度滴加丙二酸二乙酯(0.15mol, 24克)溶解的過氧化氫脲(0.15mol, 14.1克)，溫度保持在25度，2小時內加完畢，保持溫度40度，反應24小時。
[0036]1、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液加入磷酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸鈉溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0037]2、過濾，濾液加入甲苯萃取，萃取液回收甲苯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體10.5克，收率69%。
[0038]實施例5:
[0039]1、在100毫升三口燒瓶中，加入異丁香酚(0.1mol, 16.4克)，脂肪酶(0.6克)，攪拌下，于25度左右滴加丁二酸二甲酯(0.1mol, 14.6克)溶解的過氧化氫脲(0.15mol, 14.1克)，3小時內滴加完畢，緩慢升溫至35-40度，反應8小時。
[0040]2、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液加入磷酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸鈉溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0041]3、過濾，濾液加入甲苯萃取，萃取液回收甲苯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體9.9克，收率65%。
[0042]實施例6:
[0043]1、在100毫升三口燒瓶中，加入異丁香酚(0.1mol, 16.4克)，脂肪酶(0.6克)，攪拌下，于30度加入丁二酸單甲醋(0.1mol, 13.2克)，分5次加入過氧化氫脲(0.15mol, 14.1克)，每次2.82克，溫度保持在30度，3小時內滴加完畢，緩慢升溫至35-40度，反應22-24小時。
[0044]2、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液加入硫酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸鈉溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0045]3、過濾，濾液加入乙苯萃取，萃取液回收甲苯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體10.2克，收率67%。
[0046]實施例7:
[0047]1、在100毫升三口燒瓶中，加入異丁香酚(0.1mol, 16.4克)，脂肪酶(0.5克)，攪拌下，于15度加入草酸單甲醋(0.1mol, 10.4克)，然后分4次加入過氧化氫脲(0.1mol, 9.4克)，每次2.35克，維持溫度15度，2小時內加完畢，升高溫度至40度，反應8小時。
[0048]2、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液加入硫酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸鈉溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0049]3、過濾，濾液加入乙酸丁酯萃取，萃取液回收乙酸丁酯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體11.1克，收率73%。
[0050]實施例8:
[0051]1、在100毫升三口燒瓶中，加入異丁香酚(0.1mol, 16.4克)，脂肪酶(0.7克)，攪拌下，于25度左右滴加草酸二甲酯(0.1mol, 13.2克)溶解的過氧化氫脲(0.15mol, 12.5克)，2小時內加完畢，保持溫度40度，反應6小時。
[0052]2、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液加入硫酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸鈉溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0053]3、過濾，濾液加入乙酸丁酯萃取，萃取液回收乙酸丁酯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體11.4克，收率75%。
[0054]實施例9:
[0055]1、在100毫升三口燒瓶中，加入異丁香酚(0.1mol, 16.4克)，脂肪酶(0.5克)，攪拌下，于15度加入草酸單乙酯(0.075mol, 7.8克)，然后分5次加入過氧化氫脲(0.18mol, 12.8克)，每次2.56克，溫度保持在15度，2.5小時內加完畢，保持溫度40度左右，反應24小時。
[0056]2、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液經檸檬酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸氫鉀溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0057]3、過濾，濾液加入乙酸丁酯萃取，萃取液回收乙酸丁酯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體10.8克，收率71 %。
[0058]實施例10:
[0059]1、在100毫升三口燒瓶中，加入異丁香酚(0.1mol, 16.4克)，脂肪酶(0.5克)，攪拌下，室溫下加入草酸(0.075mol, 6.75克)，然后加入草酸二異丙酯(0.075mol, 13.1克)溶解的過氧化氫脲(0.15mol, 14.1克)，2.5小時內加完畢，保持溫度30度，反應24小時。
[0060]2、過濾分離回收尿素和酶催化劑。濾液經檸檬酸水溶液稀釋，再滴加飽和碳酸氫鉀溶液中和，隨后加入高碘酸鈉洗滌。
[0061]3、過濾，濾液加入乙酸丁酯萃取，萃取液回收乙酸丁酯，粗產物以食用酒精結晶，得白色針狀晶體11.1克，收率73%。
[0062]上述實施例只為說明本發(fā)明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發(fā)明的內容并據以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據本發(fā)明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種采用催化氧化法合成香蘭素的工藝，其特征在于，包括如下步驟: 1)將異丁香酚、脂肪酶、二元酸或二元酸衍生物加入反應釜中，攪拌，控制反應釜內溫度為15-35度，加入過氧化氫脲，升溫至15-40度繼續(xù)攪拌反應8-24h，過濾，分離回收濾液，并得到濾液； 2)將步驟I)的濾液經酸液稀釋，堿液中和，高碘酸鈉洗滌后，再經有機溶劑萃取，質量濃度為30-95%食用酒精重結晶，干燥后得到香蘭素。
2.根據權利要求1所述的采用催化氧化法合成香蘭素的工藝，其特征在于，脂肪酶質量為異丁香酸質量1% -4% ;二元酸或二元酸衍生物摩爾質量為異丁香酸摩爾質量的0.75-1.5倍；過氧化氫脲摩爾質量為異丁香酚摩爾質量的1-1.5倍。
3.根據權利要求1或2所述的采用催化氧化法合成香蘭素的工藝，其特征在于，所述脂肪酶為脂肪酶Novozyme 435 ;所述的二元酸或二元酸衍生物為C2-C4二元酸或二元酸酯類衍生物；所述酸液為摩爾濃度為0.1-lmol/L的硫酸水溶液或磷酸水溶液或檸檬酸水溶液；所述的堿液為飽和碳酸氫鈉水溶液或飽和碳酸氫鉀水溶液或飽和碳酸鈉水溶液或飽和碳酸鉀水溶液；所述有機溶劑為甲苯或乙苯或乙酸丁酯。
4.根據權利要求3所述的采用催化氧化法合成香蘭素的工藝，其特征在于，C2-C4二元酸或二元酸酯類衍生物包括草酸或草酸二甲脂/ 二乙酯/ 二異丙酯，丙二酸或丙二酸二甲酯/ 二乙酯/ 二異丙酯，丁二酸或丁二酸二甲酯/ 二乙酯/ 二異丙酯，草酸單甲酯/單乙酯/單異丙酯，丙二酸單甲酯/單乙酯/單異丙酯，丁二酸單甲酯/單乙酯/單異丙酯中的任意一種或兩種。
【專利摘要】一種脂肪酶催化制備香蘭素的方法，在反應釜中，依次經過加入溶劑、底物松柏醇/松柏醛/阿魏酸、脂肪酶、二元酸或二元酸衍生物、過氧化氫脲的步驟，其中脂肪酶質量為底物異丁香酚質量1％-4％；二元酸或二元酸衍生物摩爾質量為底物摩爾質量的0.75-1.5倍；過氧化氫脲摩爾質量為底物摩爾質量的1-2倍；過氧化氫脲加入溫度為15-35度，反應溫度為20-40度，反應時間為14-36小時后，過濾分離回收尿素和酶催化劑濾液經水稀釋，有機溶劑萃取，食用酒精重結晶，干燥后得到香蘭素。有機溶劑萃取后的母液經亞硫酸氫鈉或亞硫酸鈉絡合，回收醛的副產物。本方法的香蘭素收率可達85％，反應步驟簡單，條件溫和，催化特異性強，不易產生副產物，產品收率高，對環(huán)境友好，可易于放大。
【IPC分類】C12P7-24
【公開號】CN104531781
【申請?zhí)枴緾N201410770561
【發(fā)明人】李斌, 彭春睿, 劉旭, 石化兵
【申請人】波頓（上海）生物技術有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月12日