病的毀滅柱 抱菌(C. destructans)、引起人參黑斑病的人參鏈格抱菌(A. panax)、引起人參立枯病的 立枯絲核菌化.solani)、引起人參疫病的惡疫霉菌(P. cactorum)、引起人參菌核病的人 參核盤(pán)菌(S. schinseng)和引起人參灰霉病的灰葡萄抱菌(B. cinerea)該7種病原菌中 的一種或多種。
[0012] 本發(fā)明還涉及多抱木霉FSR-97在防治植物真菌病害中的防病機(jī)理,所述植物優(yōu) 選為人參,所述真菌優(yōu)選為引起人參根腐病的腐皮鑲抱菌(F. solani)、引起人參鎊腐病的 毀滅柱抱菌杞destructans)、引起人參黑斑病的人參鏈格抱菌(A. panax)、引起人參立 枯病的立枯絲核菌巧.solani)、引起人參疫病的惡疫霉菌(P. cactorum)和引起人參灰霉 病的灰葡萄抱菌炬.cinerea)。多抱木霉FSR-97通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)作用搶占空間位置和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 有效抑制人參病原菌菌絲生長(zhǎng);通過(guò)重寄生作用及分泌抑菌活性物質(zhì)導(dǎo)致病原菌菌絲及其 分生抱子崎形,抑制病原菌生長(zhǎng)及抱子萌發(fā)。
[0013] 本發(fā)明涉及一種多抱木霉FSR-97的微生物制劑,其可通過(guò)W下方法制備得到: (1) 將多抱木霉FSR-97試管斜面種活化,取2個(gè)5 mm菌餅接種于用250 mL H角瓶裝 的100血馬鈴墓葡萄糖(PDB)液體培養(yǎng)基中,在170 r/min,25 °C下培養(yǎng)48 h,獲得種子 液; (2) 將多抱木霉FSR-97種子液W 10% (體積比)接種于發(fā)酵培養(yǎng)液中培養(yǎng),在170 r/ min,25°C下培養(yǎng)96 h,獲得培養(yǎng)液; (3) 將培養(yǎng)液經(jīng)2層無(wú)菌紗布過(guò)濾,濾液經(jīng)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),將抱子息浮液分散至6 g ?。駿甲基纖維素軸(CMC)溶液中,得抱子息浮液,抱子含量為3 X 10 5 C化? mL4; (4) 將多抱木霉FSR-97培養(yǎng)液在8000 r/mim離也20 min,過(guò)濾,上清即為發(fā)酵液。
[0014] 本發(fā)明的多抱木霉FSR-97及其發(fā)酵液對(duì)人參具有田間防病和促生長(zhǎng)的作用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于,保藏編號(hào)為CGMCC No. 9691的多抱木霉FSR-97對(duì)分別引起人 參根腐病、鎊腐病、黑斑病、立枯病、疫病、菌核病和灰霉病的腐皮鑲抱菌(F. solani)、毀滅 柱抱菌(C. destructans)、人參鏈格抱菌(A. panax)、立枯絲核菌化.solani)、惡疫霉菌 (P. cactorum)、人參核盤(pán)菌(S. schinseng)和灰葡萄抱菌炬.cinerea)等7種病原菌 具有不同程度的防治效果,對(duì)時(shí)培養(yǎng)時(shí)對(duì)人參病原菌生長(zhǎng)抑制率達(dá)47. 62%~67. 48%,發(fā)酵液 培養(yǎng)時(shí)對(duì)人參病原菌生長(zhǎng)抑制率達(dá)30. 41%~71. 85%,F(xiàn)SR-97的發(fā)酵液對(duì)人參具有促生長(zhǎng)作 用,無(wú)毒無(wú)致病性,對(duì)人畜安全,不污染環(huán)境;同時(shí),生防菌株FSR-97抱子息浮液直接施加 到±壤中對(duì)植物進(jìn)行灌根或進(jìn)行涂葉處理即可發(fā)揮其抑菌、殺菌作用,能顯著改善人參根 際微生物群落結(jié)構(gòu),形成一個(gè)生物多樣化的人參根際±壤微生態(tài)環(huán)境,從而有效持久地控 制人參真菌性病害的發(fā)生。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)毀滅柱抱菌(分7i/?血(9ca/77(9/7 沁菌絲的生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖2 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)腐皮鑲抱菌(巧wariw? soyani)菌絲的生長(zhǎng)平 板抑制作用。 圖3;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)人參鏈格抱菌/7<3化巧)菌絲的生 長(zhǎng)平板抑制作用。 圖4;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)人參核盤(pán)菌(5b7erWi/?i<3 5cAi/7se/w)菌絲的 生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖5;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)立枯絲核菌(化soyani)菌絲的生 長(zhǎng)平板抑制作用。 圖6 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)惡疫霉菌(化對(duì)cactoruffl)菌絲的生 長(zhǎng)平板抑制作用。 圖7 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)灰葡萄抱菌(公〇化7扣5 cinerea)菌絲的生長(zhǎng) 平板抑制作用。 圖8 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株抑制腐皮鑲抱菌(巧wariw? 菌絲生長(zhǎng)的 顯微觀察。 圖9 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株抑制惡疫霉菌(化對(duì)cactoruffl)菌絲生 長(zhǎng)的顯微觀察。 圖10 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株抑制立枯絲核菌(化soyani)菌絲生 長(zhǎng)的顯微觀察。 圖11 :本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株抑制毀滅柱抱菌(分7i/?血(9ca/77(9/7 沁strucz^<ms)菌絲生長(zhǎng)的顯微觀察。 圖12 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株抑制人參鏈格抱菌/7<3化巧)菌絲生 長(zhǎng)的顯微觀察。 圖13 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株抑制灰葡萄抱菌(公〇化7扣5 cinerea)菌絲生長(zhǎng) 的顯微觀察。 圖14 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液對(duì)毀滅柱抱菌(分7in血〇心巧〇/7 沁strucz^<ms)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。 圖15 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液對(duì)腐皮鑲抱菌(巧wariw? w7ani)菌絲 生長(zhǎng)的抑制作用。 圖16 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液對(duì)人參鏈格抱菌化m)菌 絲生長(zhǎng)的抑制作用。 圖17 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液對(duì)立枯絲核菌(化soyani)菌 絲生長(zhǎng)的抑制作用。 圖18 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液對(duì)惡疫霉菌(化如cactoruffl)菌 絲生長(zhǎng)的抑制作用。 圖19 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液對(duì)灰葡萄抱菌(公〇化7扣5 cinerea)菌絲 生長(zhǎng)的抑制作用。 圖20 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液抑制腐皮鑲抱菌(巧wariw? w7ani)菌 絲生長(zhǎng)的顯微觀察。 圖21 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液抑制惡疫霉菌(化cactor歴) 菌絲生長(zhǎng)的顯微觀察。 圖22 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液抑制人參鏈格抱菌化 菌絲生長(zhǎng)的顯微觀察。 圖23 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株發(fā)酵液抑制腐皮鑲抱菌(巧wariw? 抱 子萌發(fā)的顯微觀察。 圖24 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)人參的促生長(zhǎng)作用(A ;空白液體培養(yǎng)基,B ;德 注多抱木霉FSR-97發(fā)酵液)。 圖25 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)毀滅柱抱菌引起的人參鎊腐病的防治效果(A : 無(wú)菌水灌根,B ;多抱木霉FSR-97抱子息浮液灌根)。 圖26 ;本發(fā)明的多抱木霉FSR-97菌株對(duì)人參鏈格抱菌引起的人參黑斑病的防治效果 (A ;無(wú)菌水涂抹葉片,B ;多抱木霉FSR-97抱子息浮液涂抹葉片)。
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1多抱木霉(曲的asioit/es) FSR-97菌株的分離和保藏 該菌株自吉林省撫松縣偷樹(shù)人參栽培地多年生人參健株的根際±壤分離得到。采集 上述±壤樣品,去除表面枯落物后過(guò)2 mm篩。稱取新鮮±壤樣品10 g,放入裝有玻璃珠和 90血無(wú)菌生理鹽水的H角瓶中,充分振蕩30 min,使樣品與無(wú)菌水混合均勻,制得±壤息 濁液。在無(wú)菌條件下取1 mL振蕩液,加入9 mL無(wú)菌生理鹽水,按梯度依次制成1〇-2、10一3、 1(T4的稀釋液。分別吸取100 UL各稀釋液加入到馬鈴墓葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板上, 采用平板稀釋法均勻涂布,每處理3次重復(fù),25 C培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 d。挑選單菌落轉(zhuǎn)接到馬鈴 墓葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板培養(yǎng)長(zhǎng)出菌落后,采用單抱分離法進(jìn)行分離純化,純化菌株 于4 C保存。
[0017] 馬鈴墓葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)配方為;±豆200 g/L,葡萄糖10 g/L,瓊脂15 g/ L,蒸觸水1000血,2 y g/mL青霉素,pH為6. 8~7. 2。
[0018] 該菌株在馬鈴墓葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板上25 C培養(yǎng)生長(zhǎng)較快,單抱子萌 發(fā)形成白色菌落,菌落背面從無(wú)色過(guò)渡到黃色。