莢蒾乙素、其制備方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物化合物和藥物技術(shù)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及芙蓮己素、其制備 方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] Vibsane型二聰為一類非常稀有的天然產(chǎn)物。到目前為止，僅在四種芙蓮屬 植物和一種地衣中分離得到，主要分為Η種骨架類型；十一元環(huán)、走元環(huán)及重排類骨架， 且此類化合物具有廣泛的生物活性，如促神經(jīng)生長(zhǎng)活性、殺魚活性、抗腫瘤活性等（見 HeterocyclesJOlO, 81, 1571)。如新芙蓮素（neovibsanin)、新芙蓮甲素（neovibsanin A)、新芙蓮己素（neovibsaninB)等在40μM濃度條件下可顯著促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)（見 J.化urochem. 1995, 64, 1954 ;Science, 2002, 296, 1648)。芙蓮丙素（VibsaninC)、5-表-芙 蓮丙素巧-epi-VibsaninC)、5-表-芙蓮辛素巧-epi-VibsaninC)等對(duì)邸細(xì)胞株表現(xiàn)出 中等程度的細(xì)胞毒活性（見Chem.Pharm.Bull. 2002, 50, 368)。
[000引芙蓮己素（VibsaninB)屬Vibsane型二聰，該化合物最早是由日本科 學(xué)家K.Kawazu于1980年從Viburnumaw油址i中分離得到的（見Agri.Biol. ^em.，1980, 44, 1367) -個(gè)^^一元大環(huán)二聰化合物，并發(fā)現(xiàn)該化合物可抑制植物生長(zhǎng)。 2001年，M.Kubo等人從臺(tái)灣產(chǎn)Viburnumodoratissimu中也分離得到該化合物（見Qiem. 化曰?.Bull. 2001，49, 242)。后來(lái)，Y.Rikuyama等人發(fā)現(xiàn)芙蓮己素（VibsaninB)有中等程 度的毒魚活性（見J.化t.Prod. 2006, 69, 1098)。最近，趙勤實(shí)課題組報(bào)道了芙蓮己素及其 衍生物具有促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)的活性，并指出該化合物可能在治療Alziheimer病方面有應(yīng)用 燈etr址e化onletters，2014,23，：M14-3417，CN;103772176A)。目前，尚無(wú)芙蓮己素具有 抗炎活性或抗腫瘤活性及其作用機(jī)制研究方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的一個(gè)方面是提供由通式（I)表示的芙蓮己素，W及其藥學(xué)上可接受的 鹽、結(jié)晶水合物、溶劑合物或它們的混合物。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供制備芙蓮己素的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供一種藥物組合物，該藥物組合物包含治療有效量的通 式芙蓮己素、其藥學(xué)上可接受的鹽、結(jié)晶水合物及溶劑合物中的一種或多種；W及一種或多 種藥學(xué)上可接受的載體。
[0007] 本發(fā)明再一個(gè)方面是提供通式（I)所述的芙蓮己素W及其藥學(xué)上可接受的鹽、結(jié) 晶水合物、溶劑合物或它們的混合物在制備抗炎藥物和白血病的藥物中的用途。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了下面通式（I)所示的大環(huán)二聰類化合物芙蓮己 素，其藥學(xué)上可接受的鹽、結(jié)晶水合物、溶劑合物或它們的混合物：
[0009]
[0010] 本發(fā)明還提供了一種芙蓮己素的制備方法：
[0011] (1)將干燥的早禾樹枝葉粉碎，用丙麗提取，濃縮后加水分散，己酸己醋萃取，合并 有機(jī)相濃縮后得到粗提物；
[0012] (2)粗提物經(jīng)過(guò)硅膠柱層析劃段；
[0013] (3)經(jīng)過(guò)中壓柱層析脫色并除去大極性成分；
[0014] (4)經(jīng)過(guò)正相柱層析純化后得到芙蓮己素。
[001引優(yōu)選的，
[0016] 步驟（1)所述丙麗提取在室溫（25±2°C)下進(jìn)行；
[0017] 步驟（1)所述丙麗的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80% ;所述丙麗提取的次數(shù)為1-3次，每次的提 取時(shí)間為12-4化；所述水與所述己酸己醋的體積比為1:1. 2 ;
[0018] 步驟（2)所述硅膠柱層析劃段具體方法可W為；所述的粗提物用水溶解后用硅膠 拌樣（粗提物與硅膠質(zhì)量比優(yōu)選為1:1)，上100-200目的硅膠柱，使用石油離/丙麗體系依 次進(jìn)行梯度洗脫，優(yōu)選的，石油離與丙麗的梯度體積比v/v為9: 1，8:2, 7:3, 6:4, 0:1 ;
[0019] 步驟（3)所述中壓柱層析脫色具體方法可W為：將7:3和6:4段濃縮物分別用聚 醜胺拌樣（濃縮物與聚醜胺質(zhì)量比優(yōu)選為1:1)，上RP-18中壓色譜柱（MPLC)，用甲醇/水體 系洗脫（優(yōu)選的依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75 %，80 %，85 %的甲醇水溶液洗脫），檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm 和238nm，得到7:3和6:4段洗脫液；
[0020] 步驟（4)所述正相柱層析純化具體方法可W為：將7:3和6:4段洗脫液分別濃縮 后，分別用正相200-300目硅膠柱層析純化，用石油離/異丙醇體系洗脫（體積比v/v= 9. 6:0. 4)均可得到芙蓮己素。所述正相柱層析純化可W反復(fù)多次W提高制得的芙蓮己素的 純度。
[0021] 本發(fā)明所述制備方法得到的芙蓮己素的純度可W達(dá)到98%W上。
[0022] 本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其含有治療有效量的芙蓮己素，或其藥學(xué)上可接 受的鹽、結(jié)晶水合物及溶劑合物中的一種或多種，W及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載 體。其藥學(xué)上可接受的鹽包括無(wú)機(jī)酸鹽酸、硝酸、硫酸、磯酸、氨漠酸；或者有機(jī)酸馬來(lái)酸、富 馬酸、酒石酸、乳酸、巧樣酸、己酸、甲礙酸、對(duì)甲苯礙酸，己二酸，蹤擱酸，單寧酸；或者與堿 金屬裡，鋼、鐘、堿±金屬巧、鎮(zhèn)、賴氨酸堿性氨基酸成的鹽。該藥用組合物還可W進(jìn)一步包 含氣味劑、香味劑等常規(guī)添加劑。
[0023] 本發(fā)明所提供的化合物和藥物組合物可W是多種形式，如片劑、膠囊、沖劑、口服 液、粉劑、粉針劑、氣霧劑等，并可W存在于適宜的固體或液體的載體或稀釋液中和適宜的 用于注射或滴注的消毒器具中。
[0024] 本發(fā)明再一個(gè)方面是提供通式（I)所述的芙蓮己素W及其藥學(xué)上可接受的鹽、結(jié) 晶水合物、溶劑合物或它們的混合物在制備抗炎藥物和白血病的藥物中的用途。
[00巧]本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，芙蓮己素在轉(zhuǎn)基因斑馬魚炎癥模型燈g:zlyz-EGFP)中表現(xiàn)出 明顯的抗炎活性，并且對(duì)白血病細(xì)胞系Kasumi-1細(xì)胞增殖也表現(xiàn)出顯著的抑制作用。
【附圖說(shuō)明】
[0026] 附圖1為芙蓮己素抑制Kasumi-1細(xì)胞系增殖實(shí)驗(yàn)；
[0027] 附圖2為芙蓮己素抑制斑馬魚炎性細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 為了更好的理解本發(fā)明實(shí)質(zhì)，下面將用本發(fā)明的實(shí)施例、試驗(yàn)例、制劑實(shí)施例來(lái)說(shuō) 明本發(fā)明的通式（I)所示的芙蓮己素的制備方法和藥理作用結(jié)果，但本發(fā)明的技術(shù)方案 并不局限于此，任何采用類似本發(fā)明技術(shù)方案，不需要本領(lǐng)域普通技術(shù)人員創(chuàng)造性勞動(dòng)即 可做出的方案均認(rèn)為屬于本發(fā)明技術(shù)方案范疇。
[0029] 制備實(shí)施例1;
[0030] 芙蓮己素的制備；干燥的早禾樹枝葉22kg粉碎后，室溫下用80%丙麗提取3次 (2天/次），合并提取液，減壓濃縮后加水分散，己酸己醋萃取，水與己酸己醋的體積比為 1:1.2,合并有機(jī)相濃縮后得粗提物700g，粗提物溶解后用100-200目硅膠拌樣（粗提物與 硅膠質(zhì)量比為1:1)，上100-200目的硅膠柱，使用石油離/丙麗體系（體積比v/v依次為 9: 1，8:2, 7:3, 6:4, 0:1)進(jìn)行梯度洗脫。然后7:3和6:4段濃縮物分別用聚醜胺拌樣（濃縮 物與聚醜胺質(zhì)量比為1:1)，上RP-18中壓色譜柱（MPLC，），依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%，80%， 85 %的甲醇水溶液洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm和238nm，洗脫液濃縮后，進(jìn)一步用正相200-300 目硅膠柱層析純化，用石油離/異丙醇體系洗脫（石油離/異丙醇體積比v/v= 9. 6:0. 4)， 7:3和6:4段均得到芙蓮己素，純度均為98%。將得到的芙蓮己素合并進(jìn)行后續(xù)的測(cè)試。
[0031] 該方法的優(yōu)勢(shì)是提供了一種從早禾樹中快捷高效制備芙蓮己素的方法。
[0032]ESI-MS在aiimadzuLCMS-2010EV質(zhì)譜儀上測(cè)定；1D和 2DNMR在化址erAM-300 及DRX-500核磁共振儀上測(cè)定，所用気代試劑為SigmaA1化ich生產(chǎn)，TMS作為內(nèi)標(biāo)，δ單 位為ppm,J單位為化。拌樣用硅膠及層析用硅膠W及制備薄層板（厚度0. 4-0. 5mm)均為 煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司生產(chǎn)；分析純?nèi)軇┚翘旖蚴谢び邢薰井a(chǎn)品。
[0033] 芙蓮己素的結(jié)構(gòu)分析數(shù)據(jù)如下；古NMR(acetone-d6,400MHz) : 5h6.65(1?d，J =16.4Hz，H-6)，6.06(lH，d，J= 16.4Hz，H-5)，5.91(lH，m，H-2)，5.74(lH，br s，H-2，），5. 72(lH，d，J= 16. 0Hz，H-10)，5. ：M(lH，d，J= 9. 30Hz，H-8)，5.ll(lH，dd，J =16,9.3Hz，H-9)，5.07(lH，d，J= 7