專利名稱:利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用耐熱菌脫除化石燃料中有機硫的方法，具體地說涉及利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法。
化石燃料中的有機硫主要是二苯并噻吩(Dibenzothiophene，DBT)，于是生物脫有機硫的研究也就以DBT為模式化合物進行?，F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多微生物，沿著烴降解途徑(Hydrocarbon degradative pathway)降解DBT，在脫去有機硫的同時，往往也破壞碳-碳鍵，從而導(dǎo)致燃料熱值減少而不可取。同時，也發(fā)現(xiàn)一些微生物如紅球菌屬(Rhodococcus)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、棒桿菌屬(Corynebacterium)和節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)等，能夠沿著硫?qū)Ｒ煌緩?Sulfur-specific pathway)降解DBT，它們不打開環(huán)，從而保留了燃料的熱值，成為近年來研究的熱點。
據(jù)相關(guān)報道戈登氏(Gordona)菌對于中餾分的脫硫率為70％，對于輕的瓦斯油為50％；紅球菌(Rhodococcus sp.)ECRD-1能夠?qū)⒅别s油的中組分的硫脫除30％，同時將另外35％的硫變成氧化的形式。美國的能源生物系統(tǒng)公司(EnergyBiosystems Corp.)使用一株經(jīng)過基因工程改造的菌株紅平紅球菌(Rhodococcuserythropolis)I-19，將一種經(jīng)過加氫處理的中餾分的石油的硫含量從1850ppm降到615ppm，達到67％的脫除率。日本的研究者曾經(jīng)篩選到一株能夠在50℃條件下以DBT為唯一硫源生長的菌株，但是脫除硫的效率比較差，而且在常溫下幾乎沒有活力。上述諸菌及其在脫硫的實際應(yīng)用中，存在如對溫度要求比較嚴格，工藝復(fù)雜，脫硫率比較低等不足。
由于大多石油化合物的處理是在高溫高壓下進行，那么把原料冷卻下來再進行生物過程處理就不太經(jīng)濟；耐熱微生物抗熱能力強、酶系統(tǒng)穩(wěn)定性好；提高溫度有利于脫硫反應(yīng)的進行。因此，圍繞篩選一些較有價值的、可專一性地脫除DBT和其他噻吩類化合物中有機硫的菌株，并進一步應(yīng)用于化石燃料的脫硫中的工作，也是目前本領(lǐng)域急需研究和解決的課題。經(jīng)檢索關(guān)于利用兼性耐熱菌分枝桿菌深度脫除化石燃料中的有機硫的方法的專利及相關(guān)文獻，至今未見報道。
(三)技術(shù)方案本發(fā)明的目的是針對上述不足，提供一種利用兼性耐熱菌分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法。
本發(fā)明的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其步驟順序如下(1)菌種選擇選用分枝桿菌中古的分枝桿菌(Mycobacterium goodii)DSM44492，〖該菌株保藏于德國典型微生物收藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，Braunschweig，Germany)〗，草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)ATCC 354〖該菌株保藏于美國典型微生物收藏中心(12301Park Lawn Drive，Rockville，Md.20852)〗，草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)ATCC11728〖該菌株保藏于美國典型微生物收藏中心(12301 Park Lawn Drive，Rockville，Md.20852)〗，分枝桿菌(Mycobacterium sp.)ATCC 9823〖該菌株保藏于美國典型微生物收藏中心(12301 Park Lawn Drive，Rockville，Md.20852)〗，分枝桿菌(Mycobacterium sp.)ATCC 11761〖該菌株保藏于美國典型微生物收藏中心(12301Park Lawn Drive，Rockville，Md.20852)〗之一；(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有1.5～2.0％的瓊脂糖并加有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，25～50℃培養(yǎng)菌體20～30小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接1～4環(huán)于20～100mL含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用300～500mL三角搖瓶)，25～50℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)20～30小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于300～1000mL含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用1～5L三角搖瓶)，25～50℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)20～30小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于1.8～8L含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用2～10L德國貝朗全自動發(fā)酵罐)，25～50℃條件下，培養(yǎng)20～30小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心5～8分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌2～3次；再將菌體溶于120mL的20～100mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到10～30克干細胞/升，即制得生物催化劑，在-20℃儲存，備用；(7)處理樣品加入12～40mL含硫化石燃料樣品或10～30克固體含硫化石燃料樣品，以3～10∶1的比例，將步驟(6)中的生物催化劑與化石燃料混合(Water-to-oil ratio，WOR)，在25～50℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩24～30小時；(8)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心5～10分鐘，分離步驟(7)中處理的樣品，得到油相；(9)樣品檢測待步驟(8)中的樣品分離完之后，取1～5μL樣品進樣(WK-2D微機綜合動態(tài)微庫侖分析儀，江蘇電分析儀器廠)，測定化石燃料中殘留的硫含量，得出脫除率。
在上述利用分枝桿菌深度深度脫除化石燃料中有機硫的方法中，步驟(1)中所述的菌種選擇古的分枝桿菌(Mycobacterium goodii)DSM 44492。
步驟(2)、(3)、(4)、(5)中所述的菌體培養(yǎng)溫度是37～45℃。
步驟(2)、(3)、(4)、(5)中所述的菌體培養(yǎng)時間是24～28小時。
步驟(2)、(3)、(4)、(5)中所述的二苯并噻吩(DBT)濃度為0.2～0.5 mmol/L。
步驟(6)中所述的生物催化劑是指休止細胞、含有脫硫酶的細胞組分、分離純化脫硫酶系之一或其組合物。
步驟(6)中所述的生物催化劑的菌體濃度是15～25克干細胞/升。
步驟(7)中所述的化石燃料是石油，煤，褐煤，瀝青之一。
步驟(7)中所述的生物催化劑與化石燃料的比例為5～8∶1。
步驟(7)中處理樣品的溫度為37～45℃，樣品振蕩時間為25～28小時。
在上述利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法中，涉及的菌株使用改良A培養(yǎng)基(Modification of A Medium，MAM)，配方如下葡萄糖 10克KH2PO40.5克K2HPO44克NH4Cl 1克1％CaCl22毫升10％MgCl2·6H2O 2毫升1％FeCl3200微升5％NaCl 200微升1％酵母膏 5毫升維生素混合液 200微升金屬離子混合液 5毫升加蒸餾水到1升，115℃條件下滅菌20分鐘。
上述培養(yǎng)基中金屬離子混合液的配方如下ZnCl20.5克FeCl20.5克 加蒸餾水到1升。
MnCl2·4H2O 0.5克 上述培養(yǎng)基中維生素混合Na2MoO4·2H2O 0.1克 物的配方如下CuCl2·2H2O 0.05克Na2WO4·2H2O 0.05克HCl 120mmol/L泛酸鈣(Calcium pantothenate) 400毫克肌醇(Inositol) 200毫克尼克酸/煙酸(Niacin) 400毫克VB6(Pyridoxine hydrochloride) 400毫克對氨基苯甲酸(p-aminobenzoic acid) 200毫克VB12(Cyanocobalamin) 0.5毫克加蒸餾水到1升。
在上述培養(yǎng)基中添加二苯并噻吩(DBT)或者二甲基亞砜，使其濃度為0.5mmol/L，作為培養(yǎng)菌株的硫源。
由于大多石油化合物的處理是在高溫高壓下進行，那么把原料冷卻下來再進行生物過程處理就不太經(jīng)濟。本發(fā)明涉及的分枝桿菌，能夠在25～50℃寬泛的條件下生長、脫硫，達到了較高的脫除率。其脫硫的主要途徑反應(yīng)式如下 其中，DszCDBT單加氧酶；DszADBT-砜單加氧酶；DszBHBPS脫亞磺酸酶經(jīng)過加氫精制處理的柴油，其中大部分含硫化合物如硫醇、硫化物都已經(jīng)通過加氫處理除去，硫含量只有205ppm，剩余的主要是加氫過程難以處理的噻吩型含硫有機化合物(實驗用加氫精制柴油由撫順石油研究院提供)。本發(fā)明采用的古的分枝桿菌能夠在比較寬泛的溫度條件下進行深度脫硫，將加氫精制柴油的硫含量從205ppm降到19.8ppm，脫除率達到了90.3％，能夠在脫硫后直接應(yīng)用，完全達到嚴格的環(huán)保要求。而對比實驗中的下述幾株菌株，對加氫精制柴油的處理結(jié)果顯示脫除率較低，紅球菌lawq為80％，紅平紅球菌IG為69.1％，假單胞菌ZCR為58.5％(結(jié)果見表1)。
表1 細菌處理加氫精制柴油的結(jié)果分析結(jié)果使用細菌處理前 處理后 脫除量 脫除率(％)紅球菌lawqa205#41.0 164.0 80.0紅平紅球菌IGa205 63.3 141.7 69.1古的分枝桿菌b205 19.8 185.2 90.3假單胞菌ZCRa205 85.0 120.0 58.5#單位是ppm硫；a是30℃，b是45℃。
具體實施方式
實施例1利用分枝桿菌深度脫除柴油中有機硫的方法(1)菌種選擇選用分枝桿菌中古的分枝桿菌(Mycobacterium goodii)DSM44492；(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有1.8％的瓊脂糖并加有0.5mmol/L DBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，45℃培養(yǎng)菌體30小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接2環(huán)于50mL含有0.5mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用300mL三角搖瓶)，45℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)24小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于300mL含有0.5mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用1L三角搖瓶)，45℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)24小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于1.8L含有0.5mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用2L德國貝朗全自動發(fā)酵罐)，45℃條件下，培養(yǎng)30小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心5分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌2次；再將菌體溶于120mL的20mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到10克干細胞/升，即制得生物催化劑，在-20℃儲存，備用；(7)處理樣品加入26mL含有205ppm的硫的柴油(由撫順石油研究院提供)，以6∶1的比例，將步驟(6)中的生物催化劑與化石燃料混合(Water-to-oil ratio，WOR)，在43℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩25小時；(8)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，分離步驟(7)中處理的樣品，得到油相；(9)樣品檢測待步驟(8)中的樣品分離完之后，取3μL樣品進樣(WK-2D微機綜合動態(tài)微庫侖分析儀，江蘇電分析儀器廠)，測定柴油中殘留的硫含量，得出脫除率為90.3％。實施例2利用分枝桿菌深度脫除中餾分油中有機硫的方法(1)菌種選擇選用分枝桿菌中草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)ATCC11728(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有1.5％的瓊脂糖并加有0.2mmol/L DBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，50℃培養(yǎng)菌體28小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接1環(huán)于25mL含有0.2mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用300mL三角搖瓶)，50℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)28小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于500mL含有0.2mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用2L三角搖瓶)，50℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)28小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于8L含有0.2mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用10L德國貝朗全自動發(fā)酵罐)，50℃條件下，培養(yǎng)24小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心5分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌2次；再將菌體溶于120mL的35mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到30克干細胞/升；(7)用超聲波破碎上述制得的菌體細胞，功率600瓦，作用5秒，停5秒，破碎40分鐘，然后10,000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，收集上清液制得含有脫硫酶的細胞組分作為生物催化劑；(8)處理樣品加入15mL含有310ppm硫的中餾分油，以9∶1的比例，將步驟(7)中的生物催化劑與化石燃料混合(Water-to-oil ratio，WOR)，在45℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩26小時；(9)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，分離步驟(8)中處理的樣品，得到油相；(10)樣品檢測待步驟(9)中的樣品分離完之后，取3μL樣品進樣(WK-2D微機綜合動態(tài)微庫侖分析儀，江蘇電分析儀器廠)，測定中餾分油中殘留的硫含量，得出脫除率為86.3％。實施例3利用分枝桿菌深度脫除汽油中有機硫的方法(1)菌種選擇選用分枝桿菌中草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)ATCC 354；(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有2.0％的瓊脂糖并加有0.4mmol/L DBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)菌體30小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接4環(huán)于100mL含有0.4mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用500mL三角搖瓶)，37℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)24小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于600mL含有0.4mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用2L三角搖瓶)，37℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)24小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于6L含有0.4mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用10L德國貝朗全自動發(fā)酵罐)，45℃條件下，培養(yǎng)26小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心5分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌3次；再將菌體溶于120mL的26mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到20克干細胞/升，即制得生物催化劑；(7)處理樣品加入40mL含有260ppm的硫的汽油，以3∶1的比例，將步驟(6)中的生物催化劑與化石燃料混合(Water-to-oil ratio，WOR)，在35℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩28小時；(8)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心8分鐘，分離步驟(7)中處理的樣品，得到油相；(9)樣品檢測待步驟(8)中的樣品分離完之后，取2μL樣品進樣(WK-2D微機綜合動態(tài)微庫侖分析儀，江蘇電分析儀器廠)，測定柴油中殘留的硫含量，得出脫除率為83.3％。實施例4利用分枝桿菌深度脫除柴油中有機硫的方法(1)菌種選擇選用分枝桿菌中分枝桿菌(Mycobacterium sp.)ATCC 9823；(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有1.5％的瓊脂糖并加有1.3mmol/L DBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)菌體30小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接1環(huán)于25mL含有1.3mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用300mL三角搖瓶)，27℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)28小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于700mL含有1.3mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用3L三角搖瓶)，25℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)29小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于7L含有1.3mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用10L德國貝朗全自動發(fā)酵罐)，27℃條件下，培養(yǎng)30小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心6分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌3次；再將菌體溶于120mL的80mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到30克干細胞/升，即制得生物催化劑；(7)處理樣品加入15mL含有205ppm硫的柴油(由撫順石油研究院提供)，以8∶1的比例，將步驟(6)中的生物催化劑與化石燃料混合(Water-to-oil ratio，WOR)，在27℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩29小時；(8)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心9分鐘，分離步驟(7)中處理的樣品，得到柴油相；(9)樣品檢測待步驟(8)中的樣品分離完之后，取4μL樣品進樣(WK-2D微機綜合動態(tài)微庫侖分析儀，江蘇電分析儀器廠)，測定柴油中殘留的硫含量，得出脫除率為88.7％。實施例5利用分枝桿菌深度脫除在中餾分油中有機硫的方法(1)菌種選擇選用分枝桿菌中分枝桿菌(Mycobacterium sp.)ATCC 11761；(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有1.5％的瓊脂糖并加有1.8mmol/L DBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)菌體27小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接1環(huán)于25mL含有1.8mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用300mL三角搖瓶)，30℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)27小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于900mL含有1.8mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用4L三角搖瓶)，30℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)27小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于8L含有1.8mmol/LDBT的MAM液體培養(yǎng)基中(使用10L德國貝朗全自動發(fā)酵罐)，30℃條件下，培養(yǎng)28小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心7分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌2次；再將菌體溶于120mL的35mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到30克干細胞/升；(7)用超聲波破碎上述制得的菌體細胞，功率600瓦，作用5秒，停5秒，破碎40分鐘，然后10,000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，收集上清液制得含有脫硫酶的細胞組分作為生物催化劑；(8)處理樣品加入30mL含有310ppm硫的中餾分油，以7∶1的比例，將步驟(7)中的生物催化劑與化石燃料混合(Water-to-oil ratio，WOR)，在40℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩27小時；(9)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心8分鐘，分離步驟(8)中處理的樣品，得到油相；(10)樣品檢測待步驟(9)中的樣品分離完之后，取5μL樣品進樣(WK-2D微機綜合動態(tài)微庫侖分析儀，江蘇電分析儀器廠)，測定中餾分油中殘留的硫含量，得出脫除率為84.5％。
權(quán)利要求
1.一種利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其步驟順序如下(1)菌種選擇選用分枝桿菌中古的分枝桿菌(Mycobacterium goodii)DSM44492，草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)ATCC 354，草分枝桿菌(Mycobacteriumphlei)ATCC 11728，分枝桿菌(Mycobacterium sp.)ATCC 9823，分枝桿菌(Mycobacteriumsp.)ATCC 11761之一；(2)斜面培養(yǎng)將上述菌株接種于含有1.5～2.0％的瓊脂糖并加有0.1～2.0mmol/LDBT的MAM固體斜面培養(yǎng)基上，25～50℃培養(yǎng)菌體20～30小時；(3)一級種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種環(huán)接1～4環(huán)于20～100mL含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中，25～50℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)20～30小時，制得一級種子；(4)擴大培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接一級種子于300～1000mL含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中，25～50℃條件下，在搖床上振蕩培養(yǎng)20～30小時，制得二級種子；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)以5％(體積比)接種量，接二級種子于1.8～8L含有0.1～2.0mmol/L DBT的MAM液體培養(yǎng)基中，25～50℃條件下，培養(yǎng)20～30小時；(6)收集菌體在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心5～8分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌2～3次；再將菌體溶于120mL的20～100mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7.5，使菌體的濃度達到10～30克干細胞/升，即制得生物催化劑，在-20℃儲存，備用；(7)處理樣品加入12～40mL含硫化石燃料樣品或10～30克固體含硫化石燃料樣品，以3～10∶1的比例，將步驟(6)中的生物催化劑與化石燃料混合，在25～50℃條件下，180轉(zhuǎn)/分鐘振蕩24～30小時；(8)分離樣品以10,000轉(zhuǎn)/分離心5～10分鐘，分離步驟(7)中處理的樣品，得到油相；(9)樣品檢測待步驟(8)中的樣品分離完之后，取1～5μL樣品進樣，測定化石燃料中殘留的硫含量，得出脫除率。
2.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的菌種選擇古的分枝桿菌(Mycobacterium goodii)DSM 44492。
3.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(2)、(3)、(4)、(5)中所述的菌體培養(yǎng)溫度是37～45℃。
4.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(2)、(3)、(4)、(5)中所述的菌體培養(yǎng)時間是24～28小時。
5.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(2)、(3)、(4)、(5)中所述的二苯并噻吩(DBT)濃度為0.2～0.5mmol/L。
6.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(6)中所述的生物催化劑是指休止細胞、含有脫硫酶的細胞組分、分離純化脫硫酶系之一或其組合物。
7.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(6)中所述的生物催化劑的菌體濃度是15～25克干細胞/升。
8.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(7)中所述的化石燃料是石油，煤，褐煤，瀝青之一。
9.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(7)中所述的生物催化劑與化石燃料的比例為5～8∶1。
10.如權(quán)利要求
1所述的利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法，其特征在于，步驟(7)中處理樣品的溫度為37～45℃，樣品振蕩時間為25～28小時。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種利用分枝桿菌深度脫除化石燃料中有機硫的方法,該方法包括(1)菌種選擇,(2)斜面培養(yǎng),(3)一級種子培養(yǎng),(4)擴大培養(yǎng),(5)發(fā)酵罐培養(yǎng),(6)收集菌體,(7)處理樣品,(8)分離樣品,(9)樣品檢測等步驟;具有方法簡便,溫度要求寬泛(25－50℃),耗能低,脫硫率高等特點,在大氣污染治理方面具有很大的應(yīng)用前景。
文檔編號C12S1/02GKCN1379084SQ02110375
公開日2002年11月13日 申請日期2002年5月20日
發(fā)明者許平, 李福利, 馬翠卿, 曲音波 申請人:山東大學導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan