專利名稱:優(yōu)化的甘露聚糖酶基因及其重組植物表達(dá)載體和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及優(yōu)化的甘露聚糖酶基因以及含有該優(yōu)化基因的重組植物表達(dá)載體，本發(fā)明進(jìn)一步涉及它們?cè)谥苽浔磉_(dá)甘露聚糖酶轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用，屬于轉(zhuǎn)基因植物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
甘露聚糖是植物半纖維素的主要成份之一，以β -I, 4-D-吡喃甘露糖苷鍵連接而成的線性多糖，分為甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖。在飼料作物(如麥類、豆柏、玉米)中不能被單胃動(dòng)物分解，是目前大量應(yīng)用的玉米/豆柏型飼料中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子。它們能結(jié)合大量的水，使采食動(dòng)物消化道中食糜的體積增大、粘度增加、養(yǎng)分與消化道內(nèi)源酶的作用降低、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率下降。造成動(dòng)物生長(zhǎng)受阻、飼料轉(zhuǎn)化率降低，從而使其代謝受到抑制(Liepman AH, et al. , Plant Physiol 143:1881β-甘露聚糖酶(EC3. 2. 1.78):水解β _1，4_D_吡喃甘露糖為主鏈的內(nèi)切水解酶，作用底物主要是甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、以及半乳葡萄甘露聚糖。主要來(lái)源于低等動(dòng)物、植物、微生物，微生物來(lái)源的β_甘露聚糖酶具有活力高、成本低、來(lái)源穩(wěn)定、提取方便等明顯優(yōu)點(diǎn)，已在實(shí)際生產(chǎn)和基礎(chǔ)研究中得到廣泛應(yīng)用。在飼料行業(yè)上的應(yīng)用，有如下功效降解甘露聚糖為甘露寡糖，降低抗?fàn)I養(yǎng)作用；甘露寡糖具有免疫原性，刺激和增強(qiáng)免疫反應(yīng)；調(diào)控動(dòng)物胃腸道微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)，抑制有害菌黏附能(McCleary BV, Method Enzymol 160:596現(xiàn)在生產(chǎn)上通常需要添加甘露聚糖酶制劑來(lái)改善動(dòng)物對(duì)飼料的利用效率，減輕動(dòng)物黏性糞便造成的環(huán)境污染問題。已經(jīng)利用微生物發(fā)酵進(jìn)行飼用甘露聚糖酶的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，并在飼料工業(yè)中廣泛應(yīng)用。
利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)飼用酶，其優(yōu)勢(shì)在于1)轉(zhuǎn)基因植物尤其是轉(zhuǎn)基因玉米用作飼料原料，可以直接飼喂，而省去目前酶制劑的發(fā)酵生產(chǎn)和添加過程；2)生產(chǎn)規(guī)模不受限制，成本比較低。農(nóng)作物的生產(chǎn)、運(yùn)輸、加工和貯藏等各種基礎(chǔ)設(shè)施及技術(shù)早已具備，轉(zhuǎn)基因植物高水平表達(dá)生產(chǎn)重組蛋白可以通過大規(guī)模種植來(lái)完成；3)目前初步的研究發(fā)現(xiàn)，在植物，尤其是種子中表達(dá)的非淀粉多糖酶具有更好的貯存穩(wěn)定性和抗逆性；4)安全性好，用微生物發(fā)酵生產(chǎn)酶制劑，細(xì)胞培養(yǎng)過程中污染極其普遍，但在植物表達(dá)系統(tǒng)中沒有這種污染。
玉米為“飼料之王”，是中國(guó)最主要的能量飼料糧之一，也是畜禽生產(chǎn)肉、蛋、奶的重要來(lái)源，其用量占配合飼料成份的60-70%玉米籽粒作為動(dòng)物飼料最主要的成分，在作為生物反應(yīng)器這一層面上，與其它飼料作物相比，轉(zhuǎn)基因玉米有更好的經(jīng)濟(jì)效益和應(yīng)用前景。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展和新技術(shù)的綜合應(yīng)用，玉米已成為最重要的糧食、飼料和經(jīng)濟(jì)兼用作物。所以，加強(qiáng)優(yōu)質(zhì)、專用和資源高效飼用型玉米新品種的培育和推廣具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。[0007]來(lái)源于Bispora sp. MEY-1的甘露聚糖酶具有較優(yōu)良的酶學(xué)性質(zhì)(Luo H, etal. , Appl Microbiol Biotechnol 82:453-461，2009)。它是目前分離到的比較好的能適用于飼料產(chǎn)業(yè)中的酸性甘露聚糖酶，但是該酶在玉米等農(nóng)作物中表達(dá)仍然存在表達(dá)效率低、穩(wěn)定性差等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種能夠在玉米等農(nóng)作物種子中高效表達(dá)、穩(wěn)定性好的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因；
本發(fā)明的目的之二是提供含有原始甘露聚糖酶基因或優(yōu)化的甘露聚糖酶基因的重組植物表達(dá)載體；
本發(fā)明的目的之三是提供一種制備表達(dá)甘露聚糖酶轉(zhuǎn)基因植物的方法。
本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的·
為了提高甘露聚糖酶基因在作物(尤其是玉米)中的表達(dá)效率和穩(wěn)定性，本發(fā)明將來(lái)源于 Bispora sp. MEY-1 的原始甘露聚糖酶基因(MAN5A_SST)(SEQ ID NO. 2XEU919724)通過密碼子優(yōu)化以及提高mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性等措施，得到SEQ ID NO. I所示的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因(MAN5AS)。
本發(fā)明的另一目的是提供一種含有原始甘露聚糖酶基因或優(yōu)化的甘露聚糖酶基因的重組植物表達(dá)載體，該重組植物表達(dá)載體包括啟動(dòng)子序列、原始甘露聚糖酶基因或優(yōu)化的甘露聚糖酶基因，信號(hào)肽和蛋白體定位序列以及終止子序列。
其中所述的啟動(dòng)子可以為單子葉植物組成型啟動(dòng)子，如Ubi啟動(dòng)子或CaMV35S啟動(dòng)子，也可以是單子葉植物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，還可以是單子葉植物組織特異性啟動(dòng)子；所述的玉米胚特異表達(dá)的啟動(dòng)子和終止子可分別根據(jù)GenBank登記號(hào)L22344和L22345設(shè)計(jì)引物，分別擴(kuò)增得到來(lái)自于玉米基因組DNA中玉米胚芽蛋白的啟動(dòng)子和終止子片段。所述的玉米胚乳特異表達(dá)的啟動(dòng)子和終止子序列可根據(jù)文獻(xiàn)(Woo, et al. 2001，Plant cell.Oct. 13(10) :2297-317)來(lái)設(shè)計(jì)引物分離得到。優(yōu)選的，本發(fā)明中所述的啟動(dòng)子序列是專利申請(qǐng)公開號(hào)為CN 101153285A (發(fā)明名稱為“一種表達(dá)植酸酶的轉(zhuǎn)基因植物的制備方法”)的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)文件中所公開的SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 5所示的核苷酸序列。
所述的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因的核苷酸序列為SEQ ID NO. I所示；所述的原始甘露聚糖酶基因的核苷酸序列為SEQ ID NO. 2所示。
所述的信號(hào)肽和蛋白體定位序列可以是專利申請(qǐng)公開號(hào)為CN 101153285A (發(fā)明名稱為“一種表達(dá)植酸酶的轉(zhuǎn)基因植物的制備方法”)的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)文件中所公開的SEQ ID N0.9所示的核苷酸序列(引導(dǎo)基因產(chǎn)物分泌和定位的信號(hào)肽序列，控制基因產(chǎn)物的定位，該信號(hào)肽和蛋白體定位序列可以引導(dǎo)植酸酶定位到細(xì)胞的蛋白體中)。
所述的終止子序列可以是專利申請(qǐng)公開號(hào)為CN 101153285A (發(fā)明名稱為“一種表達(dá)植酸酶的轉(zhuǎn)基因植物的制備方法”)的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)文件中所公開的SEQ IDNO 4或SEQ ID NO :6所示的序列。
本發(fā)明的再一目的是提供一種制備表達(dá)甘露聚糖酶的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括以下步驟
(I)構(gòu)建含有SEQ ID NO. I或SEQ ID NO. 2所示基因的重組植物表達(dá)載體；[0020](2)將所構(gòu)建的重組植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到受體農(nóng)作物中，篩選獲得高效表達(dá)甘露聚糖酶的轉(zhuǎn)基因植物。
優(yōu)選的，步驟(I)中所述的重組植物表達(dá)載體的構(gòu)建方法包括將信號(hào)肽和蛋白體定位序列，SEQ ID NO. I或SEQ ID NO. 2所示的甘露聚糖酶基因和終止子序列連接在一起后，可操作的連接到啟動(dòng)子序列之后。
作為一個(gè)具體的實(shí)施方案，可以將SEQ ID NO. I所示的基因可操作的與植物表達(dá)載體pHP20754連接，即得到能在玉米等植物中高效表達(dá)甘露聚糖酶的重組植物表達(dá)載體；其中，所述植物表達(dá)載體PHP20754的構(gòu)建方法已在專利申請(qǐng)公開號(hào)為CN101153285A (發(fā)明名稱為“一種表達(dá)植酸酶的轉(zhuǎn)基因植物的制備方法”)的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)文件中詳細(xì)公開。
其中，所述“可操作的連接”是指兩個(gè)或更多個(gè)元件之間功能性的連接，可操作連接的元件可為鄰接或非鄰接的；所述的植物表達(dá)載體可以由Y端非編碼區(qū)，SEQID No. I 所示的核苷酸和3'非編碼區(qū)組成，其中，所述的5'端非編碼區(qū)可以包括啟動(dòng)子序列、增強(qiáng)子序列或/和翻譯增強(qiáng)序列；所述的啟動(dòng)子可以是組成性啟動(dòng)子、誘導(dǎo)型啟動(dòng)子、組織或器官特異性啟動(dòng)子；所述的3'非編碼區(qū)可以包含終止子序列、mRNA切割序列等。合適的終止子序列可取自根癌農(nóng)桿菌的Ti-質(zhì)粒，例如章魚堿合成酶和胭脂堿合成酶終止區(qū)。
所述的植物重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化受體農(nóng)作物的方法可為植物工程領(lǐng)域常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，如農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、PEG介導(dǎo)法、種質(zhì)系統(tǒng)介導(dǎo)法、電擊穿孔法或微注射法，本發(fā)明優(yōu)選為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或基因槍法，最優(yōu)選為基因槍法。
所述的受體農(nóng)作物優(yōu)選為油菜、玉米、大豆或小麥，更優(yōu)選為玉米。
本發(fā)明所述的植物外植體優(yōu)選為玉米幼胚或幼胚誘導(dǎo)的愈傷組織。
為了便于篩選陽(yáng)性植株同時(shí)為了確保安全性的要求，本發(fā)明同時(shí)選用了植株選擇標(biāo)記基因的表達(dá)載體。將本發(fā)明的重組植物表達(dá)載體與植物選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)化受體作物，選育得到表達(dá)甘露聚糖酶而不含篩選標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因作物。通過共轉(zhuǎn)化策略，將抗性選擇基因和甘露聚糖酶分別構(gòu)建于不同的表達(dá)載體上。在轉(zhuǎn)基因植物的后代選育中，可以利用后代分離得到表達(dá)甘露聚糖酶且不含篩選標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因植物。
優(yōu)選的，本發(fā)明所述的選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體為pHP17042Bar ;所述選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體pHP17042Bar的構(gòu)建方法已在專利申請(qǐng)公開號(hào)為CN 101153285A (發(fā)明名稱為“一種表達(dá)植酸酶的轉(zhuǎn)基因植物的制備方法”)的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)文件中詳細(xì)公開。
本發(fā)明將來(lái)源于Bispora sp. MEY-I的原始甘露聚糖酶基因(SEQ ID NO. 2)通過優(yōu)化密碼子、提高mRNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性等措施，得到SEQ ID NO. I所示的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因(MAN5AS);本發(fā)明進(jìn)一步構(gòu)建了含有所述優(yōu)化的甘露聚糖酶基因的重組植物表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)化到玉米中，通過PCR、Southern blot、Western blot等方法篩選得到陽(yáng)性轉(zhuǎn)甘露聚糖酶基因植株。所得到的轉(zhuǎn)甘露聚糖酶基因玉米植物可以在種子中高效表達(dá)甘露聚糖酶，轉(zhuǎn)基因玉米中甘露聚糖酶酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定表明，優(yōu)化后的甘露聚糖酶基因(MAN5AS)能在轉(zhuǎn)基因玉米中穩(wěn)定表達(dá)及遺傳，優(yōu)化的甘露聚糖酶MAN5AS酶活顯著高于未經(jīng)優(yōu)化的甘露聚糖酶MAN5A-SST。甘露聚糖酶的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)化后的甘露聚糖酶基因MAN5AS在玉米中所表達(dá)的穩(wěn)定性較原始的甘露聚糖酶基因MAN5A-SST在玉米中的穩(wěn)定性有顯著的提聞。[0030]本發(fā)明所涉及到的術(shù)語(yǔ)定義
除非另外定義，否則本文所用的所有技術(shù)及科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所了解相同的含義。雖然在本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試中可使用與本文所述者類似或等效的任何方法、裝置和材料，但現(xiàn)在描述優(yōu)選方法、裝置和材料。
術(shù)語(yǔ)“基因” “核苷酸”或“多核苷酸”意指單股或雙股形式的脫氧核糖核苷酸、脫氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸及其聚合物。除非特定限制，否則所述術(shù)語(yǔ)涵蓋含有天然核苷酸的已知類似物的核酸，所述類似物具有類似于參考核酸的結(jié)合特性并以類似于天然產(chǎn)生的核苷酸的方式進(jìn)行代謝。除非另外特定限制， 否則所述術(shù)語(yǔ)也意指寡核苷酸類似物，其包括PNA (肽核酸)、在反義技術(shù)中所用的DNA類似物(硫代磷酸酯、磷酰胺酸酯等等)。除非另外指定，否則特定核酸序列也隱含地涵蓋其保守修飾的變異體(包括(但不限于)簡(jiǎn)并密碼子取代)和互補(bǔ)序列以及明確指定的序列。特定而言，可通過產(chǎn)生其中一個(gè)或一個(gè)以上所選(或所有)密碼子的第3位經(jīng)混合堿基和/或脫氧肌苷殘基取代的序列來(lái)實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)并密碼子取代(Batzer 等人,Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991) ; Ohtsuka 等人，J. Biol.Chem. 260:2605-2608(1985);和 Cassol 等人，(1992) ; Rossolini 等人，Mol Cell. Probes8:91-98(1994))。
術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”指外源基因在宿主細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。
術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)化”指將外源基因引入到宿主細(xì)胞中的方法。


圖I原始的甘露聚糖酶基因(MAN5A-SST)的有關(guān)GC含量、CFD等信息。
圖2優(yōu)化后的甘露聚糖酶基因(MAN5AS)的有關(guān)GC含量、CFD等信息。
圖3甘露聚糖酶基因密碼子優(yōu)化前后的mRNA的二維結(jié)構(gòu)。
圖4甘露聚糖酶植物重組表達(dá)載體示意圖。
圖5pHP20754_MAN5AS 表達(dá)盒示意圖。
圖6轉(zhuǎn)基因植株(BCl代)PCR檢測(cè)結(jié)果；A)1，Ikb分子量標(biāo)準(zhǔn)；2_10，轉(zhuǎn)基因植株；11，陽(yáng)性對(duì)照；12，陰性對(duì)照。B)內(nèi)參基因act in PCR檢測(cè)結(jié)果。
圖7轉(zhuǎn)基因事件22玉米植株的Southern-blot結(jié)果；I, Ikb分子量標(biāo)準(zhǔn)；
2-4HindIII酶切；7圖8轉(zhuǎn)基因玉米表達(dá)甘露聚糖的Western blot分析；A)SDS_PAGE結(jié)果，1-3轉(zhuǎn)基因植株；2分子量標(biāo)準(zhǔn)，4陰性對(duì)照，5陽(yáng)性對(duì)照；B)對(duì)應(yīng)的Western blot結(jié)果；C)組織特異性Western blot檢驗(yàn)，I :分子量標(biāo)準(zhǔn)，2-3 :植株T042-5及EndoH處理，4-5 :植株T041-20及EndoH處理，6 :陰性對(duì)照，7 :陽(yáng)性對(duì)照，8_10 :分別為陽(yáng)性植株的根莖葉。
圖9轉(zhuǎn)基因玉米表達(dá)甘露聚糖酶的性質(zhì)分析。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。[0045]實(shí)驗(yàn)材料
I、載體合成的基因MAN4AS保存于pUC57MCS上。植物表達(dá)載體為中國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)為CN 101153285A的專利申請(qǐng)公布文件中所公開的植物表達(dá)載體pHP20754 ;選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體也為公開號(hào)為CN 101153285A的專利申請(qǐng)公布文件中所公開的選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體pHP17042Bar。
2、試劑盒膠回收試劑盒購(gòu)自Takara及Promega公司；質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自北京博邁德科技發(fā)展有限公司。
3、化學(xué)試劑甘露聚糖及角豆膠購(gòu)自于Sigma公司。
4、基因槍購(gòu)自于 BIO-RAD 的 SPEX Geno/Grinder 201OHigh-throughput tissuehomogenizer
5、抗血清由中國(guó)科學(xué)院遺傳所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成；堿性磷酸酶標(biāo)記羊抗兔IgG購(gòu)自于北京中原公司；BCIP/NBT試劑盒購(gòu)自于北京莊盟國(guó)際生物基因科技有限公司。
6、本發(fā)明中所涉及到的引物及其序列見表I :
表I
權(quán)利要求
1.優(yōu)化的甘露聚糖酶基因，其特征在于其核苷酸序列為SEQID NO. I所示。
2.含有權(quán)利要求
I所述優(yōu)化的甘露聚糖酶基因的重組表達(dá)載體；優(yōu)選的，所述重組表達(dá)載體是重組植物表達(dá)載體。
3.—種重組植物表達(dá)載體，其特征在于，包括啟動(dòng)子序列、原始的甘露聚糖酶基因或權(quán)利要求
I所述的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因，信號(hào)肽和蛋白體定位序列以及終止子序列。
4.按照權(quán)利要求
3所述的重組植物表達(dá)載體，其特征在于所述的啟動(dòng)子為單子葉植物組成型啟動(dòng)子、單子葉植物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子或單子葉植物組織特異性啟動(dòng)子。
5.一種構(gòu)建權(quán)利要求
3或4所述重組植物表達(dá)載體的方法，包括將信號(hào)肽和蛋白體定位序列，原始的甘露聚糖酶基因或權(quán)利要求
I所述的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因和終止子序列連接在一起后，可 呆作的連接到啟動(dòng)子序列之后。
6.一種制備表達(dá)甘露聚糖酶的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括以下步驟 (1)構(gòu)建含有原始甘露聚糖酶基因或權(quán)利要求
I所述優(yōu)化的甘露聚糖酶基因的重組植物表達(dá)載體； (2)將所構(gòu)建的重組植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到受體農(nóng)作物中，篩選獲得表達(dá)甘露聚糖酶的轉(zhuǎn)基因植物。
7.按照權(quán)利要求
6所述的方法，其特征在于所述的重組植物表達(dá)載體的構(gòu)建方法包括將信號(hào)肽和蛋白體定位序列，原始的甘露聚糖酶基因或權(quán)利要求
I所述的優(yōu)化的甘露聚糖酶基因和終止子序列連接在一起后，可操作的連接到啟動(dòng)子序列之后；所述的啟動(dòng)子為單子葉植物組成型啟動(dòng)子、單子葉植物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子或單子葉植物組織特異性啟動(dòng)子。
8.按照權(quán)利要求
6所述的方法,其特征在于將所構(gòu)建的重組植物表達(dá)載體與植物選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)化受體作物，選育得到表達(dá)甘露聚糖酶而不含篩選標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因作物。
9.按照權(quán)利要求
8所述的方法，其特征在于所述的選擇標(biāo)記基因表達(dá)載體為pHP17042Bar。
10.按照權(quán)利要求
6或8所述的方法，其特征在于所述的受體農(nóng)作物為玉米、油菜、大豆或小麥。
專利摘要
本發(fā)明公開了優(yōu)化的甘露聚糖酶基因及其重組植物表達(dá)載體和應(yīng)用。本發(fā)明將甘露聚糖酶基因通過密碼子優(yōu)化以及提高mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性等措施得到SEQ ID NO.1所示的優(yōu)化甘露聚糖酶基因；本發(fā)明進(jìn)一步構(gòu)建了含有原始甘露聚糖酶基因或優(yōu)化甘露聚糖酶基因的重組植物表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)化到玉米中篩選得到種子中高效表達(dá)甘露聚糖酶的轉(zhuǎn)甘露聚糖酶基因玉米植株；酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定表明，優(yōu)化的甘露聚糖酶基因能在玉米中穩(wěn)定、高效的表達(dá)及遺傳，所表達(dá)的甘露聚糖酶酶活以及穩(wěn)定性顯著高于原始甘露聚糖基因在玉米中所表達(dá)的甘露聚糖酶的酶活及穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)C12N15/56GKCN102888419SQ201210431932
公開日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2012年11月1日
發(fā)明者姚斌, 楊培龍, 孟昆, 張宇宏, 徐曉露, 袁建華, 陳茹梅, 孟慶長(zhǎng), 張偉 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan