一種獲得抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物的濃度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種獲得抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物 的濃度的方法及其專用裝置，以及該方法在評價待測抗菌素對目的微生物的作用效果中的 應(yīng)用和該方法在篩選對目的微生物具有效果的抗菌素中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著細菌抗藥性的逐年增加以及各種新型細菌的出現(xiàn)，人們也在不斷找尋新型的 細菌抗菌素。判斷一個新的化合物或者分離提取的有效成分是否有抗菌功效，一般使用體 外實驗的方法，需要使用藥理實驗來證明，即觀察被實驗物能否抑制或者殺滅細菌。藥物通 過使細菌呼吸量減低、抑制酶系統(tǒng)等方式影響細菌代謝，從而使細菌不生長或部分抑制，從 而判斷藥物對細菌有無抗菌的作用。
[0003] 現(xiàn)最常用的抗菌藥物篩選方法有紙片擴散法和稀釋法。紙片擴散法是將含有定量 抗菌藥物的紙片貼在接種了被測菌的瓊脂表面上，隨著藥物在瓊脂中的擴散，在紙片周圍 形成藥物的濃度梯度，從而形成不同大小的抑菌圈，反應(yīng)測試菌對藥物的敏感程度。紙片 擴散法由于不同的菌對藥物的敏感性不同，產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小也有所不同，如果菌種不純， 實驗中的抑菌環(huán)和純培養(yǎng)狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)相比存在較大的差異，影響判斷結(jié)果的準(zhǔn)確 性。稀釋法又分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。肉湯稀釋法是用肉湯將抗菌藥物按照不同濃 度稀釋到無菌試管或者微量稀釋孔內(nèi)，再接種待測菌，定量測定抗菌藥物的最低抑菌或殺 菌濃度（MBC)。瓊脂稀釋法是將不同的抗菌藥物分別混勻于瓊脂培養(yǎng)基中，配置出含有各種 濃度藥物的平板，在平板中接種細菌后，孵育觀察細菌在不同濃度藥物平板的生長情況，觀 察以抑制細菌生長的平板所含藥物濃度測得最低抑菌濃度（MIC)。稀釋法雖然可以將被測 菌放置在純培養(yǎng)狀態(tài)下生長，結(jié)果可靠，但是不管是肉湯稀釋法還是瓊脂稀釋法，操作起來 費時費力，不適用于大規(guī)模、快速高效藥物篩選。
[0004]
【主權(quán)項】
1. 一種獲得待測抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物的濃度的方法，包括下述步驟 Bl)-B3)： BI)在固體培養(yǎng)基上覆蓋微芯片；所述微芯片為聚二甲基硅氧烷材質(zhì)的膜，其厚度為 3mm-5mm，其上具有陣列分布的貫穿孔⑴，各貫穿孔⑴之間無連接； B2)完成BI)后，在不同貫穿孔中加入體積相等但含有不同濃度待測抗菌素的液相，晾 干； B3)完成B2)后，在所述貫穿孔中加入含有目的微生物的液相，培養(yǎng)并觀察微生物生長 情況，從而獲知待測抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物的濃度。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下步驟： Cl)在固體培養(yǎng)基上覆蓋微芯片；所述微芯片為聚二甲基硅氧烷材質(zhì)的膜，其厚度為 3mm-5mm，其上具有陣列分布的貫穿孔⑴，各貫穿孔⑴之間無連接； C2)完成Cl)后，在不同貫穿孔中加入體積相等但含有不同濃度的目的微生物的液相， 培養(yǎng)并觀察微生物生長情況，以確定B3)中"含有目的微生物的液相"中的目的微生物的濃 度。
3. 權(quán)利要求1或2所述的方法在評價待測抗菌素對目的微生物的作用效果中的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求1或2所述的方法在篩選對目的微生物具有效果的抗菌素中的應(yīng)用。
5. -種獲得待測抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物的濃度的裝置，制備方法如下： (1) 在固體培養(yǎng)基平板的上表面覆蓋微芯片；所述微芯片為聚二甲基硅氧烷材質(zhì)的 膜，其厚度為3mm-5mm，其上具有陣列分布的貫穿孔⑴，各貫穿孔⑴之間無連接； (2) 在不同貫穿孔中加入體積相等但含有不同濃度待測抗菌素的液相，晾干。
6. -種微芯片，為聚二甲基硅氧烷材質(zhì)的膜，其厚度為3mm-5mm，其上具有陣列分布的 貫穿孔⑴，各貫穿孔⑴之間無連接。
7. -種試劑盒，包括權(quán)利要求6所述微芯片； 所述試劑盒的功能為如下（a)和/或（b) : (a)評價待測抗菌素對目的微生物的作用效 果；(b)篩選對目的微生物具有效果的抗菌素。
8. 制備權(quán)利要求6所述微芯片的方法，包括下述步驟Al)和A2): Al)將光刻膠涂在基片上并烘干，同掩膜一起經(jīng)過光刻、顯影過程獲得所述微芯片的模 具； A2)在所述微芯片的模具上澆注聚二甲基硅氧烷，固化后剝離所述微芯片的模具得到 所述微芯片。
9. 權(quán)利要求6所述微芯片或權(quán)利要求7所述試劑盒在評價待測抗菌素對目的微生物的 作用效果中的應(yīng)用。
10. 權(quán)利要求6所述微芯片或權(quán)利要求7所述試劑盒在篩選對目的微生物具有效果的 抗菌素中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種獲得待測抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物的濃度的方法。該方法包括下述步驟B1)-B3)：B1)在固體培養(yǎng)基上覆蓋微芯片；所述微芯片為聚二甲基硅氧烷材質(zhì)的膜；B2)完成B1)后，在不同貫穿孔中加入體積相等但含有不同濃度待測抗菌素的液相，晾干；B3)完成B2)后，在所述貫穿孔中加入含有目的微生物的液相，培養(yǎng)并觀察微生物生長情況，從而獲知待測抗菌素實現(xiàn)抑制或殺滅目的微生物的濃度。該方法在評價待測抗菌素對目的微生物的作用效果或篩選對目的微生物具有效果的抗菌素的研究中具有十分廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C12M1-00, C12Q1-18
【公開號】CN104878073
【申請?zhí)枴緾N201510271097
【發(fā)明人】張函槊, 李娟 , 莊峰鋒
【申請人】蘇州吉諾瑞生物科技有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月25日