芽孢桿菌dy26-020及其在制備防治植物致病真菌發(fā)酵上清液中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及芽孢桿菌，尤其是涉及一種芽孢桿菌DY26-020及其在制備防治植物 致病真菌發(fā)酵上清液中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人口的增長(zhǎng)，農(nóng)用土地越來越稀少，控制植物病蟲害對(duì)增加農(nóng)產(chǎn)品的輸出顯 得越為重要。由于化學(xué)農(nóng)藥的毒副作用，以及植物病蟲害對(duì)已有農(nóng)藥的耐藥性及新病害 的出現(xiàn)，要求不斷開發(fā)新的農(nóng)藥。生物農(nóng)藥由于其天然來源，因此施用后具有其自然的 降解途徑、對(duì)環(huán)境污染小、人畜毒性低、靶生物較難產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，使其成為農(nóng)業(yè)生 產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展的新方向。（周仕濤.我國(guó)植物源農(nóng)藥的研究及前景[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué) 報(bào)，2004, 17(4) : 525-529)
[0003] 近年來，從傳統(tǒng)的土壤微生物中發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物出現(xiàn)明顯的下降趨 勢(shì)。海洋微生物主要包括生活在海水、海洋沉積物及與海洋動(dòng)植物共附生的微生物，是一 個(gè)正在開發(fā)的重要生物資源（陳菲菲，王勇，王以光，等.海洋微生物來源的天然產(chǎn)物 開發(fā)研究進(jìn)展[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2011，17(2):287-294)。海洋環(huán)境具有高壓、高 鹽、低營(yíng)養(yǎng)、低溫等特點(diǎn)，在這種環(huán)境中海洋微生物種類約為陸生微生物的20倍以上。由 于代謝途徑不同于陸地微生物，海洋微生物可產(chǎn)生許多新穎的生物活性物質(zhì)，如酶、抗生 素、多I唐及月旨類等（Cart6B K. Biomedical potential of marine natural products [J]. Bioscience，1996,46(4) : 271-286)。因此海洋微生物資源是新型化合物或新型活性代謝產(chǎn) 物的潛在來源。
[0004] 芽孢桿菌是一個(gè)多樣性十分豐富的微生物類群，分布廣泛，能夠產(chǎn)生耐熱抗逆的 芽孢，利于生防菌劑的生產(chǎn)、加工及在環(huán)境中存活與繁殖。此外，芽孢桿菌不但可以單獨(dú) 使用，還可以與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配，實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)防效的目的，也可與其他生防菌混合使用，實(shí)現(xiàn)多 種抗生菌功能互補(bǔ)、兼防多種病害的協(xié)同防治效果，這些特點(diǎn)使其成為一種理想的生防微 生物（朱玥妍，劉姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科 學(xué)，2013, 40 (34) : 16635-16638)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的之一在于提供一株芽孢桿菌（Bacillus sp. )DY26_020。
[0006] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種芽孢桿菌（Bacillus sp. )DY26-020在制備防治 植物致病真菌發(fā)酵上清液中的應(yīng)用。
[0007] 所述防治植物致病真菌發(fā)酵上清液的使用方法如下：將防治植物致病真菌發(fā)酵上 清液直接或稀釋后噴灑在植物上。
[0008] 所述芽孢桿菌（Bacillus sp. )DY26-020分離自中國(guó)大洋第26次科學(xué)考查所采集 的沉積泥樣品（S003站點(diǎn)；w63° 45. 3496'，S3。39. 8693');該菌已于2015年6月27 日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址為中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072,保藏中心保 藏編號(hào)為 CCTCC NO :M 2015409。
[0009] 所述芽孢桿菌（Bacillus sp.)DY26-020通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)擴(kuò)增其16S ri)NA序列，與美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（NCBI)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中相應(yīng)的序列進(jìn)行比對(duì) 分析，發(fā)現(xiàn)其與芽孢桿菌屬（Bacillus sp.)具有99%的序列相似性；芽孢桿菌（Bacillus sp. )DY26-02016S rDNA 序列的 GenBank 登錄號(hào)為 KT240125。
[0010] 所述芽抱桿菌（Bacillus sp. )DY26_020 16S rDNA部分序列如下：
[0011] 1 (:"\TGGGA(」CT TGCTCCCTGA 51 (KiTAACCTGC CTCH'yV八C心 1Q1 CQG^GGTTO TCTGAACCG€ M^GGTT(^QA CMAAAAGGT GGCTTCGQeT卜I 八(VACTTACA G肌KjACCCG ^ °UI CTCVUT八八(.K.i CGACGATGa.n'AGtTGACT 251 TCjCjGACTGAXj A(；ACCKK；CC\AGA(；T(；CTACGGQAQGCAGCAQJ/kGGGAAJC 301 TTCCCK'AATG GACG八八八(HT T(i\C(.K.iA(K.A AC'GCCGCG^ 351 GTTTTCG( AT (.(.HA八八(.K'TC' RHTGTTAGG 401 ATA(KK」a:::GC ACCTTGACGG 451 T(K，CAGC'A(.iC CCX'GGTAATA C(.r「AGGT(.K.;C AAG(t 501 G(.K;C(.VT.AAAG (.K;CTC(X、AG(K:(KT 551 (.K.K、TCAAa.X.i (.K.K'"\(.K.K.;TCA TT(.K.iAAACT(.K;W^^ 601 GG A((丌GG A ATTU:V\(:(.iT( H'A( K:(.K.n'( A mi ACACCAGTGGCXiAAGGCTjACTC叮(:T(.K.nTTGTAAC、TGA^ "01 八八AGCGTGW-K-;AGCGAACA(:i 7^1 八rGAT(.iA(.iT(.K、TAA(iT(.VrrAGGG(.K.Vrn^ 801 八CGCATT.八八(:! CACTCCGCCT (.K.K.iGA(」TAC(.KiTC(X、AAGACTG
[0012] ；85l AGGAATTGAC #GSGaCCCG：C AGAAClCGGTG GAClCATGTGG TTTWTCCM 901 八(-;(:7\八(議、(:>八八(iW'CTTAC CAGGTCTTGA CATCCTC^ 951 GATAGGACGT CCCCTTCGGG GGCAGAGTGA CAG抓 1001 T(:AGC:TC(.n-(VR:GTGAGATC; TTGG(.;TTAAG T(.TCGCAACG A 105\ TTGATC'TTAG TTGC(:'八(:（AT TCAGTTG(嘆 1101 (.L'KCAAACCGG八（K;八八?.;丁(.;（；（.K.;AT(;AC(.H-C八八八TC'AT^ 1151 ACCTGCK.K'TA CACAC、GT(.K:T ACAATGGAC八GAACAAA(.K.K.; i 20 i GCGAGOTTAA GCCAATCCCA C八八八TCTGTT CTCAGn^^^ 1251 (.iC'AAC'TCXiAC' TGCXiTGAACjC' TGGAATCGCTAGTAATCGCCj GATCAGCATCi 1301 CCGCGGTG八八TACGTTCCCX，CKiCCTTGTAC ACAC、CW:TCt 135! AGA(:m_ TGTA ACV\(、Ca:;AAG TaJGTGA(仙^
[0013] 將芽孢桿菌（Bacillus sp.)DY26-020在含有5ml LB培養(yǎng)基的試管中進(jìn)行活化培 養(yǎng)，然后將活化的菌株接種到500mL LB培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵結(jié)束后離心除去菌體，得到 發(fā)酵上清液，該發(fā)酵上清液直接或稀釋后噴灑植物用于致病真菌的防治。
[0014] 所述LB培養(yǎng)基的組成如下：氯化鈉10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L， 121°C高滅壓菌20min。
[0015] 所述離心除去菌體是在10000r/min下離心15min。
[0016] 所述菌株活化培養(yǎng)時(shí)間為12~24h，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為48~60h ;所述細(xì)菌培養(yǎng)發(fā) 酵的溫度為28~30°C，發(fā)酵培養(yǎng)搖床轉(zhuǎn)速為180~220r/min。
[0017] 所述植物致病真菌包括但不限于鐮刀菌、香蕉炭疽菌、宛氏擬青霉、核盤菌、長(zhǎng)柄 鏈格孢、綠色木霉、立枯絲核菌、互生鏈格孢、灰霉菌、膠孢炭疽菌。對(duì)油菜菌核病菌（核盤 菌）和小麥赤霉病菌（鐮刀菌）的防治的盆栽試驗(yàn)中有較好的生物防治效果，對(duì)油菜菌核 病菌（核盤菌）防效可以達(dá)到65. 5%，小麥赤霉病菌（鐮刀菌）防效67. 9%。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：發(fā)酵上清液的制備工藝簡(jiǎn)單，抑真菌譜 廣，生防效果好。
【附圖說明】
[0019] 圖1為芽抱桿菌（Bac