本發(fā)明涉及一種包括使鋰鹽沉淀的步驟的用于生產(chǎn)氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物的方法。

背景技術：

1、氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物是可以作為用于藥物的候選分子或其合成中間體的重要化合物。作為純化氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物的方法，已知有在其末端進行保護或修飾并隨后進行純化的方法。

2、例如，專利文獻1公開了一種方法，其中使用光學活性3-氯丙氨酸衍生物，并且光學活性氮雜環(huán)丙烷-2-甲酸衍生物(其氨基被在位置2和/或4處經(jīng)硝基取代的苯磺?；Ｗo)或光學活性3-鹵代丙氨酸衍生物(其氨基被在位置2和/或4處經(jīng)硝基取代的苯磺酰基保護)形成為中間體。

3、另外，專利文獻2公開了一種生產(chǎn)β-鹵代-α-氨基甲酸或其鹽的方法，其特征在于，通過用鹵化劑，用酸處理β-羥基-α-氨基甲酸(條件是位置α處的氨基的堿度不被氨基取代基的存在所屏蔽)或其鹽來鹵化羥基。

4、對于廣泛用作保護基團的fmoc基團(9-芴基甲氧基羰基)，非專利文獻1表明，當用fmoc基團保護肽化合物時，會生成fmoc-β-丙氨酸作為副產(chǎn)物，并且fmoc-β-丙氨酸衍生自fmoc-osu(fmoc?n-羥基琥珀酰亞胺酯)。fmoc-osu是常用來以fmoc基團保護氨基酸或肽化合物的起始材料之一。即使當使用除fmoc基團以外的通用保護基團(例如，叔丁氧基羰基(boc基團)、芐氧基羰基(cbz基團)等)時，也可能產(chǎn)生作為雜質(zhì)的具有該保護基團的β-丙氨酸。因此，需要通過以高精度去除這些雜質(zhì)來提高用于藥物發(fā)現(xiàn)的候選分子或其合成中間體的純度。

5、[引文列表]

6、[專利文獻]

7、[專利文獻1]國際公開號wo?2001/060795

8、[專利文獻2]國際公開號wo?1999/033785

9、[非專利文獻]

10、[非專利文獻1]m.obkircher等人，"formationof?fmoc-β-alanine?during?fmoc-protections?with?fmoc-osu",journal?ofpeptide?science,第14卷,第6期,2008年6月,第763-766頁。

技術實現(xiàn)思路

1、[本發(fā)明要解決的問題]

2、然而，降低雜質(zhì)諸如β-丙氨酸或其衍生物的含量，并以高純度純化目的氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物是困難的。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種具有高純度的氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物。

3、[解決問題的手段]

4、[1]一種用于生產(chǎn)氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物的方法，所述方法包括下列步驟(a)和(b)：

5、步驟(a)；使含鋰物質(zhì)與待純化的混合物接觸的步驟，所述待純化的混合物為下列純化目標(i)和下列雜質(zhì)(ii)的混合物：

6、(i)在n末端處具有保護基團的所述氨基酸或在n末端處具有保護基團的所述肽化合物，以及

7、(ii)除所述純化目標以外的化合物；以及步驟(b)；使所述純化目標的鋰鹽沉淀的步驟。

8、[2]一種用于從待純化的混合物中去除雜質(zhì)的方法，所述方法包括下列步驟(a)和(b)：

9、步驟(a)；使含鋰物質(zhì)與待純化的混合物接觸的步驟，所述待純化的混合物為下列純化目標(i)和下列雜質(zhì)(ii)的混合物：

10、(i)在n末端處具有保護基團的所述氨基酸或在n末端處具有保護基團的所述肽化合物，以及

11、(ii)除所述純化目標以外的化合物；以及步驟(b)；使所述純化目標的鋰鹽沉淀的步驟。

12、[3]根據(jù)[1]或[2]所述的方法，其中所述純化目標為氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物。

13、[4]根據(jù)[1]至[3]中任一項所述的方法，其中所述純化目標的n末端處的所述保護基團為氨基甲酸酯型保護基團。

14、[5]根據(jù)[1]至[4]中任一項所述的方法，其中所述純化目標具有芴基甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、芐氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基。

15、[6]根據(jù)[1]至[5]中任一項所述的方法，其中所述雜質(zhì)是除所述純化目標以外的在n末端處具有保護基團的氨基酸或在n末端處具有保護基團的肽化合物。

16、[7]根據(jù)[1]至[6]中任一項所述的方法，其中所述雜質(zhì)為在n末端處具有保護基團的β-丙氨酸。

17、[8]根據(jù)[1]至[7]中任一項所述的方法，其中所述雜質(zhì)具有氨基甲酸酯基團作為保護基團。

18、[9]根據(jù)[1]至[8]中任一項所述的方法，其中所述雜質(zhì)具有芴基甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、芐氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基作為保護基團。

19、[10]根據(jù)[1]至[9]中任一項所述的方法，其中所述純化目標和所述雜質(zhì)具有相同的保護基團。

20、[11]根據(jù)[1]至[10]中任一項所述的方法，其中所述純化目標和所述雜質(zhì)在n末端處具有相同的保護基團。

21、[12]根據(jù)[1]至[11]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(a)中形成所述純化目標的所述鋰鹽。

22、[13]根據(jù)[1]至[12]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(a)中形成所述雜質(zhì)的鋰鹽。

23、[14]根據(jù)[1]至[13]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中所述純化目標的所述鋰鹽或其溶劑化物作為固體沉淀。

24、[15]根據(jù)[1]至[14]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中所述純化目標的所述鋰鹽或其溶劑化物作為晶體沉淀。

25、[16]根據(jù)[1]至[15]中任一項所述的方法，其中所述步驟(a)在第一有機溶劑的存在下進行。

26、[17]根據(jù)[16]所述的方法，其中所述純化目標在所述第一有機溶劑中的溶解度為20g/l或更高。

27、[18]根據(jù)[16]或[17]所述的方法，其中所述純化目標的所述鋰鹽在所述第一有機溶劑中的溶解度為20g/l或更低。

28、[19]根據(jù)[16]至[18]中任一項所述的方法，其中所述雜質(zhì)在第一溶劑中的溶解度為20g/l或更高。

29、[20]根據(jù)[16]至[19]中任一項所述的方法，其中所述第一有機溶劑為選自由腈類、醚類、酮類、酰胺類、脲類、亞砜類、砜類、烷類、芳香族化合物、酯類和烷基鹵化物組成的組中的至少一者。

30、[21]根據(jù)[16]至[20]中任一項所述的方法，其中所述第一有機溶劑為腈類或酯類。

31、[22]根據(jù)[16]至[21]中任一項所述的方法，其中所述第一有機溶劑為選自由以下項組成的組中的至少一者：乙腈、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、2-甲基-2-丙醇、乙二醇、四氫呋喃、1,4-二噁烷、2-甲基四氫呋喃、甲基叔丁基醚、二異丙基醚、二乙基醚、1,2-二甲氧基乙烷、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、二甲基亞砜、環(huán)丁砜、庚烷、甲基環(huán)己烷、己烷、環(huán)己烷、戊烷、苯、甲苯、1,2-二甲基苯、1,3-二甲基苯、1,4-二甲基苯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿和四氯化碳。

32、[23]根據(jù)[16]至[22]中任一項所述的方法，其中所述第一有機溶劑為乙腈或四氫呋喃。

33、[24]根據(jù)[16]至[23]中任一項所述的方法，其中所述第一有機溶劑僅為一種類型。

34、[25]根據(jù)[1]至[24]中任一項所述的方法，其中所述步驟(a)在水的存在下進行。

35、[26]根據(jù)[16]至[25]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(a)中不使用除所述第一有機溶劑以外的有機溶劑。

36、[27]根據(jù)[1]至[26]中任一項所述的方法，其中所述步驟(b)在第二有機溶劑的存在下進行。

37、[28]根據(jù)[27]所述的方法，其中所述純化目標的所述鋰鹽在所述第二有機溶劑中的溶解度為10g/l或更低。

38、[29]根據(jù)[27]或[28]所述的方法，其中所述第二有機溶劑為選自由腈類、醇類、醚類、酮類、酰胺類、脲類、亞砜類、砜類、烷類、芳香族化合物、酯類和烷基鹵化物組成的組中的至少一者。

39、[30]根據(jù)[27]至[29]中任一項所述的方法，其中所述第二溶劑為腈類或酯類。

40、[31]根據(jù)[27]至[30]中任一項所述的方法，其中所述第二有機溶劑為選自由以下項組成的組中的至少一者：乙腈、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、2-甲基-2-丙醇、乙二醇、四氫呋喃、1,4-二噁烷、2-甲基四氫呋喃、甲基叔丁基醚、二異丙基醚、二乙基醚、1,2-二甲氧基乙烷、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、二甲基亞砜、環(huán)丁砜、庚烷、甲基環(huán)己烷、己烷、環(huán)己烷、戊烷、苯、甲苯、1,2-二甲基苯、1,3-二甲基苯、1,4-二甲基苯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、二氯乙烷、二氯甲烷、氯仿和四氯化碳。

41、[32]根據(jù)[27]至[31]中任一項所述的方法，其中所述第二有機溶劑為乙腈或四氫呋喃。

42、[33]根據(jù)[27]至[32]中任一項所述的方法，其中所述第二有機溶劑僅為一種類型。

43、[34]根據(jù)[1]至[33]中任一項所述的方法，其中所述步驟(b)在水的存在下進行。

44、[35]根據(jù)[13]至[34]中任一項所述的方法，其中所述雜質(zhì)的鋰鹽在水中的溶解度為10g/l或更高。

45、[36]根據(jù)[27]至[35]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中不使用除所述第二有機溶劑以外的有機溶劑。

46、[37]根據(jù)[27]至[36]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中將在所述步驟(a)中獲得的樣品與第二溶劑混合。

47、[38]根據(jù)[27]至[37]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中進一步添加所述第二有機溶劑。

48、[39]根據(jù)[37]或[38]所述的方法，其中通過根據(jù)上述[37]或[38]所述的步驟，使所述純化目標的所述鋰鹽沉淀。

49、[40]根據(jù)[27]至[39]中任一項所述的方法，其中所述第二有機溶劑是與所述第一有機溶劑相同的溶劑。

50、[41]根據(jù)[1]至[40]中任一項所述的方法，其中所述步驟(a)和所述步驟(b)在第一有機溶劑的存在下進行，并且

51、其中在所述步驟(a)和所述步驟(b)中，每g所述待純化的混合物的所述第一有機溶劑的體積為1ml或更多且40ml或更少。

52、[42]根據(jù)[27]至[41]中任一項所述的方法，其中當在所述步驟(b)中增加所述第二有機溶劑的比例時，在所述步驟(a)完成時每g所述待純化的混合物的所述第一有機溶劑的體積為1ml或更多且50ml或更少。

53、[43]根據(jù)[27]至[42]中任一項所述的方法，其中當在所述步驟(b)中不增加所述第二有機溶劑的比例時，在所述步驟(a)完成時每g所述待純化的混合物的所述第一有機溶劑的體積為1ml或更多且100ml或更少。

54、[44]根據(jù)[1]至[43]中任一項所述的方法，其中所述步驟(a)和(b)在第二有機溶劑的存在下進行，并且跨所述步驟(a)和所述步驟(b)，每g所述待純化的混合物的所述第二有機溶劑的體積為0ml或更多且100ml或更少。

55、[45]根據(jù)[27]至[44]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)完成時每g所述待純化的混合物的所述第二有機溶劑的體積為0ml或更多且100ml或更少。

56、[46]根據(jù)[34]至[45]中任一項所述的方法，其中跨所述步驟(a)和所述步驟(b)，每g所述待純化的混合物的水的體積為0.1ml或更多且50ml或更少。

57、[47]根據(jù)[25]至[46]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(a)完成時每g所述待純化的混合物的水的體積為0.1ml或更多且50ml或更少。

58、[48]根據(jù)[34]至[47]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)完成時每g所述待純化的混合物的水的體積為0.1ml或更多且50ml或更少。

59、[49]根據(jù)[1]至[48]中任一項所述的方法，其中所述步驟(a)在-20℃或更高且100℃或更低的溫度范圍內(nèi)進行。

60、[50]根據(jù)[1]至[49]中任一項所述的方法，其中所述步驟(b)在-20℃或更高且100℃或更低的溫度范圍內(nèi)進行。

61、[51]根據(jù)[1]至[50]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(a)完成時全部液體組分中的所述含鋰物質(zhì)的物質(zhì)的量基于所述純化目標的物質(zhì)的量為0.5當量或更多且2.0當量或更少。

62、[52]根據(jù)[1]至[51]中任一項所述的方法，其中所述含鋰物質(zhì)為選自由以下項組成的組中的至少一者：氫氧化鋰、碳酸鋰、氫化鋰、磷酸三鋰、甲醇鋰、乙醇鋰、異丙醇鋰、叔丁醇鋰、甲基鋰、正丁基鋰、仲丁基鋰、叔丁基鋰、氨基鋰、二異丙基氨基鋰、六甲基二硅疊氮化鋰和四甲基哌啶鋰。

63、[53]根據(jù)[27]至[52]中任一項所述的方法，其中，在所述步驟(a)中，同時混合所述含鋰物質(zhì)、所述純化目標和所述第一有機溶劑。

64、[54]根據(jù)[27]至[53]中任一項所述的方法，其中，在所述步驟(a)中，將所述純化目標和所述第一有機溶劑的混合溶液與所述含鋰物質(zhì)混合。

65、[55]根據(jù)[27]至[54]中任一項所述的方法，其中，在所述步驟(a)中，將所述含鋰物質(zhì)和所述第一有機溶劑的混合溶液與所述待純化的混合物混合。

66、[56]根據(jù)[1]至[55]中任一項所述的方法，其中所述氨基酸或構成所述肽化合物的n末端氨基酸由下列通式(1)表示：

67、[式1]

68、

69、其中

70、在所述通式(1)中，

71、n表示1或更大且3或更小的數(shù)，

72、當存在多個r1時，r1彼此相同或不同，

73、r1和r2各自表示氫原子、烷基基團、烯基基團、炔基基團、環(huán)烷基基團、芳基基團、雜環(huán)基基團或雜芳基基團、或者其中選自由這些取代基組成的組的兩者或更多者被鍵合的取代基，這些基團任選地具有取代基，這些基團中的每一者任選地為飽和烴基團或不飽和烴基團，

74、a表示碳原子，

75、b表示氫原子或與氨基酸或肽化合物的結合點，

76、z表示芴基甲氧基羰基基團、叔丁氧基羰基基團、芐氧基羰基基團、烯丙氧基羰基基團、2,2,2-三氯乙氧基羰基基團或2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基基團，

77、r1和r2任選地被鍵合以與n和a一起形成環(huán)，其中r1和r2中的每一者為具有通過從未參與環(huán)形成的取代基的結構中除去一個氫原子而獲得的結構的取代基，并且

78、當n為2時，r2和兩個r1中的至少一者不是氫原子。

79、[57]根據(jù)[1]至[56]中任一項所述的方法，其中所述氨基酸或構成所述肽化合物的n末端氨基酸為選自由以下項組成的組中的至少一者：(s)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酸、3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸、3-(芐氧基羰基氨基)丙酸、(s)-2-(芐氧基羰基(甲基)氨基)-2-環(huán)戊基-乙酸、(s)-2-(芐氧基羰基(甲基)氨基)-3-苯基丙酸、3-(9h-芴-9-基甲氧基羰基氨基)丙酸、(r)-3-(9h-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸和(s)-1-(9h-芴-9-基甲氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸。

80、[58]根據(jù)[1]至[57]中任一項所述的方法，其中所述氨基酸或構成所述肽化合物的n末端氨基酸是通過由多肽催化的還原胺化反應獲得的，所述多肽包含與seq?id?no:1所示的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列。

81、[59]根據(jù)[58]所述的方法，其中所述多肽包含seq?id?no:1所示的氨基酸序列，其一個或多個氨基酸殘基經(jīng)工程化。

82、[60]根據(jù)[58]或[59]所述的方法，其中所述多肽包含seq?id?no:8所示的氨基酸序列的多肽。

83、[61]根據(jù)[58]至[60]中任一項所述的方法，其中所述多肽包含除與seq?id?no:1所示的氨基酸序列具有90％或更高序列同一性的序列以外的氨基酸序列，其一個氨基酸殘基在n末端和c末端中的任一者或兩者處經(jīng)工程化。

84、[62]根據(jù)[58]至[61]中任一項所述的方法，其中所述多肽在n末端和c末端中的任一者或兩者處包含標簽序列。

85、[63]根據(jù)[58]至[62]中任一項所述的方法，其中所述多肽包含選自由在n末端和c末端中的任一者或兩者處的鏈霉親和素結合的肽標簽序列和his標簽序列組成的組中的一者或多者。

86、[64]根據(jù)[58]至[63]中任一項所述的方法，其中所述多肽的氨基酸殘基的數(shù)量為300個或更多且400個或更少。

87、[65]根據(jù)[1]至[64]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中獲得的沉淀物的純度為95摩爾％或更高。

88、[66]根據(jù)[1]至[65]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中獲得的沉淀物的表觀純度為95％或過更高。

89、[67]根據(jù)[1]至[66]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中獲得的沉淀物中的雜質(zhì)的含量百分比為5摩爾％或更低。

90、[68]根據(jù)[1]至[67]中任一項所述的方法，其中在所述步驟(b)中獲得的沉淀物中的雜質(zhì)的表觀含量百分比為5％或更低。

91、[69]根據(jù)[1]至[68]中任一項所述的方法，其中所述待純化的混合物中的雜質(zhì)的含量百分比經(jīng)降低。

92、[70]根據(jù)[1]至[69]中任一項所述的方法，其中所述待純化的混合物中的雜質(zhì)的表觀含量百分比經(jīng)降低。

93、[71]根據(jù)[1]至[70]中任一項所述的方法，其中所述氨基酸的鹽或所述肽化合物的鹽或其溶劑化物是氨基酸的鋰鹽或肽化合物的鋰鹽或其溶劑化物。

94、[72]根據(jù)[1]至[71]中任一項所述的方法，其進一步包括將所述鋰鹽轉化為除所述鋰鹽以外的鹽的步驟。

95、[73]一種用于生產(chǎn)氨基酸或肽化合物、或其鹽、或其溶劑化物的方法，所述方法包括根據(jù)[1]至[72]中任一項所述的步驟。

96、[74]一種用于生產(chǎn)肽化合物、或其鹽、或其溶劑化物的方法，所述方法包括根據(jù)[1]至[73]中任一項所述的步驟。

97、[75]一種用于生產(chǎn)環(huán)狀肽化合物的方法，所述方法包括根據(jù)[1]至[74]中任一項所述的方法，并且包括使氨基酸或肽化合物、或其溶劑化物與氨基酸或肽化合物結合的步驟。

98、[76]根據(jù)[73]至[75]中任一項所述的方法，其包括將所述肽化合物或通過結合獲得的肽化合物環(huán)化的步驟。

99、[77]一種氨基酸的鋰鹽或肽化合物的鋰鹽或其溶劑化物，其中

100、所述氨基酸的鋰鹽含有純度為99摩爾％或更高或表觀純度為99％或更高的由通式(1)所表示的氨基酸的鋰鹽，并且

101、所述肽化合物的鋰鹽含有純度為99摩爾％或更高或表觀純度為99％的具有由通式(1)所表示的氨基酸的殘基的肽化合物的鋰鹽。

102、根據(jù)[77]所述的氨基酸的鋰鹽或肽化合物的鋰鹽或其溶劑化物，其中所述鋰鹽為晶體。

103、[發(fā)明的有益效果]

104、本發(fā)明可以提供一種用于獲得具有高純度的氨基酸的鹽或肽化合物的鹽或其溶劑化物的方法。