cation of single-domain, Bax-specific intrabodies thatconfer resistance to mammalian cells against oxidative-stress-inducedapoptosis. FASEB J. 2006, 20 (14) :2636-8)及基于B細(xì)胞去除（B cell d印letion)的免疫療法。所述抗體可 以發(fā)揮拮抗劑的作用，并且可以用于體外（in vitro),原位（in situ)或體內(nèi)（in vivo)檢 測或治療與BAFF的存在（或缺乏）相關(guān)的哺乳動物細(xì)胞或病理情況。
[0034] 本發(fā)明提供了使用BAFF抗體阻斷或中和BAFF與TACI/或BCMA之間相互作用的 方法。所述拮抗劑還可以阻斷或中和BAFF與TACI/或BCMA的相互作用?？笲AFF受體抗 體可與細(xì)胞毒性劑或酶相連，或與放射性同位素、熒光化合物或化學(xué)發(fā)光化合物相連。
[0035] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：本發(fā)明篩選多個活性高且具有潛在中和能力的納米抗體，最終 得到了抗BAFF的納米抗體G3。該納米抗體能特異性結(jié)合人BAFF抗原、調(diào)節(jié)與BAFF抗原與 其配體相關(guān)的生物學(xué)活性，有效抑制BAFF抗原與其受體結(jié)合以及產(chǎn)生相應(yīng)的信號級聯(lián)效 應(yīng)?？笲AFF納米抗體可以阻斷BAFF與其三種相關(guān)受體的結(jié)合，顯著抑制B細(xì)胞增殖或存 活，該納米抗體可用于檢測和/或治療多種與BAFF表達(dá)異常相關(guān)疾病。
[0036] 以下結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】詳細(xì)說明本發(fā)明，并不以此限定本發(fā)明的實(shí)施范 圍。
【附圖說明】
[0037] 圖I :BAFF胞外段蛋白表達(dá)和純化后的電泳結(jié)果。
[0038] 圖2 :Protein G親和層析法純化重鏈抗體
[0039] 圖3 :羊駝免疫血清效價
[0040] 圖4 :第一輪次PCR普通重鏈抗體及單鏈抗體基因
[0041] 圖5 :第二輪次VHH抗體目的片段
[0042] 圖 6 :sfiI/Pst 酶切 pHEN6 載體
[0043] 圖7 :sfiI/Pst酶切目的片段
[0044] 圖8 :菌落PCR驗(yàn)證抗體插入率
[0045] 圖9 :抗BAFF納米抗體蛋白純化結(jié)果
[0046] 圖10 :FPLC方法純化抗BAFF納米抗體
[0047] 圖11 :納米抗體與BAFF抗原結(jié)合動力曲線
[0048] 圖12 :納米抗體對受體BCMA的競爭抑制作用
[0049] 圖13 :納米抗體對受體TACI的競爭抑制作用
[0050] 圖14 :抗BAFFG3納米抗體對在體外對Raji細(xì)胞的增殖抑制作用
【具體實(shí)施方式】
[0051] 本發(fā)明的實(shí)施方案通過下列實(shí)施例舉例說明。然而本發(fā)明的實(shí)施方案不限于這些 實(shí)施例的特定細(xì)節(jié)，因?yàn)閷τ诒绢I(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，其它的變化是已知的，或根據(jù)直 接公開的內(nèi)容和附屬的權(quán)利要求是顯而易見的。因此，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技 術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0052] 下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材 料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0053] 實(shí)施例1 :BAFF胞外段蛋白的表達(dá)
[0054] I. sBAFF基因的釣?。撼槿≌Ｈ遂o脈血，按照常規(guī)方法提取外周血單個核細(xì)胞 (PBMC)。RNA的抽提按照Invitorgen公司的說明書進(jìn)行。取3ug RNA逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA模 版，以其作為模板，擴(kuò)增BAFF基因。
[0055] 引物序列為：
[0056] 5, CGGGAATTCCTGGTGCCACGCGGTGCCGTCAGGGTCCAGAAG3，（SEQ ID No. 3)
[0057] 5'CCCAAGCTTTCACAGCAGTTTCAATGC3'（SEQ ID No. 4)
[0058] PCR反應(yīng)條件：
[0059]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體，其特征在于：其氨基酸序列為序列表SEQ ID NO. 1 所示。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體，其特征在于：其氨基酸 序列與序列表SEQ ID NO. 1所不的氨基酸序列的同源性大于80%，優(yōu)選大于90%，最優(yōu)選大 于 95%。
3. 編碼權(quán)利要求1或2所述的抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體的基因序列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的編碼抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體的基因序列，其特征 在于：所述基因序列為序列表SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。
5. 包含權(quán)利要求3或4所述基因序列的表達(dá)載體和/或宿主細(xì)胞。
6. 通過權(quán)利要求5的宿主細(xì)胞制備權(quán)利要求1或2所述的抗B細(xì)胞生長刺激因子的納 米抗體的方法。
7. 藥用組合物，其特征在于：其包含一種或多種權(quán)利要求1或2所述的抗BAFF納米抗 體分子作為活性成份，并包含可藥用載體。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于：所述藥物載劑選自細(xì)胞毒素、放射 性同位素、免疫調(diào)諧劑、抗血管生成劑、抗增殖劑、促凋亡劑、化學(xué)治療劑或治療性核酸的治 療劑。
9. 權(quán)利要求1或2所述的抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體用于制備檢測BAFF的試 劑的用途。
10. 權(quán)利要求1或2所述的抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體用于制備治療BAFF表 達(dá)異常相關(guān)疾病的藥物的用途；所述BAFF表達(dá)異常相關(guān)疾病為B細(xì)胞非霍奇金氏淋巴瘤、 B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、涉及B細(xì)胞的自身免疫病或炎性疾病。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體和用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。一種抗B細(xì)胞生長刺激因子的納米抗體，其氨基酸序列為序列表SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：本發(fā)明篩選多個活性高且具有潛在中和能力的納米抗體，最終得到了抗BAFF的納米抗體G3。該納米抗體能特異性結(jié)合人BAFF抗原、調(diào)節(jié)與BAFF抗原與其配體相關(guān)的生物學(xué)活性，有效抑制BAFF抗原與其受體結(jié)合以及產(chǎn)生相應(yīng)的信號級聯(lián)效應(yīng)?？笲AFF納米抗體可以阻斷BAFF與其三種相關(guān)受體的結(jié)合，顯著抑制B細(xì)胞增殖或存活，該納米抗體可用于檢測和/或治療多種與BAFF表達(dá)異常相關(guān)疾病。
【IPC分類】G01N33-68, A61P29-00, C12N15-63, C07K16-28, C12N15-13, A61P35-00, A61P35-02, A61K39-395, A61P37-02
【公開號】CN104804090
【申請?zhí)枴緾N201410043869
【發(fā)明人】張偉京, 李勝華, 孫劍, 武文, 任光達(dá)
【申請人】天津勝發(fā)生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2014年1月29日