本發(fā)明屬于生物，特別涉及一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytocakn-l及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、血腦屏障是大腦與血液之間的物理和生化屏障，具有極其重要的生理功能，能阻止外界毒素和病原體從血液中進(jìn)入腦組織，維持大腦內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定性；還能通過(guò)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)和被動(dòng)擴(kuò)散機(jī)制選擇性地調(diào)節(jié)特定分子的進(jìn)出，保證大腦得到足夠的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。當(dāng)血腦屏障受損或破壞時(shí)，外界有害物質(zhì)如細(xì)菌、病毒和毒素輕易進(jìn)入大腦，會(huì)增加神經(jīng)元受損和炎癥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，甚至引發(fā)腦部疾病或神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。

2、甘露糖醛酸寡糖(maos)是以褐藻膠為原料，經(jīng)特定酶降解、分級(jí)和凝膠層析分離制備得到的不同聚合度β-d-甘露糖醛酸寡糖的鈉鹽。已有研究報(bào)道m(xù)aos制備的甘露特鈉膠囊(gv-971)能夠重塑腸道菌群，抑制神經(jīng)炎癥，從而改善阿爾茨海默病(ad)患者的認(rèn)知功能。

3、二油?；蚜字?dopc)是一種常見(jiàn)的磷脂類化合物，是細(xì)胞膜的關(guān)鍵組成部分，特別是在脂質(zhì)體的形成中，它能夠形成穩(wěn)定的脂質(zhì)雙層，對(duì)細(xì)胞膜的流動(dòng)性和滲透性有重要影響。在腸道中，dopc可發(fā)揮多種調(diào)控作用，包括促進(jìn)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性、參與脂質(zhì)代謝和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等。在心血管疾病中，dopc參與了血脂代謝和血管內(nèi)皮功能的調(diào)節(jié)。異常的dopc代謝或分布可能與動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。此外，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，dopc對(duì)神經(jīng)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和功能有重要意義，其變化可能與神經(jīng)退行性疾病等相關(guān)。dopc目前主要是通過(guò)物理手段從蛋黃和大豆中提取純化而來(lái)也可通過(guò)化學(xué)合成磷脂，物理和化學(xué)法工藝復(fù)雜，產(chǎn)量也有限。

4、由于現(xiàn)有技術(shù)中dopc的生產(chǎn)成本高，亟需找到一種高產(chǎn)量低成本、通過(guò)生物合成生產(chǎn)dopc的方法及菌株。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在提供一株產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l及其生產(chǎn)dopc的應(yīng)用方法，該菌株在體外發(fā)酵時(shí)加入maos能夠顯著增加dopc的代謝產(chǎn)生，且經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明其生產(chǎn)的dopc在體內(nèi)外均能夠緩解神經(jīng)損傷。利用該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)生dopc的生物合成方法可以顯著降低dopc的生產(chǎn)成本。

2、具體采用的技術(shù)方案為：一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編430072，保藏日期為2024年4月12日，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2024683，分類學(xué)命名klebsiella?oxytoca。

3、而且，該菌株的16srdna序列如seq?id?no.1所示。

4、以及，所述的菌株用于制備二油?；蚜字?/p>

5、以及，用所述的菌株制備二油?；蚜字姆椒椋?/p>

6、步驟1：將產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l菌懸液接種在lb培養(yǎng)基中；

7、步驟2：培養(yǎng)基中添加甘露糖醛酸寡糖；

8、步驟3：在37℃搖床中以200rpm培養(yǎng)菌株12h；

9、步驟4：檢測(cè)菌懸液od值為1.0；

10、步驟5：8000rpm，5min離心收集上清。

11、以及，所述的菌株用于制作生產(chǎn)二油?；蚜字闹苿?，所述制劑中的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l數(shù)量≥1×107cfu/g或1×107cfu/ml。

12、以及，所述的菌株在制備用于保護(hù)腸道屏障的藥物中的應(yīng)用。

13、以及，所述的菌株在制備用于保護(hù)血腦屏障的藥物中的應(yīng)用。

14、以及，所述的菌株在制備用于抑制神經(jīng)炎癥的藥物中的應(yīng)用。

15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

16、(1)本發(fā)明所提供的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在maos的誘導(dǎo)下，能代謝產(chǎn)生二油酰基卵磷脂(dopc)利用該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)生dopc的生物合成方法相比于傳統(tǒng)的物理和化學(xué)方法成本更低，相比傳統(tǒng)化學(xué)合成方法更環(huán)保、高效。

17、(2)實(shí)驗(yàn)證明產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l所生產(chǎn)的dopc在小鼠體內(nèi)干預(yù)能夠保護(hù)腸道屏障功能、能顯著保護(hù)血腦屏障的完整性。

18、(3)實(shí)驗(yàn)證明產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l所生產(chǎn)的dopc在體外能顯著抑制神經(jīng)炎癥。

技術(shù)特征：

1.一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編430072，保藏日期為2024年4月12日，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2024683，分類學(xué)命名klebsiella?oxytoca。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l，其特征在于：該菌株的16srdna序列如seq?id?no.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l的應(yīng)用，其特征在于：用于制備二油?；蚜字?。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l的應(yīng)用，其特征在于，制備二油?；蚜字姆椒椋?/p>

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l的應(yīng)用，其特征在于：用于制作生產(chǎn)二油?；蚜字闹苿?，所述制劑中的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiellaoxytoca?kn-l數(shù)量≥1×107cfu/g或1×107cfu/ml。

6.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在制備用于保護(hù)腸道屏障的藥物中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在制備用于保護(hù)血腦屏障的藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌klebsiella?oxytoca?kn-l在制備用于抑制神經(jīng)炎癥的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiella?oxytoca?KN?L及其應(yīng)用，一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiella?oxytoca?KN?L，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；郵編430072，保藏日期為2024年4月12日，保藏編號(hào)為：CCTCC?NO：M2024683，分類學(xué)命名Klebsiella?oxytoca。本發(fā)明提供的產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiella?oxytoca?KN?L在體外發(fā)酵時(shí)加入MAOS能夠顯著增加DOPC的代謝產(chǎn)生，且經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明其生產(chǎn)的DOPC在體內(nèi)外均能夠緩解神經(jīng)損傷。利用該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)生DOPC的生物合成方法可以顯著降低DOPC的生產(chǎn)成本。

技術(shù)研發(fā)人員：盧霜,郭小華,陶正雄,吳莉莎,張莉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中南民族大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19