專利名稱:一種珠蛋白酶解物及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物血液的開(kāi)發(fā)利用，具體說(shuō)是一種含有2-20肽的珠蛋白酶解物及其制備和應(yīng)用，其是一種具有顯著的血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制活性的珠蛋白水解產(chǎn)物。
背景技術(shù)：
高血壓是最常見(jiàn)的心血管疾病之一，它能造成大腦、心血管、腎臟的損害，是引起腦卒中、心力衰竭和冠心病等的重要因素，嚴(yán)重威脅著人類的健康。因此，治療和預(yù)防高血壓對(duì)提高人類的健康水準(zhǔn)，延長(zhǎng)壽命有著重要的意義。
血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶(angiotensin I converting enzyme，略稱為ACE)在人體腎素-血管緊張素系統(tǒng)和激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)中，對(duì)血壓調(diào)節(jié)起著重要的作用。ACE可以將血管緊張素I轉(zhuǎn)換為血管緊張素II，使周?chē)?dòng)脈、血管平滑肌收縮，同時(shí)刺激醛固酮分泌，促進(jìn)人體腎臟對(duì)Na+、K+的重吸收，引起鈉儲(chǔ)量和血容量的增加，使血壓升高；還可以使舒緩激肽失活，引起血壓升高。
綜上所述，ACE一方面產(chǎn)生使血壓上升的血管緊縮素II，另一方面，使具有血管舒張作用的舒緩激肽失活，這都造成了血壓的上升。所以，如果抑制了ACE的活性，就可以起到降壓的作用。
現(xiàn)有的作為治療高血壓的合成物卡普托利就是ACE的抑制劑，但它有很多副作用，所以源于食品蛋白中的ACE抑制肽因其無(wú)毒副作用，同時(shí)具有其它療效而被廣泛應(yīng)用，市場(chǎng)前景極好。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種珠蛋白酶解物及其制備和應(yīng)用，制得包含2-20肽的具有顯著抑制ACE活性的酶解物，其源于動(dòng)物蛋白，無(wú)毒副作用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種珠蛋白酶解物，以豬血中血紅蛋白脫除血紅素后得到的珠蛋白為原料，通過(guò)加入蛋白酶酶解，制成富含活性肽的蛋白酶解物。
珠蛋白酶解物的制備方法以豬血中的血紅蛋白脫除血紅素后得到的珠蛋白為原料，通過(guò)酶解、滅活、離心、過(guò)濾除去不溶物等步驟，獲得含有2-20肽的活性多肽類化合物的蛋白酶解物。
酶法水解過(guò)程為，將珠蛋白粉末用緩沖液溶解后，加入蛋白酶，在30-50℃和蛋白酶所適用pH值條件下反應(yīng)1-48小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在90-100℃下加熱≥10min滅活，終止酶解；其中酶與珠蛋白粉重量體積比為1-10g∶100ml，酶與底物(即珠蛋白粉)質(zhì)量比為0.1-10％，pH值可選范圍通常為2-10；所使用的蛋白酶為，胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、堿性蛋白酶或中性蛋白酶等，以及由這些酶構(gòu)成的復(fù)合酶。
該蛋白酶解物中包含的多肽對(duì)ACE的抑制作用，可用于制備治療和預(yù)防高血壓的藥物。
該酶解物進(jìn)行離心、過(guò)濾、超濾后，再加工成各種劑型，藥物的劑型可為散劑，顆粒劑，片劑，膠囊，水溶液，懸浮液，乳化液，噴劑，粉劑。
該酶解物進(jìn)行離心、過(guò)濾、然后通過(guò)噴霧干燥制備得到的珠蛋白多肽粉，可以添加到各種食品當(dāng)中，作為抑制血壓的保健食品。食品的形態(tài)可以是液體的像清涼飲料，乳酸飲料，調(diào)味品，湯類；也可以是固體的如奶酪，火腿，點(diǎn)心等。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明珠蛋白的酶解液對(duì)血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶有很好的抑制作用，應(yīng)用到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，有很好的降血壓作用；其可用于治療和預(yù)防高血壓，同時(shí)具有增強(qiáng)機(jī)體防御功能、調(diào)節(jié)生理節(jié)律、預(yù)防疾病和促進(jìn)康復(fù)等作用。
2.本發(fā)明采用了單酶水解的方法，可以在溫和的條件下，將珠蛋白酶解成2-20肽的活性多肽和氨基酸類物質(zhì)。
3.本發(fā)明將豬血先除去血紅素制得珠蛋白后，再用酶在溫和的條件下水解，這樣比豬血直接作為底物具有更高的底物濃度和酶解液的得率。
4.本發(fā)明酶解液中沒(méi)有了血紅素的顏色和腥味，可以作為很多食品的添加劑。
5.本發(fā)明酶解液源于動(dòng)物蛋白，無(wú)毒副作用。
圖1為口服不同劑量的珠蛋白酶解液后高血壓大鼠的收縮壓變化隨時(shí)間變化曲線。
具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述按常規(guī)方法進(jìn)行血紅素的分離新鮮豬血加0.8％的檸檬酸三鈉(防止血液凝集)，攪拌均勻后，3000r/min離心，取血球(沉淀部分)加等量的蒸餾水，攪拌30分鐘后，血球溶血，加5倍體積的含3％HCl的丙酮溶液，攪拌靜置后，過(guò)濾，取沉淀部分，噴霧干燥后即得珠蛋白粉末。(參考文獻(xiàn)周淡宜，徐水祥，周敏子.血紅素制備工藝的實(shí)驗(yàn)研究.藥物生物技術(shù).2002，9(2)103-104.)實(shí)施例1單酶水解稱取珠蛋白粉末1g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入0.1％(酶與底物比)的胰蛋白酶，在37℃和pH7的條件下酶解48小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在100℃下加熱10min，終止酶解，進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為82％。
實(shí)施例2單酶水解稱取珠蛋白粉末5g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入1％(酶與底物比)的糜蛋白酶，在37℃和pH7.5的條件下酶解12小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在100℃下加熱30min，終止酶解，進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為76％。
實(shí)施例3復(fù)合酶水解稱取珠蛋白粉末3g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入1％(酶與底物比)的復(fù)合蛋白酶，在37℃和pH7的條件下酶解24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在95℃下加熱18min，終止酶解，進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為81％。
實(shí)施例4單酶水解稱取珠蛋白粉末8g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入6％(酶與底物比)的堿性蛋白酶，在55℃和pH8的條件下酶解36小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在98℃下加熱15min，終止酶解，進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為90％。
實(shí)施例5單酶水解稱取珠蛋白粉末4g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入3％(酶與底物比)的堿性蛋白酶，在37℃和pH10的條件下酶解40小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在100℃下加熱15min，終止酶解，用HCl溶液調(diào)節(jié)酶解液成中性進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為83％。
實(shí)施例6單酶水解稱取珠蛋白粉末3g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入1％(酶與底物比)的胃蛋白酶，在37℃和pH2的條件下酶解12小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在100℃下加熱10min，終止酶解，用NaOH溶液調(diào)節(jié)酶解液成中性，進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為92％。
實(shí)施例6單酶水解稱取珠蛋白粉末2g溶于100ml的磷酸緩沖液中，加入0.15％(酶與底物比)的胃蛋白酶，在37℃和pH5的條件下酶解24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在100℃下加熱10min，終止酶解，用NaOH溶液調(diào)節(jié)酶解液成中性，進(jìn)行酶解物的ACE抑制活性檢測(cè)約為79％。
應(yīng)用例1珠蛋白多肽粉膠囊的制備對(duì)上述實(shí)施例1制備的珠蛋白酶解液進(jìn)行離心、分離除去水不溶性雜質(zhì)后，進(jìn)一步過(guò)濾精制，通過(guò)超濾除去大分子的物質(zhì)，然后通過(guò)噴霧干燥制備得到珠蛋白多肽粉，經(jīng)過(guò)罐裝，制成珠蛋白多肽粉膠囊。
應(yīng)用例2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選擇自發(fā)性高血壓大鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停笫箫曫B(yǎng)一周后，將其分組，每組八只，用500-1000mg/kg劑量的灌胃，采用尾部測(cè)壓的方法每天測(cè)量一次血壓，一直測(cè)到兩周。結(jié)果表明，用500mg/kg的劑量灌胃，四天后對(duì)照組大鼠的血壓保持170±6mm Hg，而治療組自發(fā)性高血壓大鼠的血壓從170±6mm Hg降至156±5mm Hg明顯下降，下降了13.8±5.3mm Hg，最大抑制效果出現(xiàn)在一周后，血壓降到最低(153±4.2mm Hg)。用750mg/kg、1000mg/kg的劑量用同樣的大鼠只數(shù)和同樣的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明隨著灌胃量的增加，血壓的降低呈劑量依賴關(guān)系(如圖1所示)。由此可知此酶解液具有很好的降血壓效果。
權(quán)利要求
1.一種珠蛋白酶解物，其特征在于以豬血中血紅蛋白脫除血紅素后得到的珠蛋白為原料，通過(guò)加入蛋白酶酶解，制成富含活性肽的蛋白酶解物。
2.一種權(quán)利要求
1所述珠蛋白酶解物的制備方法，其特征在于以豬血中的血紅蛋白脫除血紅素后得到的珠蛋白為原料，通過(guò)酶解、滅活、離心、過(guò)濾除去不溶物后，獲得含有2-20肽的活性多肽類化合物的蛋白酶解物。
3.按照權(quán)利要求
1或2所述珠蛋白酶解物的制備方法，其特征在于酶法水解過(guò)程為，將珠蛋白粉末用緩沖液溶解后，加入蛋白酶，在30-55℃和蛋白酶所適用pH值條件下反應(yīng)1-48小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，在95-100℃下加熱≥10min滅活，終止酶解；其中酶與珠蛋白粉重量體積比為1-10g100ml，酶與底物質(zhì)量比為0.1-10％，pH值可選范圍通常為2-10。
4.按照權(quán)利要求
3所述珠蛋白酶解物的制備方法，其特征在于所使用的蛋白酶為，胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、堿性蛋白酶或中性蛋白酶，以及由這些酶構(gòu)成的復(fù)合酶。
5.一種權(quán)利要求
1所述的珠蛋白酶解物的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求
1所述珠蛋白酶解物用于制備治療和預(yù)防高血壓的藥物。
6.按照權(quán)利要求
5所述的珠蛋白酶解物的應(yīng)用，其特征在于所述藥物的劑型可為顆粒劑、片劑、膠囊、水溶液、懸浮液、乳化液、噴劑或粉劑。
7.一種權(quán)利要求
1所述的珠蛋白酶解物的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求
1所述珠蛋白酶解物過(guò)濾后，通過(guò)噴霧干燥得到的珠蛋白多肽粉，可以添加到各種食品當(dāng)中，制備成作為抑制血壓的保健食品。
8.按照權(quán)利要求
7所述的珠蛋白酶解物的應(yīng)用，其特征在于食品的形態(tài)可以是液體的清涼飲料、乳酸飲料、調(diào)味品或湯類，也可以是固體的奶酪、火腿或點(diǎn)心。
專利摘要
本發(fā)明涉及動(dòng)物血液的開(kāi)發(fā)利用，一種珠蛋白酶解物，其以豬血中的血紅蛋白脫除血紅素后得到的珠蛋白為原料，通過(guò)加蛋白酶酶解的方法，制成富含活性肽的蛋白酶解物。該酶解物具有顯著抑制血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶活性的作用，可用于治療和預(yù)防高血壓，同時(shí)具有增強(qiáng)機(jī)體防御功能、調(diào)節(jié)生理節(jié)律、預(yù)防疾病和促進(jìn)康復(fù)等作用。
文檔編號(hào)A61K38/04GK1990875SQ200510136767
公開(kāi)日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月30日
發(fā)明者胡建恩, 杜昱光, 余奕珂, 白雪芳, 譚成玉, 王佳培 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan