恩（滄州寶恩吸附材料科技有限公司）產(chǎn)產(chǎn)30-60目（Β30-60)、60-100目（Β60-100) 聚酰胺12g裝入Φ20X300mm層析柱中，取生藥濃度1 : 10知母提取溶液40mL以2.OBV/h 流速通過聚酰胺樹脂柱，然后分別以去離子水、10 %，20 %，30 %，40 %，50 %乙醇各60mL以 1.OBV/h進(jìn)行洗脫，30mL分段進(jìn)行收集，測(cè)定新芒果苷、芒果苷、知母皂苷B-II和知母皂苷 A-III。由表5可以看出，臺(tái)州四甲產(chǎn)60-100目聚酰胺具有較好的分離效果。
[0042] 表5聚酰胺樹脂規(guī)格、廠家和乙醇洗脫濃度
[0043]
[0044] 聚酰胺純化工藝中上樣質(zhì)量的考察：
[0045] 取預(yù)處理好的臺(tái)州四甲產(chǎn)60-100目聚酰胺粉12g裝入Φ20X300mm層析柱中，取 生藥濃度1 : 10知提取溶液20mL，60mL，100mL，140mL分別以2.OBV/h通過聚酰胺樹脂柱， 然后分別以水、10 %、20 %、30 %、40 %和50 %乙醇1.OBV/h進(jìn)行洗脫，60mL分段進(jìn)行收集， 測(cè)定新芒果苷、芒果苷、知母皂苷B-II和知母皂苷A-III。由表6可以看出，水和20%乙醇 以前洗脫部位可以洗脫得到新芒果苷和知母皂苷B-II，30 % -50%部位可以得到芒果苷和 知母皂苷A-III，且隨著上樣量的增加新芒果苷、知母皂苷B-II部位和芒果苷和知母皂苷 A-III部位并不會(huì)重合，表現(xiàn)出較好的分離效果。但考慮到可能不同樣品各成分的差異，為 保障分離效果，故上樣體積定為不超過l〇〇mL，樣后先以1BV的20%乙醇進(jìn)行洗脫后，然后 以50 %乙醇進(jìn)行洗脫。
[0046] 表6不同上樣體積四種組分在臺(tái)州四甲60-100上的洗脫特征
[0047]
[0048] 芒果苷、新芒果苷高效液相分析條件：
[0049] 流動(dòng)相為0. 02%磷酸水和乙腈系統(tǒng)，梯度條件見表7,檢測(cè)波長(zhǎng)為258nm，柱溫箱 溫度 30°C，流速 1.OmL/min。
[0050] 表7芒果苷、新芒果苷高效液相流動(dòng)相條件
[0051]
[0052] 知母皂苷BII、知母皂苷AllIHPLC:
[0053] 流動(dòng)相為0. 05%甲酸水和乙腈系統(tǒng)，梯度條件見表8,檢測(cè)器為ELSD檢測(cè)器，柱溫 箱溫度30°C，流速1.OmL/min，漂移管溫度110°C，載氣流速2.OL/min，增益值2。
[0054] 表8知母皂苷BII、AllI高效液相流動(dòng)相條件
[0055]

【附圖說明】
[0056] 圖1上樣液和制備芒果苷、新芒果苷樣品HPLC圖
[0057] 圖2上樣液和制備知母皂苷BII、知母皂苷AIII樣品HPLC圖，檢測(cè)器為ELSD
[0058] 圖3四種組分在三種樹脂上的洗脫特征
[0059] 圖4不同上樣體積四種組分在HPD400上的洗脫特征 [0060] 圖5四種組分在不同廠家、不同規(guī)格聚酰胺柱上洗脫特征
[0061] 圖6不同上樣體積四種組分在臺(tái)州四甲60-100目聚酰胺上的洗脫特征
[0062] 各圖的具體解釋
[0063] 圖1的組成ABC(紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)258nm，A:上樣前樣品溶液，B:芒果苷溶 液，C:新芒果苷溶液）
[0064] 圖2的組成ABC(檢測(cè)器：ELSD，A:上樣前樣品溶液，B:知母皂苷BII溶液，C:知 母皂苷AllI溶液）
[0065] 圖 3 的組成ABC(A:HPD100,B:HPD400,C:HPD600)
[0066] 圖 4 的組成ABC(A:60mLB: 120mLC: 180mL)
[0067] 圖5的組成ABCD(A:臺(tái)州四甲30-60,B:臺(tái)州四甲60-100,C:寶恩30-60,D:寶恩 60-100)
[0068] 圖 6 的組成ABCD(A:20mL，B:60mL，C:100mL，D:120mL)
【具體實(shí)施方式】
[0069] 實(shí)施例1
[0070] 取500g知母藥材粉碎成60目粉，5000mL的50%乙醇超聲提取2次，每次0.5h，抽 濾，合并提取液，回收至無醇味，加水至3000ml，以2BV/h流速通過30-60目聚酰胺柱層析 柱，續(xù)以2倍柱體積的15%乙醇以lBV/h流速洗脫，然后以2倍柱體積的40%乙醇以1BV/ h流速洗脫，合并上樣后流出液和15 %洗脫液，回收乙醇，加水至lOOOmL，記作樣1 ;回收 40%乙醇洗脫部分除去乙醇，加水至2000mL充分溶解，記作樣2。樣1以2BV/h流速通過 HPD-400大孔樹脂層析柱，分別用1. 5倍柱體積的10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇 以1BV/流速洗脫，分別回收20 %乙醇洗脫部位、40 %乙醇洗脫部位后凍干，分別得到新芒 果苷0. 55g、知母皂苷BII9. 53g;樣2以2BV/h流速通過的HPD-400大孔樹脂柱層析柱，分 別用1. 5倍量20 %乙醇、30 %乙醇、60 %乙醇、70 %乙醇洗脫，分別回收30 %乙醇洗脫部位、 70%乙醇洗脫部位后凍干，分別得到芒果苷1. 61g、知母皂苷AIII2. 13g;
[0071] 實(shí)施例2
[0072] 取1000g知母藥材粉碎成60目粉，lOOOOmL的70%乙醇回流提取2次，每次2h， 抽濾，合并提取液，回收至無醇味，加水至4000ml，以2BV/h流速通過的60-100目聚酰胺柱 層析柱，續(xù)以2倍柱體積的10%乙醇以lBV/h流速洗脫，然后以2倍柱體積的50%乙醇以 1BV(/h流速洗脫，合并上樣后流出液和20%洗脫液，回收乙醇，加水至2000mL，記作樣1 ;回 收40%乙醇洗脫部分除去乙醇，加水至2000mL充分溶解，記作樣2。樣1以2BV/h流速通 過的HPD-100柱層析柱，分別用2倍柱體積的10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇以 1BV/流速洗脫，分別回收20 %乙醇洗脫部位、40 %乙醇洗脫部位后凍干，分別得到新芒果 苷1. 23g、知母皂苷BII17. 56g;樣2以2BV/h流速通過HPD-100樹脂層析柱，分別用2倍 量30 %乙醇、60 %乙醇、70 %乙醇洗脫，分別回收30 %乙醇洗脫部位、70 %乙醇洗脫部位后 凍干，分別得到芒果苷3. 60g，知母皂苷All13. 52g。
[0073] 實(shí)施例3
[0074] 取1000g知母飲片粉碎成10目粗粉，8000mL的70%乙醇回流提取2次，每次3h， 抽濾，合并提取液，回收至無醇味，加水至4000ml，以2BV/h流速通過800mL的30-60目聚 酰胺柱層析柱，續(xù)以2倍柱體積的20%乙醇以lBV/h流速洗脫，然后以2倍柱體積的50% 乙醇以lBV/h流速洗脫，合并上樣后流出液和20%洗脫液，回收乙醇，加水至2000mL，記作 樣1 ;回收50%乙醇洗脫部分除去乙醇，加水至2000mL充分溶解，記作樣2。樣1以2BV/h 流速通過D-101樹脂層析柱，分別用2倍柱體積的10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙 醇以1BV/流速洗脫，分別回收20%乙醇洗脫部位、40%乙醇洗脫部位乙醇后真空干燥，分 別得到新芒果苷1. 58g、知母皂苷BII21. 54g;樣2以2BV/h流速通過D-101樹脂層析柱， 分別用2倍量20 %乙醇、30 %乙醇、60 %乙醇、70 %乙醇洗脫，分別回收30 %乙醇洗脫部位、 70%乙醇洗脫部位乙醇后真空干燥，分別得到芒果苷3. 01g、知母皂苷AIII3. 25g。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)制備知母中四種藥效成分的方法，其特征在于：聚酰胺-大孔樹脂柱連用， 同時(shí)分離制備知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII和知母皂苷AIII的方法。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：知母用乙醇提取，知母乙醇提取物用聚酰胺 吸附，水洗除雜，用乙醇洗脫；乙醇洗脫物濃縮后，然后加到大孔樹脂柱中，用乙醇洗脫，制 備得到知母中四種藥效成分。3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：先通過聚酰胺洗脫，再通過大孔樹脂柱洗 脫，同時(shí)分離制備知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII和知母皂苷AIII的方法；聚酰 胺采用5% -20 %乙醇和40% -60 %乙醇溶劑1-5BV洗脫；大孔樹脂柱采用低濃度乙醇為 20% -30%乙醇，中濃度乙醇為50% -60%乙醇，高濃度乙醇為70% -80%乙醇洗脫。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：包括以下步驟 a) 將市售的知母藥材或飲片直接投料或粉碎成粗粉，以3-10倍體積的30 % -80 %的乙 醇室溫超聲提取1-3次，每次0. 5-lh，或者通過加熱方式超聲提取或回流提取1-3次，每次 l-3h，過濾，合并提取液回收乙醇后加水溶解到適當(dāng)體積，得提取液； b) 上述提取液通過預(yù)處理好的聚酰胺柱，先后采用5 % -20 %乙醇和40 % -60 %乙醇溶 劑1-5BV洗脫。第一部分包括上樣流出溶液和5% -20%乙醇洗脫溶液，記作樣1 ;第二部 分為40 % -60 %乙醇洗脫溶液，記作樣2 ; c) 取樣1濃縮至無醇味，加水至3-10倍體積至充分溶解，通過大孔吸附樹脂柱，分別用 水、不同濃度乙醇洗脫；收集低濃度乙醇洗脫部位，記作樣3,中濃度洗脫部位，記作樣4 ; d) 取樣2濃縮到無醇味，加水適量至充分溶解，通過大孔吸附樹脂柱，分別以低濃度、 中濃度和高濃度乙醇洗脫，收集低濃度醇洗脫部位，記作樣5 ;高濃度乙醇洗脫部位，記作 樣6 ; e) 取樣3、樣4、樣5、樣6,濃縮，干燥，分別得到新芒果苷、知母皂苷BII、芒果苷和知母 皂苷AIII。5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：是通過兩種分離材料的聯(lián)用實(shí)現(xiàn)分離，即樣 品是先通過聚酰胺，不同部位洗脫液回收醇后分別通過大孔吸附樹脂分段收集。6. 如權(quán)利要求1要求所述的方法，其特征在于：b)中聚酰胺為30-60目或者60-100目。7. 如權(quán)利要求1要求所述的方法，其特征在于：c)中大孔吸附樹脂為中極性、弱極性或 非極性吸附樹脂，低濃度乙醇為10-30%乙醇，中濃度乙醇為40% -50%乙醇。8. 如權(quán)利要求1要求所述的方法，其特征在于：d)中大孔吸附樹脂為中極性、弱極性或 非極性吸附樹脂，低濃度乙醇為20% -30%乙醇，中濃度乙醇為50% -60%乙醇，高濃度乙 醇為70% -80 %乙醇。9. 如權(quán)利要求1要求所述的方法，其特征在于：上樣速度為l_3BV/h，洗脫流速1-2BV， 洗脫劑體積為柱體積的1-3倍。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時(shí)分離制備知母中主要化學(xué)組分新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII和知母皂苷AIII的工藝方法，通過組合聚酰胺和大孔吸附樹脂，通過分段收集，可以有效的分離制備此四種成分。本工藝對(duì)環(huán)境友好，樹脂和聚酰胺可以重復(fù)利用，生產(chǎn)成本低，制備得到的樣品純度在90％以上，并且可以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
【IPC分類】C07D407/04, C07H17/04, C07J75/00, C07H1/08, C07J71/00
【公開號(hào)】CN105330709
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510328951
【發(fā)明人】李萍, 李會(huì)軍, 年四輝
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)
【公開日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2015年6月10日