本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種抑制yod1基因表達(dá)的sirna及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、食物過敏主要是ige介導(dǎo)肥大細(xì)胞發(fā)生脫顆粒而引起一系列急性反應(yīng)，患者會(huì)腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)a(chǎn)生過敏性休克，有一定的致命風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)生食物過敏的人數(shù)呈逐年上升趨勢，食物過敏已經(jīng)成為世界衛(wèi)生組織(who)和聯(lián)合國糧農(nóng)組織(fao)關(guān)注的重大衛(wèi)生和食品安全問題，這直接給人們造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的同時(shí)嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。

2、肥大細(xì)胞在過敏性反應(yīng)中起重要作用。rbl-2h3細(xì)胞是過敏性反應(yīng)體外實(shí)驗(yàn)研究的肥大細(xì)胞替代模型，常用于探究過敏反應(yīng)中肥大細(xì)胞的脫顆粒效應(yīng)和激活機(jī)制。rbl-2h3細(xì)胞表面表達(dá)ige高親和力受體，可用于過敏原鑒定、診斷和潛在免疫治療分析。當(dāng)機(jī)體第一次接觸過敏原時(shí)，rbl-2h3細(xì)胞表面的fcεrⅰ受體結(jié)合ige而使機(jī)體致敏，當(dāng)過敏原再次進(jìn)入機(jī)體，fcεrⅰ受體與ige-抗原復(fù)合物交聯(lián)后，誘導(dǎo)rbl-2h3細(xì)胞活化脫顆粒，釋放β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase，β-hex)、組胺(histamine)和細(xì)胞趨化因子等炎性介質(zhì)進(jìn)而引起過敏癥狀。

3、yod1去泛素化酶(yod1?deubiquitinase)是一種參與蛋白降解的關(guān)鍵調(diào)控物質(zhì)，具有去除蛋白質(zhì)上泛素標(biāo)記的作用。yod1在細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要的作用。研究表明，抑制去泛素化酶yod1可降解致癌物質(zhì)pml/rarα并根除急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞；yod1能與p97結(jié)合促進(jìn)蛋白質(zhì)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中脫位，確保蛋白質(zhì)能夠有效地轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞的其他部位或細(xì)胞外，維持細(xì)胞的正常功能?，F(xiàn)有研究證明姜黃素具有抑制肥大細(xì)胞釋放脫顆粒的作用，本實(shí)驗(yàn)室前期也驗(yàn)證出yod1受姜黃素調(diào)控，由此推斷yod1可能參與過敏反應(yīng)的調(diào)控。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于針對上述問題，提供一種抑制yod1基因表達(dá)的sirna及其應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種抑制yod1基因表達(dá)的sirna，所述sirna為siyod1，其序列為：

4、正義鏈：5′-ccauccagucaggugacau-3′，反義鏈：5′-augucaccugacuggaugg-3′；

5、所述yod1基因的genebank號為：363982；

6、所述sirna包含懸掛堿基tt，所述懸掛堿基位于siyod1正義鏈和反義鏈的3′末端。

7、上述一種sirna在制備抑制yod1基因表達(dá)的藥物中的應(yīng)用，所述yod1基因的genebank號為：363982。

8、上述一種sirna在制備抗過敏藥物中的應(yīng)用。

9、一種抗過敏藥物，其包括上述的sirna；

10、所述抗過敏藥物為抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的藥物；

11、所述抑制肥大細(xì)胞脫顆粒為抑制肥大細(xì)胞脫顆粒標(biāo)志物的釋放；

12、所述脫顆粒標(biāo)志物為β-氨基己糖苷酶、組胺中的任意一種或多種。

13、一種評估上述sirna的抗過敏能力的方法，包括以下步驟：

14、1)將rbl-2h3細(xì)胞于37℃、5％co2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分為以下3個(gè)處理組：①空白對照組：rbl-2h3細(xì)胞正常培養(yǎng)，不做其他任何處理；②陰性對照組：待rbl-2h3細(xì)胞長至70％時(shí)，加入終濃度40nm的sinc轉(zhuǎn)染培養(yǎng)30h；轉(zhuǎn)染培養(yǎng)完成后，加入終濃度200ng/ml的dnp-ige敏化細(xì)胞18h；敏化完成后，加入終濃度500ng/ml的dnp-bsa激發(fā)細(xì)胞0.5～2h；③siyod1組：待rbl-2h3細(xì)胞長至70％時(shí)，加入終濃度40nm的siyod1轉(zhuǎn)染培養(yǎng)30h；轉(zhuǎn)染培養(yǎng)完成后，加入終濃度200ng/ml的dnp-ige敏化細(xì)胞18h；敏化完成后，加入終濃度500ng/ml的dnp-bsa激發(fā)細(xì)胞0.5～2h；

15、2)檢測rbl-2h3細(xì)胞脫顆粒標(biāo)志物釋放量，將空白對照組的脫顆粒標(biāo)志物釋放量設(shè)為1.0，陰性對照組的脫顆粒標(biāo)志物釋放量記為a，siyod1組的脫顆粒標(biāo)志物釋放量記為a，按如下公式計(jì)算siyod1的抗過敏能力：抗過敏能力r＝|a-a|/1.0×100％；

16、其中，sinc序列為：

17、正義鏈：5′-ccauccagucaggugacau-3′，反義鏈：5′-augucaccugacuggaugg-3′；

18、所述sinc包含懸掛堿基tt，所述懸掛堿基位于sinc正義鏈和反義鏈的3′末端。

19、本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：

20、本發(fā)明首次提出了yod1基因的表達(dá)受過敏影響。在dnp-ige/bsa誘導(dǎo)的rbl-2h3細(xì)胞過敏模型中，轉(zhuǎn)染siyod1可通過敲低yod1基因的表達(dá)，進(jìn)而降低細(xì)胞中β-hex、組胺的釋放量。因此，siyod1能夠應(yīng)用于制備抗過敏藥物。

技術(shù)特征：

1.一種抑制yod1基因表達(dá)的sirna，其特征在于：所述sirna為siyod1，其序列為：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sirna，其特征在于：所述sirna包含懸掛堿基tt，所述懸掛堿基位于siyod1正義鏈和反義鏈的3′末端。

3.權(quán)利要求1所述的sirna在制備抑制yod1基因表達(dá)的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述yod1基因的genebank號為：363982。

4.權(quán)利要求1所述的sirna在制備抗過敏藥物中的應(yīng)用。

5.一種抗過敏藥物，其特征在于：包括權(quán)利要求1所述的sirna。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：所述抗過敏藥物為抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的藥物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于：所述抑制肥大細(xì)胞脫顆粒為抑制肥大細(xì)胞脫顆粒標(biāo)志物的釋放。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述脫顆粒標(biāo)志物為β-氨基己糖苷酶、組胺中的任意一種或多種。

9.一種評估權(quán)利要求1所述的sirna的抗過敏能力的方法，其特征在于：包括以下步驟：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：所述sinc包含懸掛堿基tt，所述懸掛堿基位于sinc正義鏈和反義鏈的3′末端。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種抑制YOD1基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述抑制YOD1基因的siRNA，可通過有效地特異性敲低肥大細(xì)胞中YOD1基因的表達(dá)水平，并顯著抑制肥大細(xì)胞脫顆粒，抑制過敏反應(yīng)。因此，本發(fā)明所述siRNA可作為治療過敏反應(yīng)的靶向藥物，為過敏反應(yīng)診斷、治療提供新的思路和方案。

技術(shù)研發(fā)人員：李桂玲,邵鵬,王夢凡,黃世英,劉靜雯,何國鼎
受保護(hù)的技術(shù)使用者：集美大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19