mg Na2MO4.2HZ0, 22mgZnSO4.2H20, 1mg CoCl2.6H20, and 180mg MnCl2.4H20.將配制好的培養(yǎng)基 Ml，高壓滅菌120 °C 20min。
[0046]將Dinoroseobactershibae DFL12 (DSM16493)，接種到此培養(yǎng)基，28°C 180rpm，培養(yǎng)過夜。菌體池度達(dá)到0D600?I左右。將菌液在8000g離心5min，去上清，收集菌體。在菌體中加入等量的0.8% Nacl懸濁，同樣條件離心。此清洗過程重復(fù)兩次。最后將菌體用等量的0.8% Nacl懸濁。作為菌體前培養(yǎng)液待用。接種及菌體的清洗過程均在超凈臺(tái)進(jìn)行。
[0047]2.4細(xì)菌培養(yǎng)
[0048]儲(chǔ)備液M2 成分為 IL 含有 NaCl 40g, KCl 0.6g,，MgSO4.7H20 1.0g, CaCl2.2H200.lg, NH4Cl 0.6g, K2HPO40.6g,微量元素溶液2mL，pH 7.8.微量元素溶液(L)配方為:3.15g FeCl3.6H20, 4.36g Na2EDTA.2H20, 9.8mg CuSO4.5H20, 6.3mgNa2MO4.2H20, 22mgZnS04.2H20, 1mg CoCl2.6H20, and 180mg MnCl2.4H20.將配制好的儲(chǔ)備液M2，高壓滅菌120°C 20mino
[0049]取M2培養(yǎng)基儲(chǔ)備液Iml到4ml的培養(yǎng)瓶，加入0.6ml滅菌蒸餾水，0.2ml的有機(jī)碳儲(chǔ)備液，0.2ml菌體前培養(yǎng)液。最終培養(yǎng)體系為2ml。將培養(yǎng)瓶加蓋，壓緊。放入微活性量熱儀中培養(yǎng)。記錄培養(yǎng)過程中的熱量變化
[0050]2.5有機(jī)碳生物活性分析
[0051]反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)培養(yǎng)過程中的熱量變化，進(jìn)行有機(jī)碳生物活性的分析。
[0052]由本實(shí)施例結(jié)果可見，所分析的有機(jī)碳中葡萄糖、乙酸、甘油對(duì)海洋細(xì)菌Dinoroseobacter shibae DFL12 (DSM16493)是具有生物活性的，而葡糖胺則不具有活性。其活性大小為葡萄糖 > 乙酸 > 甘油 > 葡糖胺。
[0053]本發(fā)明實(shí)施例2糖、醇及有機(jī)酸的生物活性的分析結(jié)果參見圖2。
[0054]實(shí)施例3糖及氨基酸生物活性的分析
[0055]3.1微活性量熱儀的準(zhǔn)備
[0056]微生物代謝活性的分析在微活性量熱儀中進(jìn)行。本實(shí)施例將溫度設(shè)定為28°C，穩(wěn)定儀器I?2h。
[0057]3.2有機(jī)碳儲(chǔ)備液的準(zhǔn)備
[0058]本實(shí)施例分析了有機(jī)碳葡萄糖、D-丙氨酸，D-谷氨酸、D-蛋氨酸及D-亮氨酸的生物活性。有機(jī)碳儲(chǔ)備液為10mM，pH調(diào)節(jié)為7.0。將此儲(chǔ)備液用0.22 μπι已經(jīng)滅菌的微孔濾膜過濾滅菌。
[0059]3.3細(xì)菌的前培養(yǎng)
[0060]本實(shí)施例采用培養(yǎng)基Ml成分(L)為:Bacto Peptone, 1.0g ；yeast extract, 1.0g ；KCl, 0.3g ；MgS04.7H20, 0.5g ；CaCl2.2H20, 0.038g ；NH4CI, 0.3g ；K2HP04, 0.3g ；andNaCl, 20.0g ; ImL微量元素溶液，pH 7.8.微量元素溶液(L)的配方為=FeSO4.7H20，2.1g ;H3BO3, 30mg ；MnCl2.4Η20，0.Ig ；CoCl2.6Η20，0.19g ；CuCl2.6H20，2mg ；ZnSO4.7H20，0.144g ；Na2MoO4.2H20，36mgo
[0061]將配制好的培養(yǎng)基Ml，高壓滅菌120 °C 20min。將交替單胞菌Alteromonasmacleodii (deep type) (DSM17117)，接種到此培養(yǎng)基，28°C 180rpm，培養(yǎng)過夜。菌體池度達(dá)到0D600?I左右。將菌液在8000g離心5min，去上清，收集菌體。在菌體中加入等量的
0.8% Nacl懸濁，同樣條件離心。此清洗過程重復(fù)兩次。最后將菌體用等量的0.8% Nacl懸濁。作為菌體前培養(yǎng)液待用。接種及菌體的清洗過程均在超凈臺(tái)進(jìn)行。
[0062]3.4細(xì)菌培養(yǎng)
[0063]儲(chǔ)備液M2 成分(L)為:KC1, 0.6g ；MgS04.7H20, 1.0g ；CaCl2.2H20, 0.076g ；NH4Cl, 0.6g ；K2HP04, 0.6g ；and NaCl, 40.0g ;2mL 微量元素溶液，pH 7.8.微量元素溶液(L)的配方為:FeSO4.7Η20，2.Ig ;H3B03，30mg ;MnCl2.4Η20，0.Ig ;CoCl2.6Η20，0.19g ;CuCl2 *6H20,2mg ；ZnSO4.7Η20，0.144g !Na2MoO4.2Η20，36mg，pH 7.8。將配制好的儲(chǔ)備液 M2，高壓滅菌120°C 20min。
[0064]取Iml儲(chǔ)備液M2到4ml的培養(yǎng)瓶，加入0.6ml滅菌蒸餾水，0.2ml的有機(jī)碳儲(chǔ)備液，0.2ml菌體前培養(yǎng)液。最終培養(yǎng)體系為2ml。將培養(yǎng)瓶加蓋，壓緊。放入微活性量熱儀中培養(yǎng)。記錄培養(yǎng)過程中的熱量變化
[0065]3.5有機(jī)碳生物活性分析
[0066]反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)培養(yǎng)過程中的熱量變化，進(jìn)行有機(jī)碳生物活性的分析。
[0067]由本實(shí)施例結(jié)果可見，對(duì)海洋細(xì)菌Alteromonas macleodii (deep type)(DSM17117)葡萄糖是活性的，而D-丙氨酸，D-谷氨酸、D-蛋氨酸及D-亮氨酸則不具有生物活性。
[0068]本發(fā)明實(shí)施例3糖及氨基酸生物活性的分析結(jié)果參見圖3。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于包括以下步驟: 1)將有機(jī)碳配制成水溶液，得有機(jī)碳儲(chǔ)備液； 2)將步驟I)得到有機(jī)碳儲(chǔ)備液過濾滅菌。 3)將待分析的細(xì)菌接種到培養(yǎng)基Ml中進(jìn)行前培養(yǎng)，使得菌體濁度達(dá)到0D600= 1，將菌液離心，去上清，收集菌體，在菌體中加入NaCl，懸濁后再次離心，最后將菌體用NaCl懸濁，得菌體前培養(yǎng)液； 4)將儲(chǔ)備液M2裝入培養(yǎng)瓶中，再加入滅菌蒸餾水、有機(jī)碳儲(chǔ)備液、菌體前培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶加蓋，放入微活性量熱儀中培養(yǎng)，記錄培養(yǎng)過程中的熱量變化，進(jìn)行有機(jī)碳生物活性分析。2.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟I)中，所述有機(jī)碳采用天然有機(jī)碳或人工合成有機(jī)碳。3.如權(quán)利要求2所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于所述天然有機(jī)碳選自糖類、氨基酸、有機(jī)酸中的至少一種。4.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟I)中，所述有機(jī)碳儲(chǔ)備液的PH值為7。5.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟2)中，所述過濾滅菌是用0.22 μπι已經(jīng)滅菌的微孔濾膜過濾滅菌。6.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟3)中，所述培養(yǎng)基 Ml 的組成為 IL 中含有 Bacto Peptone, 1.0g ；yeast extract, 1.0g ；KC1, 0.3g ；MgSO4.7H20, 0.5g ；CaCl2.2H20, 0.038g ；NH4Cl, 0.3g ；K2HPO4, 0.3g ；NaCl, 20.0g ；lmL 微量元素溶液，ρΗ7.8 ;所述微量元素溶液 IL 中含有 FeSO4.7H20，2.1g ；H3BO3, 30mg ；MnCl2.4H20，0.1g ；CoCl2.6Η20，0.19g ;CuCl2.6H20，2mg ；ZnSO4.7Η20，0.144g ；Na2MoO4.2H20，36mg。7.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟3)中，所述離心的條件為8000g離心5min ;所述在菌體中加入NaCl可在菌體中加入與菌液等量的質(zhì)量百分濃度為0.8%的NaCl。8.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟3)中，所述再離心的條件可為8000g再離心5min ;所述最后將菌體用NaCl懸濁可將菌體用與菌液等量的質(zhì)量百分濃度為0.8%的NaCl懸濁。9.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟4)中，所述儲(chǔ)備液 M2 的成分為 IL 中含有 KCl, 0.6g ；MgS04.7H20, 1.0g ；CaCl2.2H20, 0.076g ；NH4Cl, 0.6g ；K2HPO4, 0.6g ；NaCl, 40.0g ；2mL微量元素溶液，pH 7.8 ;所述微量元素溶液IL中含有FeSO4.7Η20，2.Ig ;H3B03，30mg ；MnCl2.4Η20，0.Ig ；CoCl2.6Η20，0.19g ；CuCl2.6H20，2mg ；ZnSO4.7H20，0.144g ；Na2MoO4.2H20，36mg，pH 7.8。10.如權(quán)利要求1所述有機(jī)碳生物活性的分析方法，其特征在于在步驟4)中，所述儲(chǔ)備液M2、滅菌蒸餾水、有機(jī)碳儲(chǔ)備液、菌體前培養(yǎng)液的體積比為1: 0.6: 0.2: 0.2，培養(yǎng)瓶的容積為4ml，最終培養(yǎng)體系為2ml。
【專利摘要】有機(jī)碳生物活性的分析方法，涉及分子檢測(cè)。提供可實(shí)時(shí)定量分析有機(jī)碳對(duì)海洋細(xì)菌生物活性的有機(jī)碳生物活性的分析方法。1)將有機(jī)碳配制成水溶液，得有機(jī)碳儲(chǔ)備液；2)將步驟1)得到有機(jī)碳儲(chǔ)備液過濾滅菌。3)將待分析的細(xì)菌接種到培養(yǎng)基M1中進(jìn)行前培養(yǎng)，使得菌體濁度達(dá)到OD600＝1，將菌液離心，去上清，收集菌體，在菌體中加入NaCl，懸濁后再次離心，將菌體用NaCl懸濁，得菌體前培養(yǎng)液；4)將儲(chǔ)備液M2裝入培養(yǎng)瓶中，再加入滅菌蒸餾水、有機(jī)碳儲(chǔ)備液、菌體前培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶加蓋，放入微活性量熱儀中培養(yǎng)，記錄培養(yǎng)過程中的熱量變化，進(jìn)行有機(jī)碳生物活性分析。靈敏度高、可實(shí)時(shí)檢測(cè)、容易操作，重復(fù)性好，精確度高。
【IPC分類】G01N25/20, C12Q1/02
【公開號(hào)】CN105039490
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510551543
【發(fā)明人】張子蓮, 焦念志, 王蕊
【申請(qǐng)人】廈門大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年9月1日