本發(fā)明屬于微生物，涉及一種植物內(nèi)生枝孢菌hnu21及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、植物內(nèi)生菌（endophyte）是一定階段或全部階段生活于植物的組織和器官內(nèi)部的真菌或細(xì)菌，普遍存在于高等植物中，木本、草本植物，單子葉植物和雙子葉植物內(nèi)均有內(nèi)生細(xì)菌，其已成為生物防治中有潛力的微生物農(nóng)藥、增產(chǎn)菌或作為潛在的生防載體菌而加以利用。

2、其中，內(nèi)生真菌對(duì)藥用植物的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要作用，它們能夠產(chǎn)生植物生長(zhǎng)所需的調(diào)節(jié)劑類(lèi)物質(zhì)，增強(qiáng)植株對(duì)微量元素的吸收，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育。此外，內(nèi)生真菌還能提高宿主植物的生理活性指標(biāo)和抗逆性，包括對(duì)抗生物脅迫和非生物脅迫。在藥用植物的次生代謝產(chǎn)物和活性物質(zhì)的調(diào)節(jié)方面，內(nèi)生真菌通過(guò)影響和調(diào)節(jié)藥用植物次生代謝產(chǎn)物的合成、含量及累積，直接或間接地影響藥用植物活性物質(zhì)的分布和含量。

3、從植物中提取內(nèi)生真菌對(duì)于理解內(nèi)生真菌與植物之間的相互作用、發(fā)掘新的藥物成分等方面具有重要意義。例如，紫杉醇是一種從紅豆杉屬植物中提取的珍貴抗癌藥物，具有顯著的治療效果；然而，紅豆杉生長(zhǎng)緩慢且為瀕危物種，傳統(tǒng)的提取方法不可持續(xù)，市場(chǎng)需求的增長(zhǎng)使得尋找替代生產(chǎn)方法變得迫切，因此，科學(xué)家們已經(jīng)開(kāi)始探索利用內(nèi)生真菌發(fā)酵生產(chǎn)紫杉醇的方法，以解決藥源不足的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種植物內(nèi)生枝孢菌hnu21及其應(yīng)用。

2、第一方面，本發(fā)明提供了一種從紅豆杉屬植物東北紅豆杉中分離純化得到的內(nèi)生真菌，分類(lèi)學(xué)命名為枝孢菌屬 cladosporium?sp.?hnu21，該菌株保藏編號(hào)為cctcc?no：m2024232，保藏日期2024年1月26日，保藏單位：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（cctcc），保藏地址：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)；其its序列如seq?id?no.1所示。

3、第二方面，本發(fā)明提供上述植物內(nèi)生枝孢菌hnu21的細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞代謝產(chǎn)物、細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞裂解產(chǎn)物。

4、第三方面，本發(fā)明提供一種用于提高東北紅豆杉葉片的紫杉醇含量的組合物，其包含選自下組的成分：上述植物內(nèi)生枝孢菌hnu21；或上述細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞代謝產(chǎn)物、細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞裂解產(chǎn)物。

5、第四方面，本發(fā)明提供了一種上述植物內(nèi)生枝孢菌hnu21的應(yīng)用，可以提高東北紅豆杉葉片的紫杉醇含量以及紫杉醇合成通路關(guān)鍵基因的表達(dá)量。

6、進(jìn)一步地，所述應(yīng)用具體為：將植物內(nèi)生枝孢菌hnu21的孢子液噴灑于東北紅豆杉苗，從而實(shí)現(xiàn)提高東北紅豆杉針葉中紫杉醇的含量；

7、所述孢子液由以下步驟制得：將植物內(nèi)生枝孢菌hnu21接種到pda固體培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖肉湯培養(yǎng)基，potato?dextrose?broth）中，在溫度25-30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5~7天，待孢子生成，減壓過(guò)濾獲得含孢子溶液，即為孢子液。

8、本發(fā)明的有益效果在于：

9、本發(fā)明提供了一種植物內(nèi)生枝孢菌hnu21，所述植物為東北紅豆杉，該菌能夠用于促進(jìn)東北紅豆杉中紫杉醇成分的生物合成及合成相關(guān)基因表達(dá)，提高提高紫杉醇含量，進(jìn)而為藥源不足的問(wèn)題提供一種有效的解決方式，具有較高的應(yīng)用價(jià)值；同時(shí)，本發(fā)明還提供了植物內(nèi)生枝孢菌hnu21的細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞代謝產(chǎn)物、細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞裂解產(chǎn)物，以及制備包含植物內(nèi)生枝孢菌hnu21孢子液的方法，通過(guò)將過(guò)濾的孢子液噴灑東北紅豆杉苗小枝，可有效促進(jìn)紫杉醇合成。相較于現(xiàn)有的真菌誘導(dǎo)子，本發(fā)明所述內(nèi)生枝孢菌hnu21孢子液對(duì)紫杉醇含量的提高達(dá)到1.5倍以上，具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種植物內(nèi)生枝孢菌hnu21，其特征在于，其分類(lèi)學(xué)命名為枝孢菌（cladosporium?sp.），菌株名為hnu21，保藏編號(hào)為cctcc?no：m2024232，保藏日期2024年1月26日，保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)。

2.一種用于提高東北紅豆杉葉片的紫杉醇含量的組合物，其特征在于，包含：權(quán)利要求1所述的植物內(nèi)生枝孢菌hnu21，或其細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞代謝產(chǎn)物、細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞裂解產(chǎn)物。

3.如權(quán)利要求1所述的植物內(nèi)生枝孢菌hnu21在提高東北紅豆杉葉片的紫杉醇含量中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，將植物內(nèi)生枝孢菌hnu21的孢子液噴灑于東北紅豆杉苗；

5.如權(quán)利要求1所述的植物內(nèi)生枝孢菌hnu21在提高紫杉醇合成通路關(guān)鍵基因的表達(dá)量中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，將植物內(nèi)生枝孢菌hnu21的孢子液噴灑于東北紅豆杉苗；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)一種植物內(nèi)生枝孢菌HNU21及其應(yīng)用，所述植物為東北紅豆杉；該菌的分類(lèi)學(xué)命名為枝孢菌屬Cladosporium?sp.?HNU21，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M2024232，保藏日期2024年1月26日，保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)。植物內(nèi)生枝孢菌HNU21能夠用于促進(jìn)東北紅豆杉中紫杉醇成分的生物合成及合成相關(guān)基因表達(dá)，提高提高紫杉醇含量，具有較高的應(yīng)用價(jià)值；同時(shí)，本發(fā)明還提供了制備包含植物內(nèi)生枝孢菌HNU21孢子液的方法，通過(guò)將過(guò)濾的孢子液噴灑東北紅豆杉苗小枝，可有效促進(jìn)紫杉醇合成。

技術(shù)研發(fā)人員：姜艷,馬慧杰,侯凱琳,展曉日,沈晨佳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：杭州師范大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19