專利名稱:L-蘇氨酸的發(fā)酵法生產(chǎn)的制作方法
本發(fā)明涉及L-蘇氨酸生產(chǎn)菌及其選育方法。
發(fā)酵法生產(chǎn)L-蘇氨酸，通常采用短桿菌屬細菌和乳糖發(fā)酵短桿菌的α-氨基-β-羥基戊酸(AHV)和S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)雙重抗性變異株。為進一步提高產(chǎn)酸水平，對這類變異株實施了新的改良。研究結(jié)果表明，采用以琥珀酸為唯一碳源的平板培養(yǎng)基(簡稱為琥珀酸培養(yǎng)基SAM)分離選擇變異株，可得到收率更高的L-蘇氨酸生產(chǎn)菌。
本發(fā)明使用的微生物，是從乳糖發(fā)酵短桿菌出發(fā)誘導(dǎo)的、具有AHV、AEC雙重抗性、再通過琥珀酸培養(yǎng)基選擇(以下稱為SAMg標(biāo)記)得到的變異株。首先從野生型菌株ATCC/3869出發(fā)誘導(dǎo)AHV抗性和AEC抗性，再賦予SAMg標(biāo)記，即可獲得本發(fā)明的變異株。
以下說明選育SAMg變異株的具體操作方法。將隔夜培養(yǎng)的乳糖發(fā)酵短桿菌B7-8354(AHVrAECr)的菌體用0.1M PH7.2磷酸鹽緩沖液制成濃度為103個/毫升的單細胞懸浮液，加入甲基磺酸乙酯(最終濃度為0.4M)，31℃振蕩處理1小時，中止反應(yīng)后將處理液涂布于琥珀酸培養(yǎng)基上，31℃培養(yǎng)2-6天，挑選在該培養(yǎng)基上生長較快的大菌落，即為SAMg變異株。
圖1表示從B7-8354出發(fā)誘導(dǎo)獲得的175株SAMg變異株的搖管產(chǎn)酸分布。
圖2表示最高株C2-1261(AHVrAECrSAMg)與其親株B7-8354(AHVrAECr)產(chǎn)酸能力的比較。結(jié)果表明，由于誘導(dǎo)SAMg變異，使L-蘇氨酸產(chǎn)量大幅度提高。
琥珀酸培養(yǎng)基組成(%)琥珀酸鈉 5.0(NH4)2SO40.15KH2PO40.1K2HPO40.3MgSO4·7H2O 0.01MnSO4·4H2O 0.001FeSO4·7H2O 0.001d-生物素(μg) 3硫胺鹽酸鹽(μg) 10尿素 0.15瓊脂粉 2.0PH 7.0
權(quán)利要求
發(fā)酵法生產(chǎn)L-蘇氨酸，其特征是采用從乳糖發(fā)酵短桿菌出發(fā)誘導(dǎo)的，具有α-氨基-β-羥基戊酸(AHV)和S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)雙重抗性的、以琥珀酸為唯一碳源的平板分離培養(yǎng)基上選擇得到的具有L-蘇氨酸生產(chǎn)能力的變異株作為L-蘇氨酸生產(chǎn)菌。
專利摘要
發(fā)酵法生產(chǎn)L-蘇氨酸，通常采用短桿菌屬細菌的α-氨基-β-羥基戊酸(AHV)和S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)雙重抗性變異株。本發(fā)明采用乳糖發(fā)酵短桿菌的AHV、AEC雙重抗性、再通過以琥珀酸為唯一碳源的培養(yǎng)基(簡稱琥珀酸培養(yǎng)基)選擇得到的變異株作為L-蘇氨酸生產(chǎn)菌，代表株C2-1261的L-蘇氨酸產(chǎn)量為16mg/ml。研究結(jié)果表明，琥珀酸培養(yǎng)基可有效地用于L-蘇氨酸生產(chǎn)菌的篩選。
文檔編號C12R1/13GK85104604SQ85104604
公開日1987年4月8日 申請日期1985年9月25日
發(fā)明者檀耀輝, 張炳榮 申請人:無錫輕工業(yè)學(xué)院導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan