專利名稱:一種蟲草紅曲的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥品或者是健康食品的制造領(lǐng)域，特別是涉及一種同時(shí)含有 Monacolin K、蟲草素和蟲草多糖等活性物質(zhì)的蟲草紅曲的制造方法。
背景技術(shù)
紅曲菌(Monascus spp.)是我國(guó)重要的微生物資源，在我國(guó)已有上千年的使用歷史，被廣泛用于食品發(fā)酵劑、食品著色劑和中藥配伍的生產(chǎn)。紅曲菌在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生多種具有生理活性的代謝產(chǎn)物如紅曲色素、Monacolin類物質(zhì)、Y-氨基丁酸以及多種酶類。 自1979年，日本學(xué)者在紅曲的發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)具有降血脂效果的Monacolin K以來。紅曲這一中華民族先民智慧結(jié)晶的產(chǎn)物，便開始成為國(guó)際生物領(lǐng)域?qū)W術(shù)研究的熱點(diǎn)。這從另一個(gè)方面又促進(jìn)了紅曲的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展與普及。而今，我們國(guó)家生產(chǎn)的功能性紅曲已經(jīng)遠(yuǎn)銷歐洲， 美洲，非洲等等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，其卓越的效果和極低的副作用，正受到越來越多國(guó)家消費(fèi)者的喜愛。
對(duì)功能性紅曲的研究是從降血脂開始的，關(guān)于功能性紅曲降血脂效果，已為中國(guó)、 美國(guó)、德國(guó)、挪威等等許多國(guó)家的動(dòng)物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。但近年來的研究結(jié)果表明， 功能性紅曲的效果不僅局限于降低血脂，在防治心腦血管疾病方面，功能性紅曲在抗癌、抗氧化、抗疲勞、降血壓、抗炎癥、防治骨質(zhì)疏松等方面也有相當(dāng)不錯(cuò)的表現(xiàn)。
蛹蟲草，為蟲草屬，又名北冬蟲夏草、北蛹蟲草，簡(jiǎn)稱北蟲草。自古就是國(guó)人強(qiáng)身健體、防御疾病的珍品。近年來，隨著蟲草藥理研究的深入，更進(jìn)一步證實(shí)北蟲草在抗腫瘤、抗自由基、增強(qiáng)免疫力、肝炎、心率失常等等方面均有不錯(cuò)的功效，因此，更使之成為當(dāng)下國(guó)人之珍品。
蛹蟲草所具有的各種功效與其中的功效成分是分不開的。業(yè)已從蟲草的子實(shí)體和菌絲體中分離出來的活性成分包括蟲草多糖、蟲草素、以及留醇類化合物，這其中又以蟲草素活性最強(qiáng)。它(3，-脫氧腺苷)是第一個(gè)被分離出的核苷類抗菌素，具有抗菌、抗病毒、抗癌、抗衰老、降血脂等功效。而蟲草多糖在增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤方面表現(xiàn)也十分出色。(侯淑麗，趙鳳閣.十年來蛹草的成分及藥理研究概述.長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997， 13(6):64-66;李姑.蟲草素的體內(nèi)代謝特點(diǎn)及藥理作用[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)， 200527(5): 283-284;韋會(huì)平.蟲草素的生物合成及化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾.博士論文，西南大學(xué)， 2009 年。)
目前市場(chǎng)銷售的蛹蟲草主要有兩種，第一種主要是以蟲草子實(shí)體為主，他主要以大米等原料為主經(jīng)過固態(tài)培養(yǎng)，收割子實(shí)體后上市銷售，所獲得的子實(shí)體為混合物，既有蟲草多糖，又有蟲草素還有其他的物質(zhì)等等。另一種是將蟲草菌利用液態(tài)深層發(fā)酵后獲得菌絲體， 直接灌成膠囊或者其他產(chǎn)品形態(tài)進(jìn)行銷售。這些產(chǎn)品中蟲草素的含量大致在0. 04、. 5%之間(雷萍等.蟲草產(chǎn)品中腺苷和蟲草素含量的測(cè)定-UPLC檢測(cè)，食用菌學(xué)報(bào)(2009. 16(3): 63^66 ；李祥玲等.HPLC測(cè)定人工蛹蟲草及其培養(yǎng)基中蟲草素和腺苷含量，湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，2010年6月第33卷第2期)。[0006]如何將蟲草與紅曲二者結(jié)合起來，公開號(hào)為CN101531968A的中國(guó)發(fā)明專利“紅曲協(xié)同發(fā)酵提高蛹蟲草子實(shí)體和蟲草菌素產(chǎn)量的方法”，公開了一種提高蛹蟲草子實(shí)體和蟲草素產(chǎn)量的方法，其過程是先將紅曲菌和蛹蟲草分別培養(yǎng)，待培養(yǎng)到一定程度后，將二者按一定得比列進(jìn)行混合后再培養(yǎng)，直到長(zhǎng)出子實(shí)體。此工藝雖然能提高子實(shí)體的和蟲草素的產(chǎn)量，但是，存在以下不足(1)整個(gè)方法以提高蟲草子實(shí)體和蟲草素產(chǎn)量為目的，忽略了紅曲的功效成分；(2)待將紅曲和蛹蟲草分別培養(yǎng)好后，要將二者按比例混合，再裝入瓶中進(jìn)行蟲草的子實(shí)體的培養(yǎng)，容易造成染菌；(3)整個(gè)培養(yǎng)過程長(zhǎng)，多達(dá)40天。(4)該專利僅僅以子實(shí)體為目標(biāo)，對(duì)子實(shí)體收割后的渣如何處理未作說明。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種工業(yè)上容易實(shí)現(xiàn)的，通過二次發(fā)酵技術(shù)，接種入蛹蟲草菌種進(jìn)行發(fā)酵，從而獲得同時(shí)含有紅曲功效成分Monacolin K和北蟲草功效成分蟲草素、蟲草多糖等活性物質(zhì)的蟲草紅曲，從而強(qiáng)化紅曲之功能。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是 一種蟲草紅曲的制造方法，包括
固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后，接種紅曲菌菌種進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后作滅活處理，然后接種蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后再經(jīng)干燥處理得到蟲草紅曲，其中，所述的接種紅曲菌菌種進(jìn)行發(fā)酵為接種量2-25%(v/w)，30-35°C下培養(yǎng)2-5天，然后轉(zhuǎn)入20-24°C下培養(yǎng)10-20天；接種蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵為接種量2-20%(v/w)，20-26°C下培養(yǎng)8_15天。
本發(fā)明采用二次發(fā)酵技術(shù)，在保留紅曲的功效成分Monacolin K的同時(shí)，通過接種入蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵，獲得同時(shí)具有蟲草素和多糖的蟲草紅曲，從而增強(qiáng)紅曲的功效。發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)發(fā)酵好的紅曲經(jīng)滅菌后，接種入蟲草菌后，蟲草菌可以很好的生長(zhǎng)，而且，前期生長(zhǎng)的過程中，蟲草菌幾乎不對(duì)紅曲的主要功效成分Monacolin K產(chǎn)生分解。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的紅曲菌選自紫色紅曲菌(Monascus purpureus)、紅曲紅曲菌(Monascus anka)、叢毛紅曲菌(Monascus pilosus)或紅色紅曲菌(Monasucs ruber)。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的蟲草菌種為蛹蟲草，又名北冬蟲夏草，其拉丁學(xué)名為Cordyc印S militaris。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的固態(tài)培養(yǎng)基主要是以大米、米糠和黃豆作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液調(diào)整固態(tài)基質(zhì)的含水量為30-40%。營(yíng)養(yǎng)液中包括微生物生長(zhǎng)所需要的氮源、碳源、維生素和微量元素，技術(shù)人員按照現(xiàn)有技術(shù)的記載選用常規(guī)的營(yíng)養(yǎng)液即可。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的紅曲菌菌種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得的紅曲液態(tài)菌種。這樣既可以獲得足夠的紅曲菌種，有利于縮短發(fā)酵時(shí)間，又可以給固態(tài)培養(yǎng)基補(bǔ)充水分。所述的液態(tài)培養(yǎng)基中包括紅曲菌生長(zhǎng)的各種碳源、氮源、微生素以及微量元素。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)， 選用通用的液態(tài)培養(yǎng)基都可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的蟲草菌種是
4經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得的蟲草液態(tài)菌種。這樣既可以獲得足夠的蟲草菌菌種，有利于縮短發(fā)酵時(shí)間，又可以給固態(tài)培養(yǎng)基補(bǔ)充水分。所述的液態(tài)培養(yǎng)基中包括蟲草菌生長(zhǎng)的各種碳源、氮源、微生素以及微量元素。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)， 選用通用的液態(tài)培養(yǎng)基都可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的二次發(fā)酵結(jié)束后干燥處理的溫度在80°C以下。這樣可以保證蟲草菌酶類等生物活性物質(zhì)的的活性。
作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的蟲草紅曲的制造方法，其中，所述的蟲草紅曲中以干重計(jì)的Monacolin K含量彡％ig/g、蟲草素含量彡lmg/g、多糖(包括紅曲多糖和蟲草多糖)含量> 80mg/g。因此本發(fā)明所得的蟲草紅曲干粉，可以用作具有降低血脂和提高人體免疫力的藥物或者是健康食品原料。
具體地說，本發(fā)明實(shí)施例的一種蟲草紅曲的制造方法包括以下步驟
(1)紅曲菌種的液態(tài)培養(yǎng)，
(2)紅曲的固態(tài)發(fā)酵在大米、麩皮或米糠等固態(tài)基質(zhì)中加入一定的營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)節(jié)含水量到一定程度后，進(jìn)行滅菌，就熱打散獲得固態(tài)培養(yǎng)基，經(jīng)冷卻后，接種入紅曲液態(tài)菌種，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，
(3)將步驟(2)培養(yǎng)好的紅曲在121°C下，滅菌10分鐘，
(4)待冷卻后，接種入北冬蟲草液態(tài)菌種，進(jìn)行北冬蟲草固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，
(5)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，倒出固態(tài)培養(yǎng)物，干燥、粉碎即得蟲草紅曲。
蟲草紅曲產(chǎn)品中蟲草素的檢測(cè)方法用HPLC法，具體條件如下 流動(dòng)相乙腈水=6 94
流速:lmL/min
色譜柱4. 6 X 150mm, 5Mm, C18 柱檢測(cè)波長(zhǎng)260nm 進(jìn)樣量20μ
樣品前處理方法準(zhǔn)確稱量0. Ig至容量瓶，加純凈水至刻度10mL，超聲1小時(shí)，冷卻后，用0. 45ΜΠ1微孔濾膜過濾后，待測(cè)。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明以紅曲中活性物質(zhì)Monacolin K作為評(píng)價(jià)指標(biāo)的情況，接種蟲草菌種后，對(duì) Monacolin K含量沒有影響，且蟲草菌種可以在經(jīng)過紅曲發(fā)酵后的基質(zhì)上生長(zhǎng)良好，獲得的紅曲產(chǎn)品中含有以干重計(jì)的含量彡4mg/g的Monacolin K、含量彡lmg/g的蟲草素、含量 ^ 80mg/g的多糖等活性物質(zhì)。
本發(fā)明的另一優(yōu)勢(shì)在于，在不添加任何設(shè)施設(shè)備的情況下，僅利用一條紅曲生產(chǎn)線，就能完成紅曲和蟲草兩條生產(chǎn)線的作用，極大的節(jié)約了生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均可從市場(chǎng)購(gòu)得或是本行業(yè)常用的。下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。
實(shí)施例1
紅曲紅曲菌(Monasucs anka)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紅曲紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，然后于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)菌種。
蛹蟲草菌(Cordyceps militaris)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖4%，大豆蛋白胨1%，牛肉浸膏1%，酵母膏1%， MgSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL三角瓶裝量為200mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，用無菌水洗下在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)7 天后的蛹蟲草孢子，倒入上述冷卻后的三角瓶?jī)?nèi)，在25°C，180r/min的搖床上培養(yǎng)6天，獲得蛹蟲草液態(tài)菌種。
稱取過20目篩的大米粉550g、米糠100克和黃豆粉50克作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液(營(yíng)養(yǎng)液組成(w/v)蔗糖4%，大豆蛋白胨2%，MgSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 1%，余量為自來水) 調(diào)節(jié)其含水量為30%得到固態(tài)培養(yǎng)基，然后將固態(tài)培養(yǎng)基裝入500mL玻璃瓶中，每瓶裝量為 200g，接著在121°C下滅菌45分鐘，待冷卻到40°C下后，每瓶接種上述紅曲液態(tài)菌種30mL， 搖勻后，置于32°C下培養(yǎng)3天，然后轉(zhuǎn)入22°C下培養(yǎng)13天后，再在121°C下滅活10分鐘，取出待冷卻至40°C下后，接種入上述的蛹蟲草液態(tài)菌種20mL，置于23°C下培養(yǎng)12天。二次發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物80°C下干燥處理得到蟲草紅曲產(chǎn)品。
經(jīng)測(cè)定，本實(shí)施例得到的蟲草紅曲產(chǎn)品中Monacolin K含量為8. 35mg/g，蟲草素含量為1.47mg/g，多糖含量為102mg/g。而未接種蛹蟲草菌的紅曲中Monacolin K含量為 8. 90mg/g,多糖含量為 57mg/g。
實(shí)施例2
紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紫色紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，然后于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)菌種。
蛹蟲草菌(Cordyceps militaris)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖4%，大豆蛋白胨1%，牛肉浸膏1%，酵母膏1%， MgSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL三角瓶裝量為200mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，用無菌水洗下在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)7 天后的蛹蟲草孢子，倒入上述冷卻后的三角瓶?jī)?nèi)，在25°C，180r/min的搖床上培養(yǎng)7天，獲得蛹蟲草液態(tài)菌種。
稱取過20目篩的大米粉500g、米糠100克和黃豆粉100克作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液(營(yíng)養(yǎng)液組成(w/v)蔗糖4%，酵母浸膏2%，MgSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 1%，余量為自來水)， 調(diào)節(jié)其含水量為40%得到固態(tài)培養(yǎng)基，然后將固態(tài)培養(yǎng)基裝入500mL玻璃瓶中，每瓶裝量為 200g，接著在121°C下滅菌45分鐘，待冷卻到40°C下后，每瓶接種上述紅曲液態(tài)菌種25mL， 搖勻后，置于32°C下培養(yǎng)3天，然后轉(zhuǎn)入22°C下培養(yǎng)12天后，再在121°C下滅活10分鐘，取出待冷卻至40°C下后，接種入上述的蛹蟲草液態(tài)菌種20mL，置于23°C下培養(yǎng)12天。二次發(fā)酵結(jié)束后，將瓶?jī)?nèi)的發(fā)酵產(chǎn)物倒出，經(jīng)70°C干燥、粉碎后得到蟲草紅曲產(chǎn)品。
經(jīng)測(cè)定，本實(shí)施例得到的蟲草紅曲產(chǎn)品中Monacolin K含量為6. 47mg/g，蟲草素含量為1. 78mg/g，多糖含量為96mg/g。而未接種蛹蟲草菌的紅曲中Monacolin K含量為
6.54mg/g,多糖含量為 55mg/g。
實(shí)施例3
從毛紅曲菌(Monasucs pilosus)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的從毛紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，然后于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)菌種。
蛹蟲草菌(Cordyc印s militaris)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖4%，大豆蛋白胨1%，牛肉浸膏1%，酵母膏1%， MgSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL三角瓶裝量為200mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，用無菌水洗下在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)7 天后的蛹蟲草孢子，倒入上述冷卻后的三角瓶?jī)?nèi)，在25°C，180r/min的搖床上培養(yǎng)6天，獲得蛹蟲草液態(tài)菌種。
稱取過20目篩的大米粉500g、米糠100克和黃豆粉100克作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液(營(yíng)養(yǎng)液組成(w/v)蔗糖2%，葡萄糖2%，大豆蛋白胨1%，酵母浸膏1%，MgSO4 0. 1%， KH2PO4 0. 1%，余量為自來水)，調(diào)節(jié)其含水量為35%得到固態(tài)培養(yǎng)基，然后將固態(tài)培養(yǎng)基裝入 500mL玻璃瓶中，每瓶裝量為200g，接著在121°C下滅菌45分鐘，待冷卻到40°C下后，每瓶接種上述紅曲液態(tài)菌種50mL，搖勻后，置于30°C下培養(yǎng)5天，然后轉(zhuǎn)入20°C下培養(yǎng)15天后， 再在121 °C下滅活10分鐘，取出待冷卻至400C下后，接種入上述的蛹蟲草液態(tài)菌種40mL，置于20°C下培養(yǎng)8天。二次發(fā)酵結(jié)束后，將瓶?jī)?nèi)的發(fā)酵產(chǎn)物倒出，經(jīng)65°C干燥、粉碎后得到蟲草紅曲產(chǎn)品。
經(jīng)測(cè)定，本實(shí)施例得到的蟲草紅曲產(chǎn)品中Monacolin K含量為7. 32mg/g，蟲草素含量為1. 27mg/g，多糖含量為92mg/g。而未接種蛹蟲草菌的紅曲Monacolin K含量為
7.93mg/g,多糖含量為 56mg/g。
實(shí)施例4
紅色紅曲菌(Monasucs ruber)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紅色紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，然后于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)菌種。
蛹蟲草菌(Cordyc印s militaris)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖4%，大豆蛋白胨1%，牛肉浸膏1%，酵母膏1%， MgSO4 0.1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL三角瓶裝量為200mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，用無菌水洗下在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)7 天后的蛹蟲草孢子，倒入上述冷卻后的三角瓶?jī)?nèi)，在25°C，180r/min的搖床上培養(yǎng)6天，獲得蛹蟲草液態(tài)菌種。
稱取過20目篩的大米粉550g、米糠100克和黃豆粉50克作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液(營(yíng)養(yǎng)液組成(w/v):蔗糖2%，葡萄糖洲，大豆蛋白胨1%，酵母浸膏1%，MgSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 1%，余量為自來水)調(diào)節(jié)其含水量為3 得到固態(tài)培養(yǎng)基，然后將固態(tài)培養(yǎng)基裝入500mL 玻璃瓶中，每瓶裝量為200g，接著在121°C下滅菌45分鐘，待冷卻到40°C下后，每瓶接種上述紅曲液態(tài)菌種40mL，搖勻后，置于32°C下培養(yǎng)3天，然后轉(zhuǎn)入22°C下培養(yǎng)10天后，再在 121 °C下滅活10分鐘，取出待冷卻至400C下后，接種入上述的蛹蟲草液態(tài)種20mL，置于23°C 下培養(yǎng)15天。二次發(fā)酵結(jié)束后，將瓶?jī)?nèi)的發(fā)酵產(chǎn)物倒出，經(jīng)65°C干燥、粉碎后得到蟲草紅曲產(chǎn)品ο
經(jīng)測(cè)定，本實(shí)施例得到的蟲草紅曲產(chǎn)品中Monacolin K含量為4. 35mg/g，蟲草素含量為3. 18mg/g，多糖含量為liang/g。而未接種蛹蟲草菌的紅曲Monacolin K含量為 4. 90mg/g,多糖含量為 55mg/g。
實(shí)施例5
紅曲紅曲菌(Monasucs anka)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紅曲紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，然后于32°C和180r/min下培養(yǎng)7 后作為紅曲液態(tài)菌種。
蛹蟲草菌(Cordyc印s militaris)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖4%，大豆蛋白胨1%，牛肉浸膏1%，酵母膏1%， MgSO4 0.1%，KH2PO4 0. 2%，余量為自來水，pH值自然。500mL三角瓶裝量為200mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，用無菌水洗下在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)7 天后的蛹蟲草孢子，倒入上述冷卻后的三角瓶?jī)?nèi)，在25°C，180r/min的搖床上培養(yǎng)6天，獲得蛹蟲草液態(tài)菌種。
稱取過20目篩的大米粉550g、米糠100克和黃豆粉50克作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液(營(yíng)養(yǎng)液組成(w/v)蔗糖4%，大豆蛋白胨1%，酵母浸膏1%，MgSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 1%， 余量為自來水)調(diào)節(jié)其含水量為30%得到固態(tài)培養(yǎng)基，然后將固態(tài)培養(yǎng)基裝入500mL玻璃瓶中，每瓶裝量為200g，接著在121°C下滅菌45分鐘，待冷卻到40°C下后，每瓶接種上述紅曲液態(tài)菌種4mL，搖勻后，置于35°C下培養(yǎng)2天，然后轉(zhuǎn)入下培養(yǎng)20天后，再在121°C下滅活10分鐘，取出待冷卻至40°C下后，接種入上述的蛹蟲草液態(tài)菌種4mL，置于下培養(yǎng) 15天。二次發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵產(chǎn)物80。C下干燥處理得到蟲草紅曲產(chǎn)品。
經(jīng)測(cè)定，本實(shí)施例得到的蟲草紅曲產(chǎn)品中Monacolin K含量為12. 98mg/g,蟲草素含量為2.27mg/g，多糖含量為118mg/g。而未接種蛹蟲草菌的紅曲中Monacolin K含量為 12. 36mg/g,多糖含量為 47mg/g。
工業(yè)實(shí)用性
本發(fā)明以紅曲中活性物質(zhì)Monacolin K，蟲草素、多糖作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，接種蟲草菌后，在一定的發(fā)酵時(shí)間內(nèi)，對(duì)Monacolin K含量幾乎沒有影響，且獲得的紅曲中，除含有紅曲的主要功效成分Monacolin K外，還含有蟲草的主要功效成分蟲草素和蟲草多糖。且發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，蟲草紅曲產(chǎn)品中所含的蟲草素與市場(chǎng)所售的蛹蟲草子實(shí)體含量相當(dāng)，從而可以強(qiáng)化紅曲之功效。本發(fā)明在不添加任何設(shè)施設(shè)備的情況下，僅利用一條紅曲生產(chǎn)線，就能完成紅曲和蟲草兩條生產(chǎn)線的作用，可極大的節(jié)約生產(chǎn)成本。
盡管發(fā)明人已經(jīng)對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做了較為詳細(xì)的闡述和列舉，應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)于本領(lǐng)域一個(gè)熟練的技術(shù)人員來說，對(duì)上述實(shí)施例作出修改或變通或者采用等同的替代方案是顯然的，都不能脫離本發(fā)明精神的實(shí)質(zhì)，本發(fā)明中出現(xiàn)的術(shù)語用于對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的闡述和理解，并不能構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1.一種蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的制造方法包括固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后，接種紅曲菌菌種進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后作滅活處理，然后接種蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后再經(jīng)干燥處理得到蟲草紅曲，其中，所述的接種紅曲菌菌種進(jìn)行發(fā)酵為接種量2-25%(V/w)，30-35°C下培養(yǎng)2-5天，然后轉(zhuǎn)入20-24°C下培養(yǎng)10-20天；接種蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵為接種量2-20%(v/w)，20-26°C下培養(yǎng)8_15天。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的紅曲菌菌種選自紫色紅曲菌、紅曲紅曲菌、叢毛紅曲菌或紅色紅曲菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的蟲草菌種為蛹蟲草，其拉丁學(xué)名為 Cordyceps militaris。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的固態(tài)培養(yǎng)基主要是以大米、米糠和黃豆粉作為固態(tài)基質(zhì)，加入營(yíng)養(yǎng)液調(diào)整固態(tài)基質(zhì)的含水量為30-40%，所述的營(yíng)養(yǎng)液中包括微生物生長(zhǎng)的各種氮源、碳源、維生素和微量元素。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的紅曲菌菌種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得的紅曲液態(tài)菌種。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的蟲草菌種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得的蟲草液態(tài)菌種。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的二次發(fā)酵結(jié)束后干燥處理的溫度在80°C以下。
8.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草紅曲的制造方法，其特征在于，所述的蟲草紅曲中以干重計(jì)的Monacolin K含量彡％ig/g、蟲草素含量彡lmg/g、多糖含量彡80mg/g。
專利摘要
本發(fā)明屬于藥品或者是健康食品的制造領(lǐng)域，特別是涉及一種蟲草紅曲的制造方法，包括固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后，接種紅曲菌菌種進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后作滅活處理，然后接種蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后再經(jīng)干燥處理得到蟲草紅曲，其中，所述的接種紅曲菌菌種進(jìn)行發(fā)酵為接種量2-25%(v/w)，30-35℃下培養(yǎng)2-5天，然后轉(zhuǎn)入20-24℃下培養(yǎng)10-20天；接種蟲草菌種進(jìn)行二次發(fā)酵為接種量2-20%(v/w)，20-26℃下培養(yǎng)8-15天。本發(fā)明的紅曲產(chǎn)品中MonacolinK含量≥4mg/g、蟲草素含量≥1mg/g、多糖含量≥80mg/g，使紅曲和蟲草二者有機(jī)結(jié)合，在獲得紅曲療效的同時(shí)，低成本的將蟲草活性物質(zhì)補(bǔ)充到體內(nèi)，獲得更好的保健效果。
文檔編號(hào)C12R1/645GKCN102154121SQ201110007780
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2011年1月14日
發(fā)明者徐權(quán), 方俊, 方彩霞, 陳小林, 陳平華 申請(qǐng)人:杭州千島湖星遙實(shí)業(yè)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan