本發(fā)明涉及生物工程，具體為一種大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法及其制備裝置。

背景技術(shù)：

1、大菱鲆是一個經(jīng)濟價值很高的養(yǎng)殖品種，它生長迅速并且味道十分鮮美，從而深受人們的喜愛，自從20世紀(jì)90年代從歐洲引入中國后，大菱鲆的養(yǎng)殖得到了很快的發(fā)展，然而，隨著養(yǎng)殖環(huán)境的不斷惡化，使得大菱鲆的細(xì)菌性疾病不斷發(fā)生，愛德華氏菌病就是經(jīng)常發(fā)生的一種。

2、愛德華氏菌病是由遲緩愛德華氏菌引起的，也被記為遲鈍愛德華氏菌或緩慢愛德華氏菌，屬腸桿菌科，是我國水產(chǎn)養(yǎng)殖中極具危害性的病原菌，給養(yǎng)殖戶造成巨大的經(jīng)濟損失，嚴(yán)重影響大菱鲆產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，目前，大菱鲆細(xì)菌性疾病的主要防治方法是使用消毒劑和抗生素，但這2種方法存在藥物殘留和細(xì)菌耐藥性等隱患；2019年初，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部等十部委聯(lián)合印發(fā)了《關(guān)于加快推進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)綠色發(fā)展的若干意見》綱領(lǐng)性文件，強調(diào)在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防控中，應(yīng)該以防為主、防治結(jié)合，推廣接種疫苗等預(yù)防技術(shù)，推動水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)綠色發(fā)展。

3、因此，研發(fā)針對大菱鲆遲緩愛德華氏菌病的有效、低刺激性、無殘留的疫苗迫在眉睫，滅活疫苗是一種在水產(chǎn)病害防治上比較安全有效的方法，其原理是經(jīng)過物理或化學(xué)方法將微生物滅活的同時保持該微生物的免疫原性，接種后可使動物機體產(chǎn)生對該微生物的特異性免疫力。

4、在現(xiàn)有技術(shù)當(dāng)中，雖然能對菌種進(jìn)行滅活，但在滅活的過程當(dāng)中，需要添加不低于0.5％的福爾馬林，容易使得后期福爾馬林對魚體的刺激，并且福爾馬林添加量為0.5％，滅活后需要用無菌生理鹽水多次洗滌并離心，以及增加工作量且易增加其他菌的污染的可能性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了一種大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法及其制備裝置，它能夠有效解決現(xiàn)有技術(shù)中在滅活的過程當(dāng)中，需要添加不低于0.5％的福爾馬林，容易使得后期福爾馬林對魚體的刺激，并且福爾馬林添加量為0.5％，滅活后需要用無菌生理鹽水多次洗滌并離心，以及增加工作量且易增加其他菌的污染的可能性等問題。

2、本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備裝置，包括底板，所述底板頂部固定安裝有存放組件，所述底板頂部固定安裝有恒溫培養(yǎng)組件，所述恒溫培養(yǎng)組件頂部固定安裝有檢測組件，所述恒溫培養(yǎng)組件內(nèi)部固定安裝有混勻組件，所述底板頂部固定安裝有恒溫存放箱本體，所述恒溫存放箱本體內(nèi)部固定安裝有攪拌組件，所述底板頂部固定安裝有檢測組件；

3、所述存放組件包括冰箱本體，所述冰箱本體內(nèi)部插接安裝有存放欄，所述存放欄頂部貫穿設(shè)置有通槽，所述存放欄頂部設(shè)置有培養(yǎng)基本體。

4、優(yōu)選的，所述恒溫培養(yǎng)組件包括恒溫培養(yǎng)箱本體，所述恒溫培養(yǎng)箱本體前側(cè)設(shè)置有顯示屏，所述恒溫培養(yǎng)箱本體前側(cè)設(shè)置有控制開關(guān)，所述恒溫培養(yǎng)箱本體內(nèi)部固定安裝有分隔欄，所述恒溫培養(yǎng)箱本體底部開設(shè)有存放槽，所述恒溫培養(yǎng)箱本體底部開設(shè)有卡槽一，所述存放槽內(nèi)部設(shè)置有安裝板，所述安裝板頂部固定安裝有固定栓一，所述恒溫培養(yǎng)箱本體通過存放槽和卡槽一與安裝板為插接安裝，所述固定栓一貫穿安裝板并延伸至恒溫培養(yǎng)箱本體的內(nèi)部。

5、通過上述技術(shù)方案，通過存放槽和卡槽一與安裝板的配合，在安裝時，可對安裝板起到快速對位的作用，隨后轉(zhuǎn)動固定栓一，可實現(xiàn)其快速安裝，可便于后期對伺服電機一的維護與檢修。

6、優(yōu)選的，所述檢測組件包括安裝座，所述安裝座內(nèi)側(cè)開設(shè)有安裝槽，所述安裝座內(nèi)側(cè)開設(shè)有插槽一，所述安裝座頂部固定安裝有密封墊，所述安裝座頂部設(shè)置有固定栓二，所述插槽一內(nèi)部插接安裝有連接柱一，所述連接柱一底部固定安裝有探頭，所述連接柱一頂部固定安裝有溫度檢測器本體，所述探頭貫穿安裝座并延伸至恒溫培養(yǎng)箱本體的內(nèi)部，所述檢測組件位于恒溫培養(yǎng)箱本體的頂部。

7、通過上述技術(shù)方案，通過檢測組件的設(shè)計，在進(jìn)行菌液恒溫培養(yǎng)時，可通過探頭伸入恒溫培養(yǎng)箱本體的內(nèi)部，可對內(nèi)部的溫度進(jìn)行探測，隨后將探測過后的數(shù)據(jù)傳輸至溫度檢測器本體表面顯示，便于工作人員了解菌液的生產(chǎn)溫度。

8、優(yōu)選的，所述安裝座通過插槽一與連接柱一相適配，所述密封墊為橡膠密封墊，所述固定栓二貫穿安裝座并延伸至恒溫培養(yǎng)箱本體的內(nèi)部。

9、通過上述技術(shù)方案，通過安裝座與插槽一與連接柱一的配合，在安裝連接柱一上方組件時，可通過插槽一插入連接柱一，可起到快速對位的作用，并且配合上密封墊，能避免細(xì)菌進(jìn)入到其內(nèi)部，導(dǎo)致菌種的無菌環(huán)境受到影響，影響菌種的正常生長。

10、優(yōu)選的，所述混勻組件包括保護罩，所述保護罩頂部插接安裝有保護蓋，所述恒溫培養(yǎng)箱本體內(nèi)部固定安裝有伺服電機一，所述伺服電機一頂部固定安裝有固定盤，所述固定盤頂部固定安裝有連接柱二，所述連接柱二頂部固定安裝有存放塊一，所述存放塊一頂部的一側(cè)開設(shè)有固定槽一，所述存放塊一內(nèi)部的兩側(cè)開設(shè)有插槽二，所述插槽二內(nèi)部插接安裝有存放板一，所述插槽二和存放板一相適配，所述插槽二和存放板一設(shè)置有相同兩個，兩個所述插槽二和存放板一關(guān)于存放塊一中心線呈對稱分布。

11、通過上述技術(shù)方案，通過插槽二和存放板一的配合，在安裝插槽二時，可將存放板一插入至插槽二當(dāng)中，可實現(xiàn)其快速對位，便于后續(xù)的維護與更換，并且兩個插槽二和存放板一關(guān)于存放塊一的配合，可在混勻時，放置多個試管等，便于提高混勻效率。

12、優(yōu)選的，所述存放板一頂部的另一側(cè)開設(shè)有固定槽二，所述固定槽二頂部固定安裝有安裝環(huán)，所述安裝環(huán)內(nèi)部固定安裝有存放塊二，所述安裝環(huán)和存放塊二相適配。

13、通過上述技術(shù)方案，通過固定槽二和安裝環(huán)的配合，在進(jìn)行混勻時，可將不同直徑的混勻管插入安裝環(huán)當(dāng)中，可提高混勻組件的多樣性，便于放置不同直徑的混勻管。

14、優(yōu)選的，所述攪拌組件包括底座，所述底座頂部開設(shè)有卡槽二，所述卡槽二內(nèi)部插接安裝有插板，所述插板頂部開設(shè)有卡槽三，所述卡槽三內(nèi)部固定安裝有放置板，所述放置板頂部開設(shè)有固定槽三，所述固定槽三內(nèi)部固定安裝有伺服電機二，所述伺服電機二輸出軸上固定安裝有攪拌桿，所述底座設(shè)置有限位塊，所述頂部開設(shè)有固定槽四，所述限位塊左右兩側(cè)開設(shè)有安裝孔一，所述插板外側(cè)設(shè)置有固定栓三，所述卡槽二和插板相適配。

15、通過上述技術(shù)方案，通過卡槽二和插板，在安裝攪拌組件時，可通過卡槽二插入插板當(dāng)中，可實現(xiàn)兩組的快速對位，便于后續(xù)進(jìn)行安裝。

16、優(yōu)選的，所述固定槽三和伺服電機二相適配，所述伺服電機二和攪拌桿與固定槽四位于同一豎直水平線上，所述伺服電機二、攪拌桿與固定槽四為一一對應(yīng)。

17、通過上述技術(shù)方案，通過伺服電機二、攪拌桿與固定槽四的配合，將加入福爾馬林之后的菌液放置于攪拌罐當(dāng)中，將攪拌罐放置于固定槽四當(dāng)中，可開啟伺服電機二使得攪拌桿進(jìn)行轉(zhuǎn)動，可對放置在固定槽四當(dāng)中的攪拌罐內(nèi)部的菌液進(jìn)行攪拌。

18、優(yōu)選的，所述固定栓三貫穿底座和插板并延伸至固定槽四的內(nèi)部，所述伺服電機二、攪拌桿和固定槽四設(shè)置有相同兩個，兩個所述伺服電機二、攪拌桿和固定槽四關(guān)于底座的中心線呈對稱分布。

19、通過上述技術(shù)方案，通過固定栓三的設(shè)計，在固定插板時，可同時對限位塊同時起到固定的作用，可提高插板和限位塊與底座之間的連接性，避免其容易發(fā)生位移。

20、優(yōu)選的，所述檢測組件包括檢測活菌器本體，所述檢測活菌器本體頂部固定安裝有固定桿，所述固定桿外側(cè)固定安裝有限位板，所述限位板頂部固定安裝有限位柱，所述限位板頂部設(shè)置有頂板，所述頂板頂部固定安裝有安裝栓，所述限位板頂部固定安裝有檢測鏡，所述檢測鏡外側(cè)開設(shè)有定位孔，所述限位柱與定位孔相適配，所述安裝栓貫穿頂板并延伸至限位板的底部

21、通過上述技術(shù)方案，通過檢測組件的設(shè)計，可將培養(yǎng)基本體放入活菌器本體的上方，隨后通過檢測鏡，來檢測菌數(shù)od600和活菌計數(shù)。

22、本發(fā)明還提供一種大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

23、s1：將冷藏于冰箱本體中的愛德華氏菌用接種針挑出后分別接種在培養(yǎng)基本體中；

24、s2：在30℃環(huán)境下，放置14h～18h后，挑取單菌落置于另一個培養(yǎng)基204中，隨后培養(yǎng)基204當(dāng)中的菌液放置混勻管當(dāng)中，隨后將其插入混勻組件5上方的存放板一509的凹槽當(dāng)中，以及存放塊二513上方的凹槽當(dāng)中，通過控制開關(guān)303和顯示屏302，將恒溫培養(yǎng)本體301溫度調(diào)整至30℃，并且控制伺服電機一503的轉(zhuǎn)速控制在200rpm，培養(yǎng)至od600＝0.5～1.0時，按照0.5％～2％接種量置于另一個培養(yǎng)基204中，隨后培養(yǎng)基204當(dāng)中的菌液放置混勻管當(dāng)中，隨后將其插入混勻組件5上方的存放板一509的凹槽當(dāng)中，以及存放塊二513上方的凹槽當(dāng)中，通過控制開關(guān)303和顯示屏302，將恒溫培養(yǎng)本體301溫度調(diào)整至30℃，并且控制伺服電機一503的轉(zhuǎn)速控制在200rpm，培養(yǎng)(8h～12h)；

25、s3：當(dāng)細(xì)菌濃度達(dá)到約15.0～60.0×108cfu/ml時，在培養(yǎng)基菌液中加入福爾馬林最終濃度為0.05％(v/v)；

26、s4：隨后將恒溫存放箱本體6溫度調(diào)至25℃，將進(jìn)行滅活處理，時長為24h，并且將加入福爾馬林之后的菌液放置于攪拌罐當(dāng)中，將攪拌罐放置于固定槽四710當(dāng)中，隨后使得攪拌桿708位于攪拌罐內(nèi)部，每隔6h充分?jǐn)噭?次菌液，至24h后滅活結(jié)束；

27、s5：隨后將滅活菌液濃度調(diào)至5.0～10.0×108cfu/ml左右，得到大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗；

28、s6：將得到的大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗，進(jìn)行分裝并置于冰箱本體201保存?zhèn)溆?，且將冰箱本體201的溫度調(diào)至4℃進(jìn)行存放。

29、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法及其制備裝置，具備以下有益效果：

30、1、該大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法及其制備裝置，當(dāng)細(xì)菌數(shù)為15.0～60.0×108cfu/ml時即可添加0.05％(v/v)福爾馬林進(jìn)行滅活(通常添加量不低于0.5％)，降低福爾馬林的添加量，減少后期福爾馬林對魚體的刺激；如果福爾馬林添加量為0.5％，滅活后需要用無菌生理鹽水多次洗滌并離心，該過程會增加工作量且易增加其他菌的污染的可能性；

31、2、該大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法及其制備裝置，通過該裝置培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)為15.0～60.0×108cfu/ml，培養(yǎng)較短時間就可以達(dá)到該菌數(shù)，縮短了培養(yǎng)時間提高了工作效率，且細(xì)菌處于對數(shù)生長期，菌各方面都有優(yōu)勢；

32、3、該大菱鲆遲緩愛德華氏菌滅活疫苗的制備方法及其制備裝置，整體可以提高免疫攻毒保護率，高于常規(guī)抗原的免疫效果，免疫28d后免疫攻毒保護可達(dá)85％。