2α-羥基雷公藤內(nèi)酯酮的提取純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中醫(yī)藥研究技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬的提取 純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雷公藤（攻祐1T知扣iHook,f)系衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，W全根或去 皮根木質(zhì)部入藥。雷公藤具有活血化疲、清熱解毒、消腫散結(jié)、桂風(fēng)除濕、殺蟲止血的作用， 臨床用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎炎、強(qiáng)制性脊柱炎等，但其有大毒，且其 臨床有效劑量與中毒劑量相近，運(yùn)使雷公藤的全藥應(yīng)用至今未能得到廣泛推廣。
[0003] 為了充分發(fā)揮雷公藤的藥用功效，國內(nèi)外學(xué)者已從雷公藤屬植物中分離出幾十種 化學(xué)成分，主要有二祗、=祗、倍半祗、生物堿、巧類、糖類和醇類等。其中，雷公藤內(nèi)醋酬 (Triptonide)，又叫雷公藤幾內(nèi)醋、雷公藤酬，是從雷公藤中分離得到的二祗類化合物，其 具有抗炎、免疫抑制、抗新生血管等多種功效，是雷公藤藥物活性成分的一個(gè)重要的研究方 向。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬的提取純化方法，其所得 2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬的純度高，可為雷公藤內(nèi)醋酬的化學(xué)結(jié)構(gòu)、藥理作用等研究提供物 質(zhì)基礎(chǔ)。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬的提取純化方法，其包括W下步驟： 1) 將雷公藤粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙醇浸泡24h后進(jìn)行滲漉，然后將滲 漉液合并、濃縮，得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1. 5將所得乙醇濃縮液加乙酸乙醋萃取3-6次，然后將萃取得到的乙酸 乙醋溶液合并、濃縮，經(jīng)微波干燥制得干粉； 3) 將所得干粉加等體積乙酸乙醋溶解后，采用硅膠柱層析進(jìn)行分離，將乙酸乙醋與石 油酸按體積比2:3混合作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，每500mL洗脫液收集一份，經(jīng)濃縮后采用化C 對濃縮液進(jìn)行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑后微波干燥，得粗提干粉； 4) 將所得粗提干粉加等體積=氯甲燒溶解后，采用硅膠柱層析進(jìn)行分離，將=氯甲燒 與甲醇混合作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經(jīng)濃縮后采用TLC對濃縮 液進(jìn)行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲燒溶解后，在二氯甲燒和乙酸的混合液中重結(jié)晶3-5次，得 無色針狀結(jié)晶，即為所述2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬。
[0006] 步驟1)所述雷公藤為雷公藤植株的根屯、、根皮、莖和葉。
[0007] 步驟1)中用雷公藤重量30-35倍體積的乙醇進(jìn)行滲漉，滲漉液每500mL收集一 次，濃縮至干，加1血S氯甲燒溶解后采用TLC對其進(jìn)行定性檢測，直至檢測為陰性時(shí)停止 滲漉。
[0008] 步驟2)每次萃取的過程中需振搖20次，每次萃取后將收集的乙酸乙醋溶液濃縮， 采用TLC對其進(jìn)行定性檢測，直至檢測為陰性時(shí)停止萃取。
[0009] 步驟2)所述微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為40°C，干燥時(shí)間為 30min〇
[0010] 步驟3)中干粉與硅膠柱層析所用硅膠的重量比為1:80 ;采用濕法上柱。 1] 步驟3)所述微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為40°C，干燥時(shí)間為 lOmin。
[0012] 步驟4)中粗提干粉與硅膠柱層析所用硅膠的重量比為1:120 ;采用濕法上柱。
[0013]步驟4)梯度洗脫中S氯甲燒與甲醇的混合比例依次為100:0、99:1、98:2、97:3、 96:4。
[0014] 所得2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬的結(jié)構(gòu)式為：
mp 233~235°C，HR-MS[M+田+:375. 145,[a]:+165(C0.05，CHCl2)。與Kedde試劑顯 紫紅色反應(yīng)，UV:218nm，IR A (cmi):3560,3010,2980，1780，1750，1720，1435，1390,939， 908dMS?/&374,358，：M3,330,315,301，296,255，175，105,55d1H-NMR(CDC13)5:0.93 (d，方7Hz，17-CH3)，1. 16 (d，方7Hz，16-CH3)，1. 19 (s，20-CH3)，1.22，1.95(m，l-H)，2. 39 (Se5pt，^7Hz，15-H)，2.08,2.69 (dd，^5，15Hz，6-H)，2.88(br，5-H)，3.18(s，2-OH)，3.49 (d，方甜z，7-H)，3. 88 (d，方3Hz，12-H)，4. 16 (d，方3Hz，ll-H)，4. 58 (t，方13. 6Hz，2-H)， 5. 03 (d，19-2H)。"c-NMR(CDCl3)5 :38. 3 (1-C)，61.4 (2-C)，127. 9 (3-C)，163. 03 (4-C)， 40. 9 (5-C)，23. 5 (6-C)，59. 89 (7-C)，60. 8 (8-C)，65. 8 (9-C)，36. 0 (10-C)，56. 3 (11-C)， 58.89 (12-0,66.3 (13-0,197.03 (14-0 , 29.23 (15-0,18.30 (16-0,17.3 (17-C), 173.3 (18-0,69.5 (19-0,16.09 (2〇-〇〇
[0015] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：按本發(fā)明提取純化方法制得的2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬 純度可達(dá)99%，得率為萬分之一，比現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的提取工藝提高近100倍，可為闡明雷公 藤中的化學(xué)成分、藥理作用等研究提供科學(xué)的依據(jù)和物質(zhì)基礎(chǔ)，也可為臨床應(yīng)用雷公藤提 供科學(xué)的依據(jù)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0017] 實(shí)施例1 一種2a-徑基雷公藤內(nèi)醋酬的提取純化方法，其包括W下步驟： 1) 將雷公藤植株的根屯、、根皮、莖和葉10kg粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙 醇浸泡24h后，用雷公藤重量30倍體積的乙醇進(jìn)行滲漉，滲漉液每500mL收集一次，濃縮至 干，加ImLS氯甲燒溶解后采用TLC對其進(jìn)行定性檢測，然后將滲漉液合并、濃縮，得乙醇濃 縮液； 2) 按體積比1:1. 5將所得乙醇濃縮液加乙酸乙醋進(jìn)行萃取，每次萃取的過程中需振搖 20次，每次萃取后將收集的乙酸乙醋溶液濃縮，采用TLC對其進(jìn)行定性檢測，萃取3次后將 萃取得到的乙酸乙醋溶液合并、濃縮，經(jīng)微波干燥制得干粉，微波干燥的功率為500W，頻率 為2450MHz，溫度為40°C，干燥時(shí)間為30min; 3) 將所得干粉加等體積乙酸乙醋溶解后，按干粉與硅膠的重量比為1:80稱取硅膠， 經(jīng)濕法上柱后采用硅膠柱層析進(jìn)行分離，將乙酸乙醋與石油酸按體積比2:3混合作為洗脫 劑進(jìn)行洗脫，每500mL洗脫液收集一份，經(jīng)濃縮后采用TLC對濃縮液進(jìn)行定性檢測，合并含 有相同成分的濃縮液，回收溶劑后微波干燥得粗提干粉，其微波干燥的功率為500W，頻率為 2450MHz，溫度為40°C，干燥時(shí)間為lOmin; 4) 將所得粗提干粉加等體積=氯甲燒溶解后，按干粉與硅膠的重量比為1:120稱取娃 膠，經(jīng)濕法上柱后采用硅膠柱層析進(jìn)行分離，按=氯甲燒與甲醇的混合比例為1〇〇:〇、99:1、 98:2、97:3、96:4配制洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經(jīng)濃縮后采用化C對 濃縮液進(jìn)行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將從=氯甲燒與甲醇混合比例為97:3的部分得到的精提物加二氯甲燒溶解，在二 氯甲燒和乙酸的混合液中重結(jié)晶3次，得無色針狀結(jié)晶0.98g，即為所述2a-徑基雷公藤內(nèi) 醋酬，純度為99. 3%。 陽〇1引實(shí)施例2 一種2a-徑基