技術(shù)特征：

1.一種重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體的制備方法，其特征在于：所述重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體基于人ⅲ型膠原蛋白α1鏈膠原域gly-x-y的三肽重復(fù)序列特征和強(qiáng)大的親水性，選取人源膠原蛋白iii第981位氨基酸至1079氨基酸的99個(gè)氨基酸片段并串聯(lián)4次，得到含396個(gè)氨基酸的結(jié)構(gòu)，如seq?no.2所示，單體分子量為46?kda，三聚體分子量為138?kda；人源膠原蛋白iii第981位氨基酸至1079氨基酸的99個(gè)氨基酸片段如seq?no.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體的制備方法，其特征在于：所述步驟二具體為：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體的制備方法，其特征在于：所述步驟三具體為：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體的制備方法，其特征在于：所述重組人源膠原蛋白ⅲ片段串聯(lián)體產(chǎn)量達(dá)到6-7g/l。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及的是一種重組人源膠原蛋白Ⅲ片段串聯(lián)體的制備方法，重組人源膠原蛋白Ⅲ片段串聯(lián)體的氨基酸序列如SEQ?NO.2所示，含396個(gè)氨基酸，單體分子量為46?kDa，三聚體分子量為138?kDa。其制備方法為：組成型分泌表達(dá)重組人源膠原蛋白Ⅲ片段串聯(lián)體的畢赤酵母工程菌的構(gòu)建，篩選獲得高效表達(dá)的畢赤酵母工程菌；對(duì)重組酵母進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)重組人源膠原蛋白Ⅲ片段串聯(lián)體高效表達(dá)；從發(fā)酵液中分離純化重組人源膠原蛋白Ⅲ片段串聯(lián)體蛋白。本發(fā)明重組人源膠原蛋白Ⅲ片段串聯(lián)體是完全由人源膠原蛋白Ⅲ片段組成的全新氨基酸序列，其編碼的基因是全新的人工基因序列；本發(fā)明較易地實(shí)現(xiàn)了該膠原蛋白工程菌的發(fā)酵生產(chǎn)。

技術(shù)研發(fā)人員：郭德軍,惠琦,王志剛,時(shí)萍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西安昆創(chuàng)融源生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/18