。保藏日期是2015年6月23日，保藏號是CGMCCNo. 10989。經(jīng)微生物學(xué)鑒定為 Trichodermaviride。該菌株最適培養(yǎng)條件：溫度25°C-30°C，pH為5-5. 5,培養(yǎng)基為馬鈴 馨葡萄糖瓊脂（PDA)培養(yǎng)基；該菌株菌落開始時為白色，致密，圓形，向四周擴(kuò)展，后從菌落 中央產(chǎn)生綠色抱子，中央變成綠色，菌落周圍有白色菌絲的生長帶，最后整個菌落全部變成 綠色；抱子呈楠圓，C〇2對該菌株生長的影響取決于C〇2的濃度和培養(yǎng)基的抑值，在堿性基 質(zhì)中，高濃度的C〇2有利于編號為XJ-3菌株的生長；該菌株能夠利用多種有機(jī)物作為碳源， 較理想的是單糖、雙糖、多糖、嚷嶺、喀晚和氨基酸等；該菌株在富含碳水化合物的培養(yǎng)基上 產(chǎn)生大量酸類物質(zhì)，用葡萄糖或淀粉作為碳源，該菌產(chǎn)生60%- 80%的巧樣酸；在緩沖介 質(zhì)中，錠是該菌株最易利用的氮源，其他氮源如氨基酸、尿素、硝酸鹽、亞硝酸鹽也能維持其 正常生長；W天冬口素為氮源時，生長特別好，含氮量低，會促進(jìn)抱子形成；硫酸儀的存在 可W降低高濃度硝酸鹽對該菌株的負(fù)影響，由于得到補(bǔ)償；無機(jī)鹽及微量元素?zé)o機(jī)鹽對該 菌株的生長很重要，儀離子能促進(jìn)其生長，銅離子能促進(jìn)分生抱子色素形成，鐵離子對抱子 的形成具有重要作用，經(jīng)微生物學(xué)鑒定為TrichodermaViride菌，但是與常見的綠色木霉 菌種有明顯的菌落形態(tài)、生理生化的區(qū)別。參照《真菌鑒定手冊》對編號XJ-3菌株進(jìn)行系統(tǒng) 生理生化鑒定，經(jīng)生理生化檢測確定編號XJ-3菌株為木霉屬（Trichoderma)中的成員。通 過BLAST同源比對，菌株XJ-3的口SrDNA序列序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST分析后， 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，該編號為菌株XJ-3與I'richodermaIongibrachiatumisolateT50處于 最小分支，是其近似種，其同源性為76%;進(jìn)而將該菌株XJ-3確定為化ichodermaviride, 經(jīng)過上述系統(tǒng)分類學(xué)鑒定分類，證明了本發(fā)明提供的綠色木霉（Trichodermaviride)與常 見的綠色木霉有明顯的生理生化特性差異和分子水平的差異性，依據(jù)菌種生理生化特性分 析，分子水平分析及系統(tǒng)分類學(xué)的綜合鑒定，編號為XJ-3的菌種盡管在生理生化特性和分 子水平方面與常見的綠色木霉有明顯的差異，是一種新菌，但從分類學(xué)上，鑒定為綠色木霉 (Trichodermaviride),參見附圖 1、2 和附圖 3。
[0050]實(shí)施例二：綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989 的分離、篩選及 鑒定
[005。 1、PCR擴(kuò)增綠色木霉的rDNAITS區(qū)段及其測序
[0052] 挑取少量XJ-3菌株的單菌落，放入盛有25yL無菌水的EP管中，100 °C煮沸 8-lOmin，后迅速放入冰水混合物中5min。離屯、10000r/min、5min，4°C保存，用時取上清。
[0053]rDNAITS區(qū)段基因序列測定及其系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建：按常規(guī)方法提取菌株的 DNA，用去離子水將稀釋通用引物，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物設(shè)計如下：
[0054]ITSl(巧：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'
[00巧]ITS4(R) :5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'
[0056]rDNAITS區(qū)段基因序列測定及其系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建：按常規(guī)方法提取菌株的總 DNA，用去離子水將稀釋通用引物rDNAITS區(qū)段的PCR擴(kuò)增。引物經(jīng)合成，電泳檢測，并經(jīng) 過測序。
[0057] 2、rDNAITS區(qū)段基因序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析
[0058] 將測序得到的rDNAITS區(qū)段基因序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的核巧酸序列進(jìn) 行BLAST分析，從中獲取相近的rDNAITS區(qū)段基因序列，將XJ-3的rDNAITS區(qū)段基 因序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST分析后，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。參見附圖4所示，菌株 XJ-3 與TrichodermaIongibrachiatumisolateT50 之間進(jìn)化距離最短，是Trichoderma Iongibrachiatumisolate的近似種。結(jié)合XJ-3的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征及生理生化特性，確定其 為綠色木霉（Trichodermaviride)屬。將所測得的rDNAITS區(qū)段基因序列輸入Genbank, WBlast程序進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)它與TrichodermaIongibrachiatumisolateT50 的 rDNAITS區(qū)段基因序列的相似性最大，相似性為76 %，從而進(jìn)一步確定為Trichoderma viride,與常見的綠色木霉在生理生化特性差異和分子水平等方面具有明顯的差異性，是 一種典型的新菌。結(jié)合XJ-3的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征及生理生化特性，從分類進(jìn)化角度確定其為菌 種編號為XJ-3綜合鑒定為綠色木霉燈richodermaviride)
[0059] 實(shí)施例S:利用綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989制備棉桿 腐熟有機(jī)肥
[0060] 利用綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989制備棉桿腐熟有機(jī)肥 的具體制備方法步驟如下：
[0061] (1)菌種活化培養(yǎng)：制備綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989 菌株的馬鈴馨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，滅菌后嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，從斜面轉(zhuǎn)接至平板，溫度28°C 下培養(yǎng)5天。
[0062] (2) -級培養(yǎng)：從步驟（1)中的馬鈴馨葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基上挑取單菌落 轉(zhuǎn)接至裝有馬鈴馨葡萄糖液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，無菌操作，28°C、120;r/min培養(yǎng) 24h-48h〇
[0063] (3)二級擴(kuò)大培養(yǎng)：將上述步驟一級培養(yǎng)菌種接種于盛有馬鈴馨葡萄糖液體培養(yǎng) 基的500血錐形瓶中，無菌操作，28°C、120r/min培養(yǎng)2地-4化。
[0064] (4)水量的確定：按照摘后棉花每畝棉花賴桿產(chǎn)量為250公斤至450公斤的比例 核計標(biāo)準(zhǔn)，棉花賴桿加工需要添加水量為棉花賴桿產(chǎn)量的60% -65%。
[0065] 妨接種：將步驟（3)制備的綠色木霉（Trichodermaviride)XJ-3CGMCC NO. 10989活化菌種接種上述步驟（4)制備的水中，按照需要水量10% -15%的比例接種制 備獲得綠色木霉菌劑，并按照制備的菌劑量分別添加菌種保護(hù)劑、尿素和二胺，其中，菌種 保護(hù)劑由薦糖、谷氨酸鋼和甘油按照重量比1:1:1配比，菌種保護(hù)劑按照15%添加，尿素和 二胺分別按照30%和20%的比例添加，通過攬拌均勻制備獲得發(fā)酵基料。
[0066] (6)棉桿粉碎還田：在秋天摘完棉花后，通過大田作業(yè)將棉桿粉碎，粉碎后棉桿的 長度控制為3cm-5cm，在粉碎過程中利用噴淋裝置在粉碎后的棉桿上噴施步驟（5)制備的 發(fā)酵基料。
[0067] (7)發(fā)酵：將步驟（6)制備的發(fā)酵基料隨同粉碎后的棉花賴桿一起揚(yáng)撒在棉花地 里，采用常見的翻地設(shè)備將發(fā)酵基料掩埋，利用冬灌水將棉花地大水蔓概，頭一年秋天至第 二年春天期間通過發(fā)酵將棉花賴桿制備獲得棉桿腐熟有機(jī)肥。
[0068] 本發(fā)明中，采用綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989制備的棉 桿腐熟有機(jī)肥呈現(xiàn)褐色，手抓時，柔軟有彈性。本發(fā)明通過利用自行篩選的菌種和棉桿進(jìn)行 發(fā)酵制備獲得棉桿腐熟有機(jī)肥，既解決了棉桿廢棄物的利用、降低焚燒棉桿對環(huán)境的污染， 同時增加了棉花±地的肥力，有利于棉花的種植。
[0069]實(shí)施例四：利用綠色木霉（Trichodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989 制備棉桿 腐熟有機(jī)肥
[0070] 利用綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989制備棉桿腐熟有機(jī)肥 的具體制備方法步驟如下：
[0071] (1)菌種活化培養(yǎng)：制備綠色木霉燈richodermaviride)XJ-3CGMCCNO. 10989 菌 株的馬鈴馨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，滅菌后嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，從斜面轉(zhuǎn)接至平板，溫度28°C下 培養(yǎng)5天。
[0072] (2) -級培養(yǎng)：從步驟（1)中的馬鈴馨葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基上挑取單菌落 轉(zhuǎn)接至裝有馬鈴馨葡萄糖液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，無菌操作，28°C、120;r/min培養(yǎng) 24h-48h〇
[0073] (3)二級擴(kuò)大培養(yǎng)：將上述步驟一級培養(yǎng)菌種接種于盛有馬鈴馨葡萄糖液體培養(yǎng) 基的500血錐形瓶中，無菌操作，28°C、120r/min培養(yǎng)2地-4化。
[0074] (4)水量的確定：按照摘后棉花每畝棉花賴桿產(chǎn)量為250公斤的比例核計標(biāo)準(zhǔn)，棉 花賴桿加工需要添加水量為棉花賴桿產(chǎn)量的60%，因此水量為15化。
[00"75]妨接種：將步驟（3)制備的綠色木霉（Trichodermaviride)XJ-3CGMCC NO. 10989活化菌種接種上述步驟（4)制備的水中，按照需要水量10%的比例接種制備獲得 綠色木霉菌劑，接入的菌液為15以并按照制備的菌劑量分別添加菌種保護(hù)劑、尿素和二胺， 其中