一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及發(fā)酵產(chǎn)物的分離純化，特別涉及一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法。
【背景技術】
[0002]大孔吸附樹脂是一種具有大孔結構的有機高分子共聚體，是一類人工合成的有機高聚物吸附劑。大孔吸附樹脂吸附技術最早用于廢水處理、醫(yī)藥工業(yè)、化學工業(yè)、分析化學、臨床檢定和治療等領域，近年來已廣泛用于中草藥有效成分的提取、分離、純化工作中，如黃酮，皂苷，生物堿等中藥成分的精制純化。
[0003]丹參素(Salvianic acid A, Danshensu)，屬于酸性芳香類化合物，其化學名為β-(3，4-二輕基苯基)乳酸，也稱丹參素甲，分子式為C9HltlO5，分子量為198.17。研宄表明，丹參素具有顯著的改善血液流變學、降脂質、抑制脂質過氧化、抗腫瘤和臟器損傷保護等藥理活性。
[0004]本實驗室構建了合成丹參素的工程大腸桿菌，實現(xiàn)了丹參素的微生物發(fā)酵生產(chǎn)，并申請了中國專利，專利名稱為一種丹參素的生物生產(chǎn)方法，公開號為CN 103667371 Α。目前從大腸桿菌發(fā)酵液中分離純化丹參素的方法尚未見諸報端。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法。
[0006]本發(fā)明的技術方案概述如下:
[0007]一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0008](I)將產(chǎn)丹參素的大腸埃氏希菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，離心，得到上清液，調節(jié)pH =
1.5?3.0，作為上樣液，備用；
[0009](2)以上樣流速為I?3BV/h將上樣液加入到大孔吸附樹脂柱中；上樣液和大孔吸附樹脂的比例為3?5mL:1g ;
[0010](3)向大孔吸附樹脂柱中加入體積濃度為70%?90%的乙醇水溶液，以0.5?2BV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱洗脫，收集洗脫液；所述乙醇水溶液與大孔吸附樹脂的比為I?2mL:1g ；
[0011](4)將洗脫液濃縮，干燥，得到丹參素。
[0012]步驟(I)中pH = 2.0。
[0013]大孔吸附樹脂的型號優(yōu)選為X-5或ADS-17。
[0014]步驟(2)中的上樣流速優(yōu)選為2BV/h。
[0015]優(yōu)選的步驟⑵上樣液和大孔吸附樹脂的比例為5mL: lg。
[0016]步驟(3)中乙醇水溶液的體積濃度優(yōu)選為80%。
[0017]優(yōu)選的步驟(3)中乙醇水溶液為大孔吸附樹脂的比為ImL: lg。
[0018]步驟(3)中流速優(yōu)選為lBV/h。
[0019]本發(fā)明的方法，具有操作簡單、收率高、環(huán)境友好等優(yōu)點。本發(fā)明可用于微生物發(fā)酵法生產(chǎn)丹參素的分離純化，具有良好的工業(yè)應用前景。
【具體實施方式】
[0020]本發(fā)明各實施例所用的“產(chǎn)丹參素的大腸埃氏希菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液”中的“大腸埃氏希菌”是以保藏編號CGMCC N0.7961的大腸埃氏希菌SyBE_002444為例。
[0021]本發(fā)明所涉及的大腸埃氏希菌SyBE-002444，建議的分類命名為大腸埃氏希菌Escherichia coli,現(xiàn)于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏中心登記入冊編號為CGMCC N0.7961，保藏時間為2013年7月22日，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院微生物研宄所，郵政編碼100101。
[0022]保藏編號CGMCC N0.7961的大腸埃氏希菌SyBE-002444發(fā)酵方法見中國專利CN10366737IA “一種丹參素的生物生產(chǎn)方法”，通過該方法獲得發(fā)酵液。
[0023]要說明的是，本發(fā)明是以上述大腸埃氏希菌SyBE-002444為例，是為了使本領域的技術人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對本發(fā)明作任何限制，本領域技術人員能夠理解，其它的能夠產(chǎn)丹參素的大腸埃氏希重組菌也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0024]下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0025]實施例1
[0026]一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0027](I)將產(chǎn)丹參素的大腸埃氏希菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，離心，得到上清液，調節(jié)pH =2.0，作為上樣液，備用；
[0028](2)準確稱取預處理的型號為X-5、ADS-17的大孔吸附樹脂各50g，分別濕法裝柱(25*300帶砂芯)分別以上樣流速為2BV/h將250mL步驟(I)獲得的上樣液加入到大孔吸附樹脂柱中；
[0029](3)分別向大孔吸附樹脂柱中加入50mL體積濃度為80%的乙醇水溶液，以lBV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱洗脫，收集10?40mL這一段洗脫液；
[0030](4)將洗脫液濃縮，干燥，得到丹參素。
[0031]計算吸附量，洗脫量和洗脫率。
[0032]X-5樹脂的吸附量為6.646mg/g，解析量為5.712mg/g，解析率為85.9%。
[0033]ADS-17樹脂的吸附量為3.373mg/g，解析量為3.357mg/g，解析率為99.5%。
[0034]實施例2
[0035]一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0036](I)將產(chǎn)丹參素的大腸埃氏希菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，離心，得到上清液，取3份分別調節(jié)pH = 1.5，pH = 2.0，pH = 3.0，作為上樣液，備用；
[0037](2)準確稱取3份預處理的型號為X-5大孔吸附樹脂各50g，分別濕法裝柱(25*300帶砂芯)分別將250mLpH = 1.5、pH = 2.0,pH = 3.0的上樣液以上樣流速為2BV/h加入到X-5大孔吸附樹脂柱中；
[0038](3)分別向大孔吸附樹脂柱中加入50mL體積濃度為80%的乙醇水溶液，以lBV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱洗脫，收集10?40mL這一段洗脫液；
[0039](4)將洗脫液濃縮，干燥，得到丹參素。
[0040]經(jīng)計算吸附量分別為6.325mg/g，6.646mg/g，6.418mg/g。
[0041]實施例3
[0042]一種使用大孔吸附樹脂富集發(fā)酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0043](I)將產(chǎn)丹參素的大腸埃氏希菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，離心，得到上清液，調節(jié)pH =2.0，作為上樣液，備用；
[0044](2)準確稱取3份預處理的型號為X-5大孔吸附樹脂各50g，分別濕法裝柱(25*300帶砂芯)分別取上樣液150mL，200mL，250mL，以上樣流速為2BV/h加入到X_5大孔吸附樹脂柱中；
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