一種毒藜?jí)A的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種毒藜?jí)A的制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 毒藜?jí)A，英文名稱：anabasine，又稱新煙堿；CAS號(hào)：13078-04-1 ;分子式CltlH14N2; 分子量：162·23 ;存在于無葉毒藜（An-abasisapylla)中。沸點(diǎn) 276°C;溶于水、乙醇、乙醚 和苯，密度（20°C ) I. 0445g/cm3,折射率1. 5430,旋光度-82. 20°，可作殺蟲劑。分子結(jié)構(gòu) 式如下：
高速逆流色譜技術(shù)是一種不用任何同態(tài)載體的液、液色譜技術(shù)，其原理是基于組分在 旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的相對移動(dòng)而互不混溶的兩相溶劑間分布不同而分離，其分離效率和速度可 以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產(chǎn)品純度高，不存在載體對樣品的吸附和污染，制備 量大和溶劑消耗少，操作簡單，能從極復(fù)雜的混合物中分離出特定的組分。被廣泛應(yīng)用天然 產(chǎn)物分離制備中。
[0003] 目前，國內(nèi)很少見毒藜?jí)A提取方法的相關(guān)專利報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種毒藜?jí)A的提取、純化方法， 此法操作簡單，所得產(chǎn)品純度高。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，一種毒藜?jí)A的制備方法通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)： 1) 原材料的處理：取干燥的毒藜粉碎，過20-80目篩； 2) 酶解：稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1 :2~5、70~80%的乙醇浸泡，并加入粗 粉重量〇. 1%~〇. 5%的生物酶在pH值4~5,溫度為45~50°C的條件下浸泡酶解l~3h ; 3) 超聲提?。好附饨Y(jié)束，將步驟（2)中的酶解物進(jìn)行超聲提取l~2h，過濾，收集濾液，濾 澄重復(fù)提取1~2次； 4) 純化：收集提取液加入超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入 濃縮液體積1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液； 5) 精制：萃取液采用高速逆流色譜純化，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，回收試劑，冷凍干燥 即得毒藜?jí)A。
[0006] 步驟2)中所述的生物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的 混合物。
[0007] 步驟3)中所述超聲提取的頻率為20~40KHz，溫度為50~70°C。
[0008] 步驟4)中所述超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素膜，納濾膜為截留 分子量100-500的中空纖維素膜。
[0009] 步驟5)中所述的高速逆流色譜分離的溶劑體系為氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，混合 比例2-6 :6-10 :5_8,取下相做固定相，上相做流動(dòng)相。
[0010] 本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)為：1、采用了生物酶酶解輔助超聲提取的提取方法，提取效率 高，溶劑用量少，對環(huán)境污染小；2、采用了高速逆流色譜法純化，方法簡便易操作，溶劑用量 小，樣品無損失，制備量大，可連續(xù)制備，而且無污染。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0012] 實(shí)施例1 : 取干燥的毒藜粉碎，過20目篩；稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1 :2、70%的乙 醇浸泡，并加入粗粉重量〇. 1%%的果膠酶在pH值4,溫度為45°C的條件下浸泡酶解Ih ;酶 解結(jié)束，將所得酶解物在頻率為20KHz，溫度為50°C的條件下進(jìn)行超聲提取lh，過濾，收集 濾液，濾渣重復(fù)提取1次；收集提取液加入截留分子量為2000的中空纖維素超濾膜超濾，透 過液再用截留分子量為100的中空纖維素納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入濃縮液體積 1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色譜純 化，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，回收試劑，冷凍干燥即得毒藜?jí)A。高速逆流色譜分離的溶劑體 系為氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，混合比例2 :6 :5,取下相做固定相，上相做流動(dòng)相。經(jīng)HPLC 檢測，毒藜?jí)A含量為95. 2%。
[0013] 實(shí)施例2: 取干燥的毒藜粉碎，過60目篩；稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1 :4、75%的乙 醇浸泡，并加入粗粉重量〇. 3%的纖維素酶在pH值5,溫度為45°C的條件下浸泡酶解2h ; 酶解結(jié)束，將所得酶解物在頻率為30KHz、溫度為60°C的條件下進(jìn)行超聲提取I. 5h，過濾， 收集濾液，濾渣重復(fù)提取2次；收集提取液加入截留分子量為6000的中空纖維素超濾膜超 濾，透過液再用截留分子量為300的中空纖維素納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入濃縮液 體積1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色 譜純化，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，回收試劑，冷凍干燥即得毒藜?jí)A。高速逆流色譜分離的溶 劑體系為氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，混合比例4 :8 :7,取下相做固定相，上相做流動(dòng)相。經(jīng) HPLC檢測，毒藜?jí)A含量為96. 5%。
[0014] 實(shí)施例3 : 取干燥的毒藜粉碎，過80目篩；稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1 :5、80%的乙 醇浸泡，并加入粗粉重量〇. 5%的半纖維素酶在pH值5,溫度為50°C的條件下浸泡酶解3h ; 酶解結(jié)束，將所得酶解物在頻率為40KHz，溫度為70°C的條件下進(jìn)行超聲提取2h，過濾，收 集濾液，濾渣重復(fù)提取2次；收集提取液加入截留分子量為10000的中空纖維素超濾膜超 濾，透過液再用截留分子量為500的中空纖維素納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入濃縮液 體積1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色 譜純化，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，回收試劑，冷凍干燥即得毒藜?jí)A。高速逆流色譜分離的溶 劑體系為氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，混合比例6 :10 :8,取下相做固定相，上相做流動(dòng)相。經(jīng) HPLC檢測，毒藜?jí)A含量為95. 9%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種毒藜?jí)A的制備方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 原材料的處理：取干燥的毒藜粉碎，過20-80目篩； 2) 酶解：稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1 :2~5、70~80%的乙醇浸泡，并加入粗 粉重量〇. 1%~〇. 5%的生物酶在pH值4~5,溫度為45~50°C的條件下浸泡酶解l~3h ; 3) 超聲提取：酶解結(jié)束，將步驟（2)中的酶解物進(jìn)行超聲提取l~2h，過濾，收集濾液，濾 澄重復(fù)提取1~2次； 4) 純化：收集提取液加入超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入 濃縮液體積1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液； 5) 精制：萃取液采用高速逆流色譜純化，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，回收試劑，冷凍干燥 即得毒藜?jí)A。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毒藜?jí)A的制備方法方法，其特征在于步驟2)中所述的生 物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的混合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毒藜?jí)A的制備方法，其特征在于步驟3)中所述超聲提取 的頻率為20~40KHz，溫度為50~70°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毒藜?jí)A的制備方法，其特征在于步驟4)中所述超濾膜為 截留分子量2000-10000的中空纖維素膜，納濾膜為截留分子量100-500的中空纖維素膜。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毒藜?jí)A的制備方法，其特征在于步驟5)中所述的高速逆 流色譜分離的溶劑體系為氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)，混合比例2-6 :6-10 :5-8,取下相做固 定相，上相做流動(dòng)相。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種毒藜?jí)A的制備方法。其制備步驟為：原材料的處理→酶解→乙醇超聲提取→純化→精制，冷凍干燥即得毒藜?jí)A。本方法高效、快速、適合高純度毒藜?jí)A的生產(chǎn)。
【IPC分類】C12P17/16
【公開號(hào)】CN104946698
【申請?zhí)枴緾N201510265114
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年5月22日