本發(fā)明涉及生物，特別是涉及nectin-4結(jié)合肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、nectin-4(nectin-like?molecule?4)是一種免疫球蛋白超家族的細(xì)胞黏附分子。作為細(xì)胞間黏附分子，nectin-4在細(xì)胞黏附、信號傳導(dǎo)和細(xì)胞遷移等生物學(xué)過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。nectin-4是一個(gè)跨膜蛋白，由胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域三部分組成。胞外結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)igv型和兩個(gè)igc型免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，負(fù)責(zé)介導(dǎo)細(xì)胞間的同源或異源結(jié)合。跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)ectin-4錨定在細(xì)胞膜上，胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域則與細(xì)胞骨架蛋白和信號分子相互作用，調(diào)控細(xì)胞功能。nectin-4通過其胞外結(jié)構(gòu)域與其他nectin家族成員(如nectin-1和nectin-3)形成同源或異源連接，介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附，形成穩(wěn)定的細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)。這一過程不僅涉及細(xì)胞的機(jī)械性連接，還激活了多種下游信號通路，如與afadin的相互作用。nectin-4在多種組織中表達(dá)，特別是在上皮細(xì)胞和癌細(xì)胞中表達(dá)較高，使其成為癌癥研究和治療的重要靶點(diǎn)。因此，通過在胞外結(jié)合nectin-4并阻斷信號通路，或?qū)⑵渑c毒素連接形成pdc藥物，有望治療nectin-4信號通路介導(dǎo)的相關(guān)疾病。

2、針對nectin-4的疾病治療策略主要包括兩大核心邏輯。首先是阻斷nectin-4信號通路的激活。nectin-4作為一種細(xì)胞黏附分子，其受體的胞外部分在細(xì)胞間信號傳導(dǎo)中發(fā)揮著重要作用。具體來說，nectin-4通過激活一系列下游信號通路，如pi3k-akt-enos通路，影響細(xì)胞的生長、遷移和存活。因此，通過干預(yù)這些信號通路的激活，可以有效抑制nectin-4介導(dǎo)的異常細(xì)胞行為，從而達(dá)到治療目的。其次，利用多肽藥物偶聯(lián)物(pdc)是一種前景廣闊的治療方法。pdc通過將抗腫瘤藥物與特異性結(jié)合的多肽偶聯(lián)起來，實(shí)現(xiàn)藥物的精準(zhǔn)遞送。多肽的特異性結(jié)合能力使得它們能夠精準(zhǔn)地識別和結(jié)合到目標(biāo)細(xì)胞表面的nectin-4分子，從而將藥物直接輸送到病變部位，提高治療效果并降低對正常組織的副作用。

3、多肽是由三個(gè)或三個(gè)以上氨基酸通過肽鍵連接而成的化合物。作為關(guān)鍵的生物分子，多肽在體內(nèi)廣泛存在并發(fā)揮重要作用，包括調(diào)節(jié)體內(nèi)各系統(tǒng)器官和細(xì)胞的功能。近年來，多肽類藥物因其優(yōu)越的性質(zhì)，如高靶向性、低免疫原性、高組織滲透性以及良好的安全性，越來越受到新藥研發(fā)領(lǐng)域的關(guān)注。

4、盡管已有大量針對nectin-4的抑制劑前體物質(zhì)的研究，傳統(tǒng)小分子藥物由于nectin-4的結(jié)構(gòu)特性，難以直接靶向和發(fā)揮作用。這使得當(dāng)前的藥物研發(fā)重點(diǎn)轉(zhuǎn)向了抗體藥物偶聯(lián)物(adc)和多肽藥物偶聯(lián)物(pdc)。目前的nectin-4結(jié)合肽與nectin-4的親和力不高，難以作為癌癥等疾病的治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，有必要提供nectin-4結(jié)合肽及其應(yīng)用。該nectin-4結(jié)合肽與nectin-4的親和力高，能夠與nectin-4特異性結(jié)合。

2、一種nectin-4結(jié)合肽，所述nectin-4結(jié)合肽的氨基酸序列包括：

3、如seq?id?no.1～seq?id?no.19任一項(xiàng)所示的氨基酸序列；或者，

4、與seq?id?no.1～seq?id?no.19任一項(xiàng)所示的氨基酸序列相比至少一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的替代、插入和/或缺失而得到的氨基酸序列。

5、本申請針對nectin-4胞外區(qū)域來開發(fā)靶向結(jié)合肽，得到的上述nectin-4結(jié)合肽與nectin-4的親和力較高，能夠識別nectin-4，并與nectin-4特異性結(jié)合，能夠用于治療個(gè)體腫瘤或癌癥的藥物，為治療nectin-4相關(guān)疾病提供新的策略，并為癌癥及其他相關(guān)疾病的治療開辟新的途徑。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，氨基酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.19的nectin-4結(jié)合肽與nectin-4的結(jié)合力為4.79e-13(m)至5.57e-05(m)，即nectin-4結(jié)合肽與nectin-4具有高親和力。

6、一種多核苷酸，包括上述nectin-4結(jié)合肽的編碼序列。

7、一種重組載體，所述重組載體攜帶有上述多核苷酸。

8、一種重組細(xì)胞，所述重組細(xì)胞含有上述重組載體。

9、一種多肽-載體蛋白偶聯(lián)物，所述多肽-載體蛋白偶聯(lián)物包括偶聯(lián)的載體蛋白和上述nectin-4結(jié)合肽。

10、在其中一些實(shí)施例中，所述載體蛋白選自牛血清蛋白、卵清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白及酪蛋白中的至少一種；

11、及/或，所述nectin-4結(jié)合肽通過連接序列與所述載體蛋白偶聯(lián)；可選地，所述連接序列的氨基酸序列如seq?id?no.20所示；

12、及/或，每個(gè)所述載體蛋白偶聯(lián)2條～50條的所述nectin-4結(jié)合肽。

13、一種多肽組合物，包括：氨基酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.19所示的多肽、氨基酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.19所示的多肽相比至少一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的取代、插入和/或缺失而得到的多肽中至少兩條。

14、一種藥物，包括上述nectin-4結(jié)合肽、上述多核苷酸、上述重組載體、上述重組細(xì)胞、上述多肽-載體蛋白偶聯(lián)物、及上述多肽組合物中的至少一種。

15、在其中一些實(shí)施例中，還包括佐劑和/或藥學(xué)上可接受的載體；可選地，所述佐劑包括磷酸鋁、氫氧化鋁和明礬中的至少一種；所述藥學(xué)上可接受的載體選自緩釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、吸附載體、表面活性劑及潤滑劑中的至少一種；

16、及/或，還包括多肽穩(wěn)定劑；可選地，所述多肽穩(wěn)定劑包括plga納米顆粒材料，或者，所述多肽穩(wěn)定劑包括150mm～180mm?nacl、100mm～140mm的聚賴氨酸鹽酸鹽；

17、及/或，所述藥物包括所述nectin-4結(jié)合肽，所述nectin-4結(jié)合肽的有效劑量為0.1μm～0.1m或者0.001mg～1000mg。

18、上述nectin-4結(jié)合肽、上述多核苷酸、上述重組載體、上述重組細(xì)胞、上述多肽-載體蛋白偶聯(lián)物、及上述多肽組合物中的至少一種在制備抗腫瘤藥物、抗癌藥物、抗血管惡性增生疾病的藥物及/或保健品中的應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種nectin-4結(jié)合肽，其特征在于，所述nectin-4結(jié)合肽的氨基酸序列包括：

2.一種多核苷酸，其特征在于，包括如權(quán)利要求1所述的nectin-4結(jié)合肽的編碼序列。

3.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體攜帶有權(quán)利要求2所述的多核苷酸。

4.一種重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞含有權(quán)利要求3所述的重組載體。

5.一種多肽-載體蛋白偶聯(lián)物，其特征在于，所述多肽-載體蛋白偶聯(lián)物包括偶聯(lián)的載體蛋白和權(quán)利要求1所述的nectin-4結(jié)合肽。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多肽-載體蛋白偶聯(lián)物，其特征在于，所述載體蛋白選自牛血清蛋白、卵清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白及酪蛋白中的至少一種；

7.一種多肽組合物，其特征在于，包括：氨基酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.19所示的多肽、氨基酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.19所示的多肽相比至少一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的取代、插入和/或缺失而得到的多肽中至少兩條。

8.一種藥物，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的nectin-4結(jié)合肽、權(quán)利要求2所述的多核苷酸、權(quán)利要求3所述的重組載體、權(quán)利要求4所述的重組細(xì)胞、權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的多肽-載體蛋白偶聯(lián)物、及權(quán)利要求7所述的多肽組合物中的至少一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，還包括佐劑和/或藥學(xué)上可接受的載體；可選地，所述佐劑包括磷酸鋁、氫氧化鋁和明礬中的至少一種；所述藥學(xué)上可接受的載體選自緩釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、吸附載體、表面活性劑及潤滑劑中的至少一種；

10.權(quán)利要求1所述的nectin-4結(jié)合肽、權(quán)利要求2所述的多核苷酸、權(quán)利要求3所述的重組載體、權(quán)利要求4所述的重組細(xì)胞、權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的多肽-載體蛋白偶聯(lián)物、及權(quán)利要求7所述的多肽組合物中的至少一種在制備抗腫瘤藥物或者抗癌藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及Nectin?4結(jié)合肽及其應(yīng)用。該Nectin?4結(jié)合肽的氨基酸序列包括：如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.19任一項(xiàng)所示的氨基酸序列；或者，與SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.19任一項(xiàng)所示的氨基酸序列相比至少一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的替代、插入和/或缺失而得到的氨基酸序列。針對Nectin?4胞外區(qū)域來開發(fā)靶向結(jié)合肽，得到的上述Nectin?4結(jié)合肽與Nectin?4的親和力較高，能夠識別Nectin?4，并能夠與Nectin?4特異性結(jié)合，能夠用于治療個(gè)體腫瘤或癌癥的藥物，為治療Nectin?4相關(guān)疾病提供新的策略，并為癌癥及其他相關(guān)疾病的治療開辟新的途徑。

技術(shù)研發(fā)人員：趙春青,于巧萍,肖斌,黃俊雄,占文虎,李英睿
受保護(hù)的技術(shù)使用者：深圳碳云智肽藥物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19