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一種具有殺蟲效果的秸稈腐解菌劑及其應(yīng)用_2

文檔序號:8468554閱讀:來源:國知局
. 17倍。本發(fā)明提供的秸桿腐熟菌劑還能夠減少土壤害蟲,施用10天就有顯著的殺蟲效 果:在玉米秸桿還田的土壤中,施用本發(fā)明的提供的秸桿腐熟菌劑10天后土壤害蟲密度為 33個/m 2,未施用菌劑10天后土壤害蟲密度為165個/m2,以未施用菌劑的土壤害蟲密度為 對照,施用本發(fā)明的提供的秸桿腐熟菌劑10天后土壤害蟲的減少率為80. 3% ;在油菜秸桿 還田的土壤中,施用本發(fā)明的提供的秸桿腐熟菌劑10天后土壤害蟲密度為26個/m2,未施 用菌劑10天后土壤害蟲密度為158個/m 2,以未施用菌劑的土壤害蟲密度為對照,施用本 發(fā)明的提供的秸桿腐熟菌劑10天后土壤害蟲的減少率為83. 5%。本發(fā)明提供的秸桿腐熟 菌劑還可提高農(nóng)作物產(chǎn)量,對玉米和水稻均有顯著的增產(chǎn)效果,在玉米秸桿還田的土壤中, 施用本發(fā)明的提供的秸桿腐熟菌劑的玉米產(chǎn)量為663千克/畝,未施用菌劑的玉米產(chǎn)量為 565千克/畝,作物增產(chǎn)率為17. 3% ;在油菜秸桿還田的土壤中,施用本發(fā)明的提供的秸桿 腐熟菌劑的水稻產(chǎn)量為653千克/畝,未施用菌劑的水稻產(chǎn)量為562千克/畝,作物增產(chǎn)率 為 16. 2%。
【具體實施方式】
[0029] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述,給出的實施例僅為了闡 明本發(fā)明,而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實施例中的實驗方法,如無特殊說明,均為 常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業(yè)途徑得到。
[0030] 下述實施例中所用的黑曲霉 ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC NO :M209125 于2009年6月10日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC,地址為:中國武漢武漢 大學(xué))。在下文中簡稱黑曲霉ZM-8。
[0031] 下述實施例中所用的擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii) CGMCC NO. 3. 6608于2003年4月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡 稱CGMCC),自該保藏日起公眾可從中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心獲得該 菌株。
[0032] 下述實施例中所用的鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933 于 2002年11月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC), 自該保藏日起公眾可從中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心獲得該菌株。
[0033] 下述實施例中所用的解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555(即解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555T)為 DSMZ 產(chǎn)品, 記載該菌株的相關(guān)文獻(xiàn)為 Chamkha Ml, Garcia JL,Labat M. Metabolism of cinnamic acids by some Clostridiales and emendation of the descriptions of Clostridium aerotolerans, Clostridium celerecrescens and Clostridium xylanolyticum. Int J Syst Evol Microbiol. 2001Nov ;51(Pt 6):2105-11〇
[0034] 下述實施例中所用的枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189于1978 年6月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會農(nóng)業(yè)微生物中心(簡稱ACCC,地址:北京 市海淀區(qū)中關(guān)村南大街12號,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研宄所,郵編100081), 自該保藏日起公眾可從中國微生物菌種保藏管理委員會農(nóng)業(yè)微生物中心獲得該菌株。
[0035] 下述實施例中所用的蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841于2008年1月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會農(nóng)業(yè)微生物中心(簡 稱ACCC,地址:北京市海淀區(qū)中關(guān)村南大街12號,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研 宄所,郵編100081),自該保藏日起公眾可從中國微生物菌種保藏管理委員會農(nóng)業(yè)微生物中 心獲得該菌株。
[0036] 下述實施例中所用的蘇云金芽孢桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova)CFCC No. 1043于2003年8月10日保藏于中國微生物菌種保 藏管理委員會林業(yè)微生物中心(中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心,簡稱CFCC,),自該保 藏日起公眾可從中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心獲得該菌株。
[0037] 下述實施例中所用的培養(yǎng)基如下:
[0038] 1號培養(yǎng)基(查氏培養(yǎng)基):溶質(zhì)及其濃度為:似勵33§/1,1(2即044/1,1((:10.5§/1, MgS04.7H20 0? 5g/L,F(xiàn)eS040. 01g/L,蔗糖20g/L,瓊脂15g/L ;溶劑為水;pH7. 0±0. 1。121°C 高壓滅菌15min。
[0039]2號培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基):去皮的馬鈴薯200g切成小塊,加入1L蒸餾水煮沸30 分鐘,過濾,向濾液中加入葡萄糖和瓊脂各15g,用蒸餾水定容至1L,pH7.0±0. 1,121°C高 壓滅菌15min〇
[0040] 3號培養(yǎng)基(Mandels改良營養(yǎng)鹽液):溶質(zhì)及其濃度為:(NH4) 2S042g/L, MgS04 ? 7H20 0? 5g/L,KH2P040. lg/L,玉米秸桿粉 2g/L ;溶劑為水;pH7. 0±0. 1。121°C高壓 滅菌15min〇
[0041] 4號培養(yǎng)基(PCS改良培養(yǎng)基):溶質(zhì)及其濃度為:蛋白胨5g/L,酵母粉lg/L, 玉米秸桿粉 5g/L,NaCl 5g/L,K2HP04lg/L,MgS04 ? 7H20 0? 35g/L,CaC033g/L ;溶劑為水; pH7.2±0.1。121°C 高壓滅菌 15min。
[0042] 5號培養(yǎng)基(LB改良培養(yǎng)基):溶質(zhì)及其濃度為:胰蛋白胨10g/L,酵母浸膏5g/L, NaCl 8g/L ;溶劑為水;pH 7. 0。121°C 高壓滅菌 15min。
[0043] 下述實施例中所述的吸附載體由凹凸棒粘土粉和食用菌渣按照2 :3的質(zhì)量比(干 重)混合而成。其中,凹凸棒粘土粉的粒徑為0.10-0. 15mm,為安徽省明光市國星凹土有限 公司產(chǎn)品;食用菌渣為用農(nóng)作物秸桿、木肩等作為代料栽培原料制成培養(yǎng)基,待食用菌收獲 后培養(yǎng)基的剩余物,食用菌渣粒徑大小為2. 00-3. 00_。
[0044] 實施例1、菌劑的制備
[0045] 1、活化
[0046] 1. 1、將黑曲霉ZM-8接種在1號培養(yǎng)基上,置于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天,得到活化的 黑曲霉 ZM-8(Aspergillus niger ZM-8)CCTCC N0:M209125。
[0047] 1. 2、將擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608和鮮綠青霉 (Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933分別接種在2號培養(yǎng)基上,置于30°C培養(yǎng)箱 培養(yǎng)3天,分別得到活化的擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608 和鮮綠青霉(Penicillium visidicatum)CGMCC NO. 3. 5933。
[0048] 1. 3、將解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞 桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189分別接種于裝有100ml 4號培養(yǎng)基的250ml 三角瓶中,置于30°C培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)3天,分別得到活化的解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSM No. 6555 和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)ACCC No. 03189。
[0049] 1. 4、將蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 和蘇云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp.galleriae Shvetsova) CFCC No. 1043分別接種于裝有25ml 5號培養(yǎng)基的250ml三角瓶中,30°C、150rpm(旋 轉(zhuǎn)半徑20mm)振蕩培養(yǎng)2天,分別得到活化的蘇云金芽胞桿菌殺蟲變種(Bacillus thuringiensis)ACCC No. 01841 和蘇云金芽抱桿菌賭螟亞種(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae Shvetsova)CFCC No. 1043。
[0050] 2、擴(kuò)大培養(yǎng)
[0051] 將步驟1中1. 1和1. 2活化的黑曲霉ZM-8、擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)CGMCC NO.
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