一種從松茸中同時提取揮發(fā)油、多糖和氨基酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食用菌資源開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種從松茸中同時提取揮發(fā) 油、多糖和氨基酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 松茸，又名松口蘑、松菌、松覃、合菌、臺菌，屬于擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、口蘑 科、口蘑屬，是具有肉質(zhì)子實體的大型真菌。松茸是一種純天然的珍稀名貴食用菌類，具有 獨特的香味，被譽為"菌中之王"，不僅可以作為可口美味的菜肴，而且具有多種保健和藥用 價值。據(jù)文獻記載，松茸具有強身、補腎壯陽、益腸胃、理氣、化痰和驅(qū)蟲等功效。松茸不僅營 養(yǎng)均衡、充足，而且還有提高免疫力、抗癌抗腫瘤、治療糖尿病及心血管疾病、促腸胃保肝臟 等多種功效。對松茸的研宄表明，松茸成分組成復(fù)雜，主要包括多糖類、多肽類、氨基酸類、 菌蛋白類、礦物質(zhì)類、微量元素類及醇類。子實體中含有1〇〇多種營養(yǎng)元素，包括18種氨基 酸、14種人體必需微量元素、49種活性營養(yǎng)物質(zhì)、5種不飽和脂肪酸、8種維生素、2種糖蛋 白、豐富的膳食纖維和多種活性酶，另含有3種珍貴的活性物質(zhì)，分別是雙鏈松茸多糖、松 茸多肽和全世界所有植物中獨一無二的抗癌物質(zhì)--松茸醇RNA ;其多種營養(yǎng)成分被廣泛 應(yīng)用于藥品、保健品及化妝品領(lǐng)域，其中松茸醇被廣泛應(yīng)用于預(yù)防癌癥和癌癥術(shù)后康復(fù)。
[0003] 松茸是全球化的天然滋補品類，產(chǎn)業(yè)主要集中于歐洲和日本，國內(nèi)尚處于起步階 段。松茸對生長環(huán)境要求極為苛刻，生長過程極為緩慢，至今還無法實現(xiàn)人工栽培。近年 來，由于環(huán)境的惡化和大規(guī)模掠奪式的采集，野生松茸資源日漸枯竭，全球松茸產(chǎn)量逐年減 少，國際市場對松茸的需求量卻不斷增加，故提高松茸的利用率，促進松茸加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展 迫在眉睫。
[0004] 松茸含有豐富的活性物質(zhì)，除了含量較高的多糖外，松茸中的氨基酸含量也非常 豐富，且包括人體全部的必須氨基酸，另外，松茸中的揮發(fā)油在所有蘑菇中最有利用價值， 除了香氣濃郁，還有某些生物活性，如降低膽固醇、抗氧化、免疫調(diào)變以及抗癌作用。然而目 前對松茸的提取主要是針對松茸多糖，其他成分往往被廢棄掉，這不僅提高了松茸多糖的 提取成本，而且造成松茸其他成分的浪費，降低了松茸資源的利用率，不利于松茸的進一步 開發(fā)。另外，迄今為止，還沒有發(fā)現(xiàn)針對松茸進行綜合利用，同時提取揮發(fā)油、氨基酸和多糖 的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種從松茸中同時提取揮發(fā)油、多糖和氨基酸的方法，提 高松茸的利用率，拓寬松茸的加工方向，促進松茸加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
[0006] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下具體技術(shù)手段：
[0007] -種從松茸中同時提取揮發(fā)油、多糖和氨基酸的方法，由以下步驟組成：
[0008] (1)取1重量份過100?300目篩的松茸粉末，加入10?30重量份的蒸餾水，再 加入0. 005?0.02重量份的幾丁質(zhì)酶：木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1.5:2:1的混合酶溶解， 連續(xù)攪拌，40?55°C酶解2?4h ;
[0009] (2)將步驟⑴樣品采用水蒸氣蒸餾法在沸騰條件下提取8?16h，蒸餾出含揮發(fā) 油的液體并用有機溶劑萃取，再分液分離得到含揮發(fā)油的有機相I ;
[0010] (3)將步驟（2)提取揮發(fā)油后的料液過濾，得到濾液和濾渣，再往濾渣中加入5? 20重量份的蒸餾水，在真空度-0. 02?-0. 08MPa和溫度40?60°C的條件下浸提，過濾，重 復(fù)本步驟2?4次，合并所有濾液；
[0011] (4)將步驟⑶中的濾液用有機溶劑萃取、再用分液漏斗分離得有機相II和水相 II，有機相II與步驟（2)中有機相I合并，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40?50°C，減壓去除有機溶 劑，即得松茸揮發(fā)油；
[0012] (5)將水相II在40?60°C，減壓狀態(tài)下濃縮至原體積的1/4?1/8;
[0013] (6)將步驟（5)的濃縮液加入無水乙醇，使乙醇濃度體積分數(shù)為75?95%，充分 攪拌，靜置過夜，過濾，收集沉淀，保留乙醇母液；
[0014] (7)將步驟（6)的沉淀用無水乙醇洗滌后，經(jīng)蒸餾水溶解，過濾，濾液經(jīng)過大孔吸 附樹脂分離，用水洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，即得松茸多糖；
[0015] (8)將步驟（6)的乙醇母液濃縮，經(jīng)蒸餾水分散后，用活性炭脫色、過濾，濾液經(jīng)截 留分子量為l〇〇〇Da的超濾膜分離，所得的過濾液置于陽離子交換樹脂進行交換，濃縮，干 燥，得從松茸中提取的氨基酸。
[0016] 在一些實施方案中，上述步驟（2)和（4)中的有機溶劑為乙酸乙酯。
[0017] 在另一些實施方案中，上述步驟（2)和⑷中的有機溶劑為食品級的乙酸乙酯。
[0018] 在一些實施方案中，上述步驟（7)中的大孔吸附樹脂為AB-8。
[0019] 在一些實施方案中，上述步驟（8)中的陽離子交換樹脂為D001大孔型強酸型苯乙 稀系陽咼子交換樹脂。
[0020] 通過本發(fā)明方法得到各種組分，在工業(yè)上均有較好應(yīng)用前景，如松茸揮發(fā)油可以 用于化妝品中，松茸多糖有應(yīng)用于抗腫瘤藥物的前景，松茸氨基酸在食品中可作為調(diào)味劑。
[0021] 本發(fā)明的優(yōu)點在于：
[0022] (1)提供了一種松茸綜合利用的方法，同時提取揮發(fā)油、多糖和氨基酸，該方法將 松茸中的三種有效成分同時提取，包括了水溶性成分和脂溶性成分，有效避免了單一提取 所帶來的資源浪費，提高了松茸資源的利用率，降低了成本，拓寬了松茸的加工方向。
[0023] (2)本發(fā)明采用酶解、真空低溫有機結(jié)合，更利于細胞內(nèi)物質(zhì)的溶出，同時蛋白酶 能夠水解溶液中的蛋白，使得小分子氨基酸得到充分提取。
[0024] (3)本發(fā)明將水蒸氣蒸餾后萃取的有機相和濾液直接萃取的有機相混合制得揮發(fā) 油，在提高揮發(fā)油的得率的同時，揮發(fā)油中的活性物質(zhì)含量也有所提高。
[0025] (4)本發(fā)明方法所得的揮發(fā)油、多糖和氨基酸可分別應(yīng)用于化妝品、藥品和食品的 領(lǐng)域，其中，多糖可應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物，特別是有關(guān)抗宮頸癌Hela、乳腺癌MCF-7或結(jié) 直腸癌HCT-116腫瘤細胞的藥物。
【具體實施方式】 [0026] 實施例1
[0027] 一種從松茸中同時提取揮發(fā)油、多糖和氨基酸的方法，由以下步驟組成：
[0028] (1)取1重量份過100目篩的松茸粉末，加入10重量份的蒸餾水，再加入0. 005重 量份的幾丁質(zhì)酶：木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1. 5:2:1的混合酶溶解，連續(xù)攪拌，40°C酶解 4h；
[0029] (2)將步驟⑴樣品采用水蒸氣蒸餾法在沸騰條件下提取8h，蒸餾出含揮發(fā)油的 液體并用食品級乙酸乙酯萃取，再分液分離得到含揮發(fā)油的有機相I ;
[0030] (3)將步驟（2)提取揮發(fā)油后的料液過濾，得到濾液和濾渣，再往濾渣中加入20重 量份的蒸餾水，在真空度_〇. 〇8MPa和溫度40°C的條件下浸提，過濾，重復(fù)本步驟2次，合并 所有濾液；
[0031] (4)將步驟（3)中的濾液用食品級乙酸乙酯萃取、再用分液漏斗分離得有機相II 和水相II，有機相II與步驟（2)中有機相I合并，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40°C，減壓去除食品級 乙酸乙酯，即得松茸揮發(fā)油；
[0032](5)將水相II在40°C，減壓狀態(tài)下濃縮至原體積的1/4 ;
[0033] (6)將步驟（5)的濃縮液加入無水乙醇，使乙醇濃度體積分數(shù)75%，充分攪拌，靜 置過夜，過濾，收集沉淀，保留乙醇母液；
[0034] (7)將步驟（6)的沉淀用無水乙醇洗滌后，經(jīng)蒸餾水溶解，過濾，濾液經(jīng)過大孔吸 附樹脂AB-8分離，控制吸附流速2BV/h，用水洗脫，洗脫流速lBV/h，收集洗脫液，濃縮，干 燥，即得松茸多糖；
[0035] (8)將步驟（6)的乙醇母液濃縮，經(jīng)蒸餾水分散后，用活性炭脫色、過濾，濾液經(jīng)截 留分子量為l〇〇〇Da的超濾膜分離，所得的過濾液置于D001大孔型強酸型苯乙烯系陽離子 交換樹脂進行交換，用〇. 5mol/L的氨水進行洗脫，收集洗脫液至茚三酮檢測無色為止，洗 脫液減壓蒸餾濃縮，干燥，得從松茸中提取的氨基酸。
[0036] 實施例2
[0037] 一種從松茸中同時提取揮發(fā)油、多糖和氨基酸的方法，由以下步驟組成：
[0038] (1)取1重量份過300目篩的松茸粉末，加入20重量份的蒸餾水，再加入0. 02重 量份的幾丁質(zhì)酶：木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1. 5:2:1的混合酶溶解，連續(xù)攪拌，55°C酶解 2h；
[0039] (2)將步驟⑴樣品采用水蒸氣蒸餾法在沸騰條件下提取8h，蒸餾出含揮發(fā)油的 液體并用食品級乙酸乙酯萃取，再分液分離得到含揮發(fā)油的有機相I ;
[0040] (3)將步驟（2)提取揮發(fā)油后的料液過濾，得到濾液和濾渣，再往濾渣中加入5重 量份的蒸餾水，在真空度_〇. 〇2MPa和溫度60°C的條件下浸提，過濾，重復(fù)本步驟4次，合并 所有濾液；
[0041] (4)將步驟（3)中的濾液用食品級乙酸乙酯萃取、再用分液漏斗分離得有機相II 和水相II，有機