本發(fā)明涉及海洋微生物，尤其涉及一株清酒廣布乳桿菌及其改善老化血管和靜脈血栓的產(chǎn)品應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、許氏平鲉( sebastesschlegelii)廣泛分布于中國渤海、黃海和東海近海巖礁地帶，日本、朝鮮沿岸也均有分布，為冷水性近海底層肉食性魚類。魚腸道微生物群中，細(xì)菌(需氧、兼性厭氧和專性厭氧)是主要的定殖微生物，腸道微生物在魚類生長過程中起著非常重要的作用，其平衡狀態(tài)關(guān)系到魚類機(jī)體的健康。魚類腸道內(nèi)種類繁多的微生物在抑制病原微生物方面起到了非常重要的作用，可保護(hù)宿主魚類免受病原微生物的侵害。

2、血栓是指人體內(nèi)血液成分在血管或心臟內(nèi)形成的凝塊，血栓性疾病包括心肌梗塞、腦血栓、肺動脈栓塞、肢體動脈栓塞、肢體靜脈血栓、播散性血管內(nèi)凝血等，嚴(yán)重危害患者的身心健康。凝血因子與纖維蛋白原作用后，形成的網(wǎng)狀纖維蛋白可以纏繞血細(xì)胞和血小板凝塊，進(jìn)而形成血栓?？鼓到y(tǒng)中的凝血酶調(diào)制蛋白（tm）、纖溶系統(tǒng)中的組織形纖溶酶原激活物（tpa）是發(fā)揮抑制和清除血栓功能的重要蛋白，此外一氧化氮（no）作為信號分子，可以抑制血小板的活化和聚集，并能通過對抗自由基減少對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷?？鼓到y(tǒng)可清除不必要的血栓，使血管變流暢，纖溶過弱導(dǎo)致血栓生成或纖維蛋白沉淀過多；纖溶過多，可使血液凝血因子消耗過多。纖溶系統(tǒng)對于限制血凝范圍擴(kuò)展和保持血液流暢具有重大意義。

3、當(dāng)血管受到損傷時炎性細(xì)胞會分泌炎性細(xì)胞因子（如 il-6、 tnf-α），會進(jìn)一步導(dǎo)致血管基質(zhì)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞加速凋亡，這也說明炎性細(xì)胞因子會對血管壁造成繼發(fā)性損傷。

4、b淋巴細(xì)胞瘤-2（ b-cell?lymphoma-2， bcl-2）基因家族及其相關(guān)蛋白是最早研究與凋亡有關(guān)的基因，也是目前最受重視的調(diào)控細(xì)胞調(diào)亡的基因家族。 bcl-2基因是通過調(diào)控線粒體的通透性等機(jī)制來抑制多種因素導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，從而延長細(xì)胞活力。 bcl-2是抗凋亡蛋白亞家族中的重要一員，具有抑制細(xì)胞凋亡/促細(xì)胞生存的作用，一般位于線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上， bcl-2可以阻滯凋亡程序。

5、海洋微生物已經(jīng)發(fā)展出復(fù)雜的分子適應(yīng)能力來應(yīng)對這些惡劣的條件，影響它們的初級和次級代謝途徑。這導(dǎo)致了獨特的生理特征和代謝過程的進(jìn)化，海洋微生物比陸地微生物更有可能合成結(jié)構(gòu)獨特的酶和次生代謝物。挖掘海洋魚類腸道微生物的應(yīng)用，在拓展海洋產(chǎn)業(yè)價值方面具有重要的現(xiàn)實意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明提供了一株清酒廣布乳桿菌及其改善老化血管和靜脈血栓的產(chǎn)品應(yīng)用，所述清酒廣布乳桿菌?nhnk-615寄存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctcc?no:?m?20241428。實驗表明，nhnk-615具有溶解血栓、促進(jìn)尿激酶產(chǎn)生、增加靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝血因子、促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生長、促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷修復(fù)、減少靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥和凋亡，菌體生物膜增加對黏蛋白及腸上皮細(xì)胞定植的功能，可用于制備改善老化血管和靜脈血栓的產(chǎn)品。

2、為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人提供以下技術(shù)方案：

3、發(fā)明人首先提供了一株清酒廣布乳桿菌?nhnk-615（ latilactobacillus?sakei?nhnk-615），其保藏編號為cctcc?no:?m?20241428，于2024年07月01日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心。

4、上述清酒廣布乳桿菌nhnk-615來源于許氏平鲉腸道，經(jīng)16s?rdna鑒定為清酒廣布乳桿菌（ latilactobacillus?sakei）。該菌株革蘭氏陽性，顯微鏡下呈短桿狀；在mrs平板上生長，可形成表面光滑不透明的圓形菌落，乳白色，邊緣整齊；在mrs液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長，長時間靜置菌體可呈現(xiàn)白色沉淀，最適生長溫度為37℃。

5、本發(fā)明還提供了上述清酒廣布乳桿菌nhnk-615在改善老化血管和靜脈血栓的產(chǎn)品應(yīng)用，具體是可以用于制備改善老化血管和靜脈血栓的產(chǎn)品。

6、所述改善老化血管和靜脈血栓包括溶解血栓、促進(jìn)尿激酶產(chǎn)生、增加靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝血因子、促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生長、促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷修復(fù)、減少靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥和凋亡、菌體生物膜增加對黏蛋白及腸上皮細(xì)胞定植的功能中的至少一種，其應(yīng)用機(jī)理為如下任意一項或多項：

7、（a1）溶解血栓；

8、（a2）促進(jìn)尿激酶產(chǎn)生：上調(diào)人腎小管上皮細(xì)胞hkc-1尿激酶相關(guān)基因 upa的表達(dá)；

9、（a3）增加靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝血因子：上調(diào)人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞ea.hy926抗凝血因子基因 enos、 tm和 tpa表達(dá)中的至少一種；

10、（b1）促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生長；

11、（b2）促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷修復(fù)，促進(jìn)氧化損傷人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞ea.hy926產(chǎn)生超氧化物歧化酶sod和谷胱甘肽gsh中的至少一種；

12、（b3）減少靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥和凋亡：下調(diào)氧化損傷人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞ea.hy926炎癥因子基因 tnf-α和 il-6的表達(dá)中的至少一種，上調(diào)抗凋亡因子基因 bcl-2的表達(dá)；

13、（c1）菌體生物膜增加對黏膜黏蛋白及腸上皮細(xì)胞的定植能力。

14、體外實驗表明，所述溶解血栓為具有纖溶酶活性，溶解由纖維蛋白原和凝血酶形成的血栓，能夠在人工血栓平板上形成透明圈，透明圈直徑7.00毫米-7.21毫米。

15、體外實驗表明，清酒廣布乳桿菌nhnk-615具有上調(diào)人腎小管上皮細(xì)胞hkc-1的尿激酶型血漿纖溶酶原激活因子基因 upa表達(dá)的作用,?相對表達(dá)倍數(shù)1.19倍-1.32倍。

16、體外實驗表明，清酒廣布乳桿菌nhnk-615具有上調(diào)人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞ea.hy926內(nèi)皮型一氧化氮合成酶基因 enos、血栓調(diào)節(jié)素基因 tm、組織型纖溶酶原激活劑基因 tpa表達(dá)的作用,?相對表達(dá)倍數(shù)1.26倍-2.31倍。

17、體外實驗表明，清酒廣布乳桿菌nhnk-615具有促進(jìn)氧化損傷人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞ea.hy926修復(fù)的作用，促進(jìn)氧化損傷的ea.hy926細(xì)胞產(chǎn)生超氧化物歧化酶sod和谷胱甘肽gsh，增長率13.86%-22.00%。

18、體外實驗表明，清酒廣布乳桿菌nhnk-615具有下調(diào)氧化損傷人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞ea.hy926炎癥因子腫瘤壞死因子基因 tnf-α、白介素-6基因 il-6表達(dá)的作用,?相對表達(dá)倍數(shù)0.80倍-0.89倍。上調(diào)抗凋亡因子b淋巴細(xì)胞瘤-2基因 bcl-2表達(dá)的作用,?相對表達(dá)倍數(shù)1.22倍-2.57倍。

19、體外實驗表明，清酒廣布乳桿菌nhnk-615菌體產(chǎn)生生物膜后對caco-2細(xì)胞的吸附能力增加，說明其可以增加對黏膜黏蛋白及腸上皮細(xì)胞的定植能力。

20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)的有益效果如下：

21、清酒廣布乳桿菌nhnk-615具有溶解血栓、促進(jìn)尿激酶產(chǎn)生、增加靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝血因子、促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生長、促進(jìn)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷修復(fù)、減少靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥和凋亡的功能，菌體生物膜增加對黏蛋白及腸上皮細(xì)胞定植的功能，可用于制備改善老化血管和靜脈血栓的產(chǎn)品。

22、發(fā)明人將清酒廣布乳桿菌nhnk-615進(jìn)行了生物保藏，保藏信息如下：

23、保藏時間：2024年7月1日

24、保藏單位名稱：中國典型培養(yǎng)物保藏中心

25、保藏編號：cctcc?no:?m?20241428

26、保藏單位地址：中國，武漢，武漢大學(xué)

27、分類命名:?清酒廣布乳桿菌?nhnk-615（ latilactobacillus?sakei?nhnk-615）。