標(biāo)。Belinostat可W直 接作用于基因異常表達(dá)運(yùn)一環(huán)節(jié)，從而抑制和糾正腫瘤細(xì)胞過度增殖、異常分化，針對常見 的耐藥問題，還可W與其他作用機(jī)制的藥物聯(lián)合用藥。Be1inostat能有效抑制結(jié)腸癌、肺 癌、卵巢癌、骨髓瘤等實(shí)體瘤細(xì)胞的增殖，對白血病和淋己癌等血液系統(tǒng)的惡性腫瘤也有治 療作用。
[0003] 美國FDA于2009年9月指定Belinostat為孤兒藥，列入快速審批通道，用于治 療復(fù)發(fā)或難治性外周T細(xì)胞淋己瘤（R/RPT化)，歐盟于2012年10月也指定本品為孤兒藥 用于PTCL。目前，TopotargetAS及SpectrumPharmaceuticals公司已完成belinostat 治療ΡΤ化的II期臨床試驗(yàn)，結(jié)果超過設(shè)計(jì)預(yù)期值。2013年12月，原研公司向FDA提交 Belinostat的R/RPTCL新藥申請。2014年7月3日，F(xiàn)DA批準(zhǔn)Belinostat用于治療有外 周T細(xì)胞淋己癌（PTCL)的患者，主要依據(jù)是研究表明，在接受了該藥物治療的患者中總緩 解率達(dá)到了近26%。
[0004] Belinostat化學(xué)名為巧)-N-徑基-3-(3-苯基氨基橫酷基苯基）丙締酷胺，其結(jié) 構(gòu)式如下：
[0005]
[0006]Belinostat存在一個不對稱的雙鍵結(jié)構(gòu)，合成中可能會產(chǎn)生其順式異構(gòu)體，結(jié)構(gòu) 式如下：
[0007]
[0008]Belinostat結(jié)構(gòu)式為E型，其順式異構(gòu)體為Z型。為了嚴(yán)格控制藥品質(zhì)量，保證其 臨床用藥的安全有效，在建立Belinostat有關(guān)物質(zhì)的檢查方法的同時(shí)，需要高純度的異構(gòu) 體II作為雜質(zhì)對照?，F(xiàn)有已報(bào)道的Belinostat的合成方法產(chǎn)生的異構(gòu)體II極少，且該異構(gòu) 體與Belinostat采用傳統(tǒng)純化方法如重結(jié)晶和硅膠柱層析難W將其分開，因此制備得到 純度高符合雜質(zhì)對照品要求的異構(gòu)體II具有一定的難度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明提供了一種貝利司他順式異構(gòu)體的制備方法，該方法W3-苯基氨基橫酷 基苯甲醒為起始原料，經(jīng)Wittig縮合反應(yīng)，水解，氯化反應(yīng)，徑胺縮合反應(yīng)得到Belinostat 和Belinostat異構(gòu)體混合物，經(jīng)反相高效制備液相色譜法分離純化，得到純度99%W上的 Belinostat異構(gòu)體II，能夠作為雜質(zhì)對照品用于Belinostat有關(guān)物質(zhì)的檢查。
[0010] 本發(fā)明提供的一種貝利司他順式異構(gòu)體的制備方法，其特征在于，按W下路線合 成：
[0011]
[0012] 具體包含W下步驟：
[0013] 1)化合物IV與Wittig試劑、堿試劑在極性質(zhì)子溶劑中進(jìn)行Wittig縮合反應(yīng)，所述 Wittig試劑可選自乙氧甲酯基甲基Ξ苯基氯化麟、乙氧甲酯基甲基Ξ苯基漠化麟或乙氧甲 酷基甲基Ξ苯基艦化麟，所述極性質(zhì)子溶劑可選自甲醇、乙醇或異丙醇，所述堿試劑可選自 甲醇鋼、乙醇鋼、叔下醇鐘，反應(yīng)完畢后在反應(yīng)液中加堿水解后得到化合物V，水解所用堿 可選自氨氧化裡，氨氧化鋼，氨氧化鐘；
[0014] 2)化合物V先進(jìn)行氯化反應(yīng)得到氯化產(chǎn)物化合物VI，所得反應(yīng)液與鹽酸徑胺在堿 試劑存在下反應(yīng)得到belinostat和belinostat異構(gòu)體混合物III，所述氯化試劑可選自草 酷氯、氯化亞諷或橫酷氯，堿試劑可選自碳酸氨鋼、碳酸鋼或碳酸鐘；
[0015] 3)將belinostat和belinostat異構(gòu)體混合物III采用反相高效制備液相色譜法分 離純化得到化合物IIbelinostat異構(gòu)體。
[0016] 其中，步驟DWittig試劑優(yōu)選乙氧甲酯基甲基Ξ苯基漠化麟；縮合反應(yīng)所述極性 質(zhì)子溶劑優(yōu)選甲醇；堿試劑優(yōu)選乙醇鋼；Wittig試劑與化合物IV的摩爾比為1~3 :1，優(yōu)選 1. 5:1 ;水解所用的堿優(yōu)選氨氧化鋼；氨氧化鋼與化合物IV的摩爾比為2~5:1，優(yōu)選3:1。
[0017] 步驟2)所述氯化試劑采用草酷氯時(shí)，草酷氯與化合物V的摩爾比2~5 :1，優(yōu)選 3 :1;堿試劑優(yōu)選碳酸鋼，碳酸鋼與化合物VI的摩爾比為2~5:1，優(yōu)選4:1;鹽酸徑胺與化 合物VI的摩爾比為5~20:1，優(yōu)選10:1。
[0018] 步驟3)所述反相高效制備液相色譜法純化的具體的操作方法包括W下步驟：
[0019] (a)溶解、過濾：將Belinostat和Belinostat異構(gòu)體混合物III用0. 05~2%憐 酸溶液/乙臘（85/15體積比）混合液溶解，其中Belinostat和Belinostat異構(gòu)體混合物 III:0. 05~2%憐酸溶液/乙臘（85/15)混合液的比例為Ig:200ml~500ml，溶解后用孔 徑0. 45μm的有機(jī)微孔濾膜過濾，濾去不溶物。
[0020] 化）分離、洗脫：將步驟（a)中所得的溶液，注入反相高效制備液相色譜儀，梯度洗 脫，收集Belinostat異構(gòu)體的制備組分，得Belinostat異構(gòu)體溶液；
[0021] (C)產(chǎn)品回收：將步驟化）所得到的Belinostat異構(gòu)體溶液中的乙臘經(jīng)蒸饋除去 后，用二氯甲燒提取，蒸饋除去二氯甲燒，得Belinostat異構(gòu)體。
[0022] 發(fā)明人在進(jìn)行反相高效制備液相分離前，用液質(zhì)聯(lián)用確定高效液相色譜中 Belinostat異構(gòu)體的出峰時(shí)間，摸索合適的色譜條件W進(jìn)一步應(yīng)用于制備液相用于分離 Belinostat、Belinostat異構(gòu)體及其它雜質(zhì)。采用YMC-TriartC18色譜柱，柱溫30°C，紫外 檢測器220皿，流速Iml/min下，通過變換流動相和洗脫梯度摸索能夠?qū)⑸鲜龈魑镔|(zhì)分離的 色譜條件，得出下表洗脫程序能將Belinostat、Belinostat異構(gòu)體及其它雜質(zhì)全部分開， 出峰順序?yàn)殡s質(zhì)f，Belinostat異構(gòu)體（雜質(zhì)b)，Belinostat,雜質(zhì)h，雜質(zhì)d，雜質(zhì)C，雜質(zhì) 邑，雜質(zhì)曰，分離度最低為1. 9 (見附圖1)。
[0023]
[0024] ~~W上述色譜條件基礎(chǔ)在制備液相上進(jìn)行條件摸索，由于制備液相的色譜柱與高效 液相的色譜柱不同，本發(fā)明制備液相色譜柱采用了動態(tài)軸向壓縮柱，流速要大很多，同時(shí)考 慮避免使用緩沖液，嘗試將緩沖液換成憐酸溶液，為得到純度和收率均較高的Belinostat 異構(gòu)體，需對制備液相色譜洗脫程序進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。
[00巧]經(jīng)試驗(yàn)摸索得出，步驟3)所述反相高效制備液相色譜法，色譜條件為：色譜柱采 用動態(tài)軸向壓縮柱，直徑50mm，填料長度250mm，填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠微球，粒徑 為10μm，孔徑120,V洗脫液采用乙臘和憐酸溶液組成的混合溶液；柱溫為室溫；紫外檢測 器在線檢測，檢測波長為221nm;流速為60-100ml/min，優(yōu)選80ml/min;通過變換洗脫液中 乙臘和憐酸鹽溶液的比例進(jìn)行梯度洗脫，所述憐酸溶液濃度為0. 05~2 %，優(yōu)選0. 1 %，優(yōu) 選按照如下梯度進(jìn)行洗脫：
[0026]
[0027] 制備液相分離時(shí)Belinostat與Belinostat異構(gòu)體的分離情況見附圖2。
[0028] 本發(fā)明提供的貝利司他順式異構(gòu)體的制備方法，W3-苯基氨基橫酷基苯甲醒 為起始原料，經(jīng)Wittig縮合反應(yīng)，水解，氯化反應(yīng)，徑胺縮合反應(yīng)得到Belinostat和 Belinostat異構(gòu)體混合物，混合物中Belinostat順式異構(gòu)體的含量較現(xiàn)有技術(shù)有顯著的 提高。對反應(yīng)得到Belinostat和Belinostat異構(gòu)體混合物采用反相高效制備液相色譜法 進(jìn)行分離純化，梯度洗脫得到純度99%W上的符合Belinostat有關(guān)物質(zhì)檢查中雜質(zhì)對照 品要求的Belinostat異構(gòu)體。
[0029] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】的實(shí)施例和說明書附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0030] 說明書附圖
[0031] 附圖1高效液相色譜Belinostat、Belinostat異構(gòu)體及其它雜質(zhì)出峰順序圖
[0032] 附圖2制備液相Belinostat、Belinostat異構(gòu)體出峰圖
【具體實(shí)施方式】
[0033] 實(shí)施例IBelinostat和Belinostat異構(gòu)體混合物的制備
[0034] 步驟1 :化合物V的制備
[0035]
[0036] 憐酷基乙酸Ξ乙醋（4. 73g，0. 0211mol)加入反應(yīng)器中，加入甲醇30血，攬拌溶 解，冷至-5-0°C，加入乙醇鋼（2. 61g，0. 0384mol)，加畢，攬拌10-20分鐘，滴加入化合物 VII巧g，0. 0192mol)和甲醇（20血）的溶液，于室溫下攬拌1-4小時(shí)，反應(yīng)畢，加入1M氨氧化 鋼溶液58ml和甲醇10ml，與室溫下攬拌過夜，反應(yīng)畢，加入乙酸乙醋（15ml)，水（30ml)，攬 拌15分鐘，分相，棄乙酸乙醋相，水相用10%鹽酸酸化至抑2,與室溫下攬拌1小時(shí)，過濾， 水洗，干燥，得化合物V4.Ig，收率70. 7 %。
[0037] 步驟2 :混合物II