一種同時萃取升麻中咖啡酸和阿魏酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種采用新制備的分子印跡材料同時萃取升麻中咖啡酸和阿魏酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]分子印跡技術(shù)旨在構(gòu)造對目標(biāo)化合物具有高選擇性甚至專一結(jié)合能力的超分子化合物，由于其中的結(jié)合位點與目標(biāo)分子在形狀、大小及化學(xué)功能基方面的匹配性，分子印跡聚合物可用于對復(fù)雜體系中目標(biāo)化合物的選擇富集甚至專一識別。迄今，分子印跡技術(shù)已廣泛應(yīng)用在固相萃取、色譜分離、傳感技術(shù)，免疫分析及模擬酶催化等領(lǐng)域。然而，在過去關(guān)于分子印跡的大多數(shù)研究中，主要集中在對單一模板的印跡制備與分子識別，這些研究顯示了單一模板印跡聚合物較高的分子識別選擇性，而對多模板同時印跡的分子印跡聚合物則研究不多。從理論上說，當(dāng)幾種分子與功能單體配合再被同時印跡后，得到的印跡材料應(yīng)對多種模板呈現(xiàn)強(qiáng)的選擇識別能力。如是這樣，則可選擇某一類化合物，或其中幾種代表化合物作模板制備多模板印跡聚合物，利用其選擇識別性可實現(xiàn)對植物材料中某一類化合物的同時富集和分離，這對藥物中某一類活性化合物的分離富集及新藥開發(fā)具有重要應(yīng)用價值。
[0003]升麻為一種辛涼解表中藥，性甘味辛，具有發(fā)表透疹、清熱解毒、升舉陽氣之功效。臨床上常用于治療風(fēng)熱頭痛、咽喉腫痛及久瀉脫肛等病癥。升麻中的苯丙酸類成分主要有咖啡酸和阿魏酸等，前者具有抗菌、抗病毒、解毒及抗凝血的作用；阿魏酸可抑制血小板聚集、抗血栓形成及調(diào)節(jié)人體免疫等功效。利用升麻中的咖啡酸及阿魏酸可開發(fā)新型抗炎藥物。但同時高效選擇提取升麻中的這些苯丙素類化合物，仍是分離和純化領(lǐng)域的難題。常規(guī)的溶劑提取及樹脂分離選擇性不高，難以控制條件實現(xiàn)對植物活性部位的同時選擇萃取。采用多種同類化合物為模板分子，通過構(gòu)造與之相匹配的印跡識別位點，可以實現(xiàn)分子印跡聚合物選擇富集多種同類化合物。目前，還未見阿魏酸-咖啡酸復(fù)合模板分子印跡制備及應(yīng)用的報道。因此，我們開發(fā)了一種以阿魏酸-咖啡酸雙模板分子印跡聚合物為固相萃取材料，同時萃取升麻初提液中阿魏酸和咖啡酸的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是克服現(xiàn)有復(fù)雜樣品萃取技術(shù)中選擇性低、回收率不高、產(chǎn)品純度低等缺陷，提供了一種分子印跡固相萃取目標(biāo)物的方法，通過金屬離子、多模板分子、功能單體有效配合再進(jìn)行印跡的制備方法，獲得一種Zn2+-阿魏酸-咖啡酸配位印跡聚合物，并以之為固相萃取材料，同時萃取升麻中的阿魏酸和咖啡酸。
[0005]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明采取以下工藝步驟:
(I)分子印跡材料的制備:稱取模板分子阿魏酸-咖啡酸混合物、乙酸鋅溶于乙腈-二甲基亞砜混合溶液中震蕩10 min，加入功能單體4-VP，震蕩30 min，使其與功能單體充分作用，再加入混合交聯(lián)劑EDMA-DVB和引發(fā)劑AIBN，充分混合后，轉(zhuǎn)入圓底燒瓶，超聲脫氣15min，通入氬氣15 min，封瓶；將圓底燒瓶放入60 °(:恒溫水浴鍋中聚合反應(yīng)24 h，將所得的塊狀聚合物粉碎，過200目篩后，依次用四氫呋喃、甲醇和水沉降，去除溶液上層的細(xì)小粒子后過濾，在超聲條件下用0.10 mmol/L EDTA洗去聚合物中的金屬離子，用甲醇-乙酸(9/1，v/v)溶液、甲醇、水溶液洗滌，除去洗脫劑、殘余溶劑和模板分子，最后放入真空干燥箱于60 °C中干燥24 h即得；
(2)升麻中咖啡酸和阿魏酸的萃取:稱取20.0g分子印跡聚合物裝入固相萃取筒中，加入20mL升麻提取液，依次用1mL水、1mL甲醇-水(體積比為3:7)、1mL甲醇-7K _乙腈(體積比為4:4:2)洗滌雜質(zhì)，再用20mL甲醇洗脫目標(biāo)物即完成萃取。
[0006]所述復(fù)合模板分子中阿魏酸和咖啡酸的摩爾比為1: 1.5-1.5:1;金屬鋅離子與復(fù)合模板分子的總摩爾數(shù)之比為1:1-3:1 ;復(fù)合模板分子的總摩爾數(shù)與功能單體的用量比為1:3-1:10 ;復(fù)合模板分子與混合交聯(lián)劑EDMA-DVB (體積比1:1)的總摩爾數(shù)之比為1:10-1:30。
[0007]采用本方法同時萃取升麻中咖啡酸和阿魏酸，阿魏酸和咖啡酸的回收率分別可達(dá)91_93%和94_96%，回收率很尚。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果還在于:
本發(fā)明采用配位印跡技術(shù)，提高了模板分子與功能單體的結(jié)合強(qiáng)度，提高了分子印跡真實度，大幅改善了印跡效果；以Zn2+-阿魏酸-咖啡酸配合物為模板分子，通過優(yōu)化雙模板分子的配比、金屬離子與模板分子的量比及功能單體用量，獲得了能同時識別阿魏酸和咖啡酸的分子印跡聚合物；將其作為固相萃取填料，在實際樣品應(yīng)用中成功實現(xiàn)了對升麻中阿魏酸和咖啡酸的同時萃取，為植物藥用活性部位的分離純化提供了一種新的印跡材料制備和應(yīng)用新方法，具備很強(qiáng)的實用價值。
【具體實施方式】
[0009]以下對同時萃取升麻中咖啡酸和阿魏酸的方法進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0010]實施例1:
(1)分子印跡材料的制備:稱取模板分子阿魏酸-咖啡酸混合物、乙酸鋅溶于乙腈-二甲基亞砜混合溶液中震蕩10 min，加入功能單體4-VP，震蕩30 min，使其與功能單體充分作用，再加入混合交聯(lián)劑EDMA-DVB和引發(fā)劑AIBN，充分混合后，轉(zhuǎn)入圓底燒瓶，超聲脫氣15min，通入氬氣15 min，封瓶；將圓底燒瓶放入60 °(:恒溫水浴鍋中聚合反應(yīng)24 h，將所得的塊狀聚合物粉碎，過200目篩后，依次用四氫呋喃、甲醇和水沉降，去除溶液上層的細(xì)小粒子后過濾，在超聲條件下用0.10 mmol/L EDTA洗去聚合物中的金屬離子，用甲醇-乙酸(9/1，v/v)溶液、甲醇、水溶液洗滌，除去洗脫劑、殘余溶劑和模板分子，最后放入真空干燥箱于60 °C中干燥24 h即得；
(2)升麻中咖啡酸和阿魏酸的萃取:稱取20.0g分子印跡聚合物裝入固相萃取筒中，加入20mL升麻提取液，依次用1mL水、1mL甲醇-水(體積比為3:7)、1mL甲醇-水-乙腈(體積比為4:4:2)洗滌雜質(zhì)，再用20mL甲醇洗脫目標(biāo)物即完成萃取。
[0011]所述復(fù)合模板分子中阿魏酸和咖啡酸的摩爾比為1:1.4;金屬鋅離子與復(fù)合模板分子的總摩爾數(shù)之比為1.2:1 ;復(fù)合模板分子的