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【主權(quán)項】
1. 用于合成具有修飾的N-糖基化譜之目的蛋白質(zhì)的方法，其包括：在植物、植物部分 或植物細胞中共表達核苷酸序列，所述核苷酸序列編碼第一核苷酸序列和第二核苷酸序 列，所述第一核苷酸序列編碼雜合蛋白GNTl-GalT，所述雜合蛋白包含與0-1，4-半乳糖基 轉(zhuǎn)移酶（GalT)催化結(jié)構(gòu)域融合的N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶（GNTl) CTS結(jié)構(gòu)域，所述第一核 苷酸序列與在所述植物中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)有效連接，所述第二核苷酸序列編碼目的蛋 白質(zhì)，所述第二核苷酸序列與在所述植物中有活性的第二調(diào)節(jié)區(qū)有效連接；共表達所述第 一和第二核苷酸序列，從而合成目的蛋白質(zhì)，其包含具有修飾的N-糖基化譜的聚糖。2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列在植物中瞬時表 達。3. 權(quán)利要求1的方法，其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列在植物中穩(wěn)定表 達。4. 權(quán)利要求1的方法，其中所述第一調(diào)節(jié)區(qū)是第一組織特異性啟動子，且所述第二調(diào) 節(jié)區(qū)是第二組織特異性啟動子。5. 權(quán)利要求4的方法，其中所述第一組織特異性啟動子是質(zhì)體藍素啟動子或35S啟動 子，且所述第二組織特異性啟動子是質(zhì)體藍素啟動子或35S啟動子。6. 權(quán)利要求2的方法，其中在所述植物中表達第三核苷酸序列，所述第三核苷酸序列 編碼沉默性抑制基因，所述第三核苷酸序列與在所述植物中有活性的第三調(diào)節(jié)區(qū)有效連 接。7. 權(quán)利要求6的方法，其中所述第三組織特異性啟動子是質(zhì)體藍素啟動子或35S啟動 子。8. 權(quán)利要求5的方法，其中在所述植物中表達第三核苷酸序列，所述第三核苷酸序列 編碼沉默性抑制基因，所述第三核苷酸序列與在所述植物中有活性的第三調(diào)節(jié)區(qū)有效連 接。9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述第三組織特異性啟動子是質(zhì)體藍素啟動子或35S啟動 子。10. 權(quán)利要求1的方法，其中所述目的蛋白質(zhì)是抗體、抗原或疫苗。11. 權(quán)利要求10的方法，其中編碼目的蛋白質(zhì)的第二核苷酸序列包含與在所述植物中 有活性的調(diào)節(jié)區(qū)2A有效連接的核苷酸序列2A，和與在所述植物中有活性的調(diào)節(jié)區(qū)2B有效 連接的核苷酸序列2B，并且2A和2B各自編碼的產(chǎn)物相組合而產(chǎn)生抗體。12. 權(quán)利要求11的方法，其中所述調(diào)節(jié)區(qū)2A是質(zhì)體藍素啟動子，所述調(diào)節(jié)區(qū)2B是質(zhì)體 藍素啟動子。13. 核酸，其包含SEQ ID NO: 17 (GNTl-GalT)，或包含與SEQ ID NO: 17顯示約80 %到 100%同一性的核苷酸序列，所述同一性使用以下參數(shù)測定：程序：blastn ;數(shù)據(jù)庫：nr ;預 期10 ;過濾：低復雜度；比對：成對；字長：11，其中所述核苷酸序列編碼修飾目的蛋白質(zhì)之 糖基化的蛋白質(zhì)。14. 核酸，其包含含有SEQ ID NO: 14 (GalT)或含有與SEQ ID NO: 14約80 %到100 % 相似之序列的第一核酸序列，所述相似性使用以下參數(shù)測定：程序：blastn ;數(shù)據(jù)庫：nr ;預 期10 ;過濾：低復雜度；比對：成對；字長：11，其中所述第一核酸序列編碼修飾目的蛋白質(zhì) 之糖基化的蛋白質(zhì)，所述第一核酸序列與包含質(zhì)體藍素啟動子的第二核酸序列有效連接。15. 用于合成具有修飾的N-糖基化譜之目的蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括：在植物、 植物部分或植物細胞中共表達核酸，所述核酸包含第一核苷酸序列和第二核苷酸序列， 所述第一核苷酸序列編碼雜合蛋白（GNTl-GnT-III)，其包含與N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶 III (GnT-III)催化結(jié)構(gòu)域融合的N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶（GNTl) CTS結(jié)構(gòu)域，所述第一核苷 酸序列與在所述植物中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)有效連接，所述第二核苷酸序列編碼目的蛋白 質(zhì)，所述第二核苷酸序列與在所述植物中有活性的第二調(diào)節(jié)區(qū)有效連接；共表達所述第一 和第二核苷酸序列，從而合成目的蛋白質(zhì)，其包含具有經(jīng)修飾的N-糖基化譜的聚糖。16. 權(quán)利要求15的方法，其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列在植物中瞬時表 達。17. 權(quán)利要求15的方法，其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列在植物中穩(wěn)定表 達。18. 核酸，其包含SEQ ID NO :26 (GNTl-GnT-III)的1-1641位核苷酸，或包含與SEQ ID NO :26之1-1641位核苷酸顯示約80%到100%同一性的核苷酸序列，所述同一性使用以下 參數(shù)測定：程序：blastn ;數(shù)據(jù)庫：nr ;預期10 ;過濾：低復雜度；比對：成對；字長：11，其中 所述核酸編碼修飾目的蛋白質(zhì)之糖基化的蛋白質(zhì)。19. 核酸，其包含含有SEQ ID NO :16(GnT-III)的1-1460位核苷酸或含有與SEQ ID NO : 16的1-1460位核苷酸約80 %到100 %相似之序列的第一核酸序列，所述相似性使用以 下參數(shù)測定：程序：blastn ;數(shù)據(jù)庫：nr ;預期10 ;過濾：低復雜度；比對：成對；字長：11，其 中所述第一核酸序列編碼修飾目的蛋白質(zhì)之糖基化的蛋白質(zhì)，所述第一核酸序列與包含質(zhì) 體藍素啟動子的第二核酸序列有效連接。20. 用于合成具有修飾的N-糖基化譜之目的蛋白質(zhì)的方法，其包括：在植物、植物部分 或植物細胞中共表達編碼第一核苷酸序列、第二核苷酸序列和第三核苷酸序列的核苷酸序 列，所述第一核苷酸序列編碼雜合蛋白GNTl-GalT，所述雜合蛋白包含與0-1，4-半乳糖基 轉(zhuǎn)移酶（GalT)催化結(jié)構(gòu)域融合的N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶（GNTl) CTS結(jié)構(gòu)域，所述第一核 苷酸序列與在所述植物中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)有效連接，所述第二核苷酸序列編碼0-1， 4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶，所述第二核苷酸序列與在所述植物中有活性的第二調(diào)節(jié)區(qū)有效連接， 所述第三核苷酸序列編碼目的蛋白質(zhì)，所述第三核苷酸序列與在所述植物中有活性的第三 調(diào)節(jié)區(qū)有效連接；共表達所述第一、第二和第三核苷酸序列，從而合成目的蛋白質(zhì)，其包含 具有修飾的N-糖基化譜的聚糖。21. 用于合成具有修飾的N-糖基化譜之目的蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括：在植物、植 物部分或植物細胞中共表達編碼第一核苷酸序列、第二核苷酸序列和第三核苷酸序列的核 苷酸序列，所述第一核苷酸序列編碼雜合蛋白GNTl-GnT-III，所述雜合蛋白包含與N-乙酰 葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶III (GnT-III)催化結(jié)構(gòu)域融合的N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶（GNTl) CTS結(jié)構(gòu) 域，所述第一核苷酸序列與在所述植物中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)有效連接，所述第二核苷酸 序列編碼N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶III，所述第二核苷酸序列與在所述植物中有活性的第二 調(diào)節(jié)區(qū)有效連接，所述第三核苷酸序列編碼目的蛋白質(zhì)，所述第三核苷酸序列與在所述植 物中有活性的第三調(diào)節(jié)區(qū)有效連接；共表達所述第一、第二和第三核苷酸序列，從而合成包 含具有經(jīng)修飾N-糖基化譜之聚糖的目的蛋白質(zhì)。22. 雜合蛋白GNTl-GalT，其包含與0 -1，4半乳糖基轉(zhuǎn)移酶催化結(jié)構(gòu)域融合的N-乙酰 葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶CTS結(jié)構(gòu)域，所述雜合蛋白包含序列SEQ ID NO :18。23. 雜合蛋白GNTl-GnT-III，其包含與N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶III催化結(jié)構(gòu)域融合的 N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶CTS結(jié)構(gòu)域，所述雜合蛋白包含氨基酸序列SEQ ID NO :20。24. 包含權(quán)利要求13的核苷酸序列的植物、植物細胞或種子。25. 包含權(quán)利要求14的核苷酸序列的植物、植物細胞或種子。26. 包含權(quán)利要求18的核苷酸序列的植物、植物細胞或種子。27. 包含權(quán)利要求19的核苷酸序列的植物、植物細胞或種子。28. 包含權(quán)利要求23的雜合蛋白的植物、植物細胞或種子。29. 包含權(quán)利要求24的雜合蛋白的植物、植物細胞或種子。
【專利摘要】本發(fā)明提供了在植物、植物部分或植物細胞中合成具有經(jīng)修飾的N-糖基化譜的目的蛋白質(zhì)的方法。所述方法包括在植物中共表達編碼第一核苷酸序列和第二核苷酸序列的核苷酸序列，所述第一核苷酸序列編碼雜合蛋白(GNT1-GalT)，所述雜合蛋白包含與β-1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(GalT)催化結(jié)構(gòu)域融合的N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶(GNT1)CTS結(jié)構(gòu)域，所述第一核苷酸序列與在所述植物中有活性的第一調(diào)節(jié)區(qū)有效連接，所述第二核苷酸序列編碼目的蛋白質(zhì)，所述第二核苷酸序列與在所述植物中有活性的第二調(diào)節(jié)區(qū)有效連接。將所述第一和第二核苷酸序列共表達，從而在植物、植物部分或植物細胞中合成目的蛋白質(zhì)，所述目的蛋白質(zhì)包含具有經(jīng)修飾N-糖基化譜的聚糖。
【IPC分類】A01H5/00, C12N5/10, C12N15/82, A01H5/10, C12N9/10, C12N15/11
【公開號】CN104962579
【申請?zhí)枴緾N201510364867
【發(fā)明人】馬克-安德烈·德奧斯特, 埃斯泰勒·馬凱-布盧安, 穆里爾·巴爾多, 卡羅勒·比雷爾, 盧瓦克·法耶, 帕特里斯·勒魯熱, 路易斯-菲利普·韋齊納, 韋羅妮克·戈莫爾德, 斯特凡妮·阿奎, 克里斯托夫·里韋, 托馬斯·帕卡萊特, 克里斯托夫·蘇魯耶
【申請人】麥迪卡格公司, 國家科學研究中心, 魯昂大學
【公開日】2015年10月7日
【申請日】2008年6月13日
【公告號】CA2700180A1, CA2700180C, CA2795379A1, CN101918559A, CN103382487A, EP2155880A1, EP2155880A4, US20110008837, WO2008151440A1, WO2008151440A4, WO2008151440A8