本發(fā)明涉及生物，尤其涉及以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法。

背景技術(shù)：

1、人參（拉丁學(xué)名：panax?ginseng?）是五加科、人參屬多年生草本植物。人參的傳統(tǒng)藥用部位為根部，作為人參種植的副產(chǎn)物，人參葉和人參花大部分被遺棄，只有少部分以代用茶或化妝品原材料的形式被加以利用。然而，有研究發(fā)現(xiàn)，人參葉、花所含成分與人參相似，且部分人參皂苷單體和10種主要人參皂苷總量均遠(yuǎn)大于人參根部。但受限于傳統(tǒng)加工技術(shù)的局限，人參葉、花的利用率始終不高，大量寶貴的資源被浪費(fèi)。

2、樺褐孔菌（inonotus?obliquus）又稱白樺茸，是一種生長于白樺樹上的藥用真菌。近年來，人們從藥理作用和臨床應(yīng)用對白樺茸做大量研究，樺褐孔菌富含三萜類物質(zhì)，這類化合物以其強(qiáng)大的抗氧化、抗腫瘤、抗菌及調(diào)節(jié)血糖血脂等生物活性而聞名。在現(xiàn)代生物技術(shù)和健康產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的背景下，樺褐孔菌及其發(fā)酵產(chǎn)物的研究與應(yīng)用正逐步深入，展現(xiàn)出廣闊的市場前景。

3、隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，通過生物深層發(fā)酵技術(shù)獲得食用菌的菌絲體成為研究的熱點(diǎn)，但對樺褐孔菌的菌絲體發(fā)酵中采用的基質(zhì)仍僅以碳源和氮源為主。所得產(chǎn)品也僅僅具有樺褐孔菌自身的代謝產(chǎn)物，且如果不謹(jǐn)慎控制發(fā)酵條件，則三萜類物質(zhì)的含量不及樺褐孔菌子實(shí)體。此外，發(fā)酵產(chǎn)物的外觀和口感欠佳，導(dǎo)致深層發(fā)酵獲得的發(fā)酵液在市場上認(rèn)可度較差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法。

2、本發(fā)明提供了以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法，其包括如下步驟：

3、步驟1：將樺褐孔菌菌種活化后，制成液體菌種，

4、步驟2：將液體菌種接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，25~30℃，搖床轉(zhuǎn)速100~200?rpm，發(fā)酵8~12天，制得發(fā)酵液。

5、基于人參葉的加入，本發(fā)明對樺褐孔菌的培養(yǎng)基質(zhì)進(jìn)行了詳細(xì)的優(yōu)化，使得碳源和氮源以及無機(jī)鹽的使用能夠最好的配合人參葉從而獲得次生代謝產(chǎn)物更豐富的發(fā)酵液。并且，通過優(yōu)化培養(yǎng)基的培養(yǎng)，也使人參中的皂苷更多的轉(zhuǎn)化為稀有皂苷。

6、本發(fā)明中，所述活化的培養(yǎng)基為pda固體培養(yǎng)基，

7、本發(fā)明中，所述液體菌種的培養(yǎng)基由葡萄糖30.0g/l、蛋白胨3.0g/l、酵母粉3.0g/l、磷酸二氫鉀3.0g/l、硫酸鎂0.5g/l和水制成；

8、本發(fā)明中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由10~30g/l人參葉、20~30g/l葡萄糖、10~25g/l麩皮和3.0g/l磷酸二氫鉀和0.5g/l硫酸鎂和水制成。

9、本發(fā)明中，活化的次數(shù)為2次，兩次活化后接種于液體種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)接至液體種子培養(yǎng)基二次培養(yǎng)，獲得液體菌種。

10、本發(fā)明對發(fā)酵的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，獲得的條件更適合樺褐孔菌的生長以及次生代謝產(chǎn)物的積累。作為優(yōu)選，所述發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵的條件為28℃，搖床轉(zhuǎn)速150?rpm，發(fā)酵10天。

11、本發(fā)明實(shí)施例中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由人參葉20g/l、葡萄糖25g/l、麩皮20g/l、磷酸二氫鉀3.0g/l、硫酸鎂0.5g/l和水制成。

12、具體實(shí)施例中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備包括：將新鮮人參葉破碎成泥后，加入水、葡萄糖、麩皮、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，121℃滅菌25?min后冷卻至室溫，經(jīng)過0.45μm、0.22μm兩級過濾。

13、本發(fā)明實(shí)施例中，所述方法還包括對所述發(fā)酵液超聲破碎的步驟，所述超聲破碎的參數(shù)包括：工作5s，間歇3s，功率400w，頻率25khz，共超聲12?min。

14、本發(fā)明實(shí)施例中，所述超聲破碎后，還包括過濾滅菌的步驟。

15、本發(fā)明提供的方法適用于各種樺褐孔菌的發(fā)酵培養(yǎng)。在具體實(shí)施例中，所述樺褐孔菌為樺褐孔菌bncc117822。

16、本發(fā)明還提供了如前所述方法制備獲得的發(fā)酵液。該發(fā)酵液中同時含有大量的人參皂苷和三萜類物質(zhì)，特別是含有稀有皂苷，具有良好的應(yīng)用前景。可以通過對如前所述的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的提取和/或調(diào)配等，進(jìn)而獲得多種多樣的產(chǎn)品。

17、進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了樺褐孔菌的發(fā)酵培養(yǎng)液，其由10~30g/l人參葉、20~30g/l葡萄糖、10~25g/l麩皮和3.0g/l磷酸二氫鉀和0.5g/l硫酸鎂和水制成。

18、更進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了樺褐孔菌的培養(yǎng)基組合，其包括pda固體培養(yǎng)基、液體種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基；

19、所述液體菌種的培養(yǎng)基由葡萄糖30.0g/l、蛋白胨3.0g/l、酵母粉3.0g/l、磷酸二氫鉀3.0g/l、硫酸鎂0.5g/l和水制成；

20、所述發(fā)酵培養(yǎng)基由10~30g/l人參葉、20~30g/l葡萄糖、10~25?g/l麩皮和3.0?g/l磷酸二氫鉀和0.5g/l硫酸鎂和水制成。

21、本發(fā)明提供了以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法，通過的培養(yǎng)基質(zhì)和發(fā)酵參數(shù)的優(yōu)化，不同于單獨(dú)發(fā)酵樺褐孔菌后棄去液體而取菌絲體的方案，本發(fā)明發(fā)酵后的全部發(fā)酵產(chǎn)物都具有良好的利用價(jià)值。并且，獲得的發(fā)酵產(chǎn)物中，不僅含有大量的三萜類物質(zhì)，總皂苷的含量也非常豐富，還含有鮮人參葉中不含有的稀有皂苷。

技術(shù)特征：

1.以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵的條件為28℃，搖床轉(zhuǎn)速150rpm，發(fā)酵10天。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由人參葉20g/l、葡萄糖25g/l、麩皮20g/l、磷酸二氫鉀3.0g/l、硫酸鎂0.5g/l和水制成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備包括：將新鮮人參葉破碎成泥后，加入水、葡萄糖、麩皮、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，121℃滅菌25?min后冷卻至室溫，經(jīng)過0.45μm、0.22μm兩級過濾。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括對所述發(fā)酵液超聲破碎的步驟，所述超聲破碎的參數(shù)包括：工作5s，間歇3s，功率400w，頻率25khz，共超聲12?min。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述超聲破碎后，還包括過濾滅菌的步驟。

7.根據(jù)權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述樺褐孔菌為樺褐孔菌bncc117822。

8.權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述方法制備獲得的發(fā)酵液。

9.樺褐孔菌的發(fā)酵培養(yǎng)液，其特征在于，由10~30g/l人參葉、20~30g/l葡萄糖、10~25g/l麩皮和3.0g/l磷酸二氫鉀和0.5g/l硫酸鎂和水制成。

10.樺褐孔菌的培養(yǎng)基組合，其特征在于，包括pda固體培養(yǎng)基、液體種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法。本發(fā)明提供了以人參葉為原料制備樺褐孔菌發(fā)酵液的方法，通過的培養(yǎng)基質(zhì)和發(fā)酵參數(shù)的優(yōu)化，不同于單獨(dú)發(fā)酵樺褐孔菌后棄去液體而取菌絲體的方案，本發(fā)明發(fā)酵后的全部發(fā)酵液都具有良好的利用價(jià)值。并且，獲得的發(fā)酵產(chǎn)物中，不僅含有大量的三萜類物質(zhì)，總皂苷的含量也非常豐富，還含有鮮人參葉中不含有的稀有皂苷。

技術(shù)研發(fā)人員：高陸,曲佳樂,鄒慧,付立娟
受保護(hù)的技術(shù)使用者：吉林省現(xiàn)代中藥工程研究中心有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19