本發(fā)明提供了在實(shí)體腫瘤的治療中用于組合用途的raf抑制劑和mek抑制劑，并且基于識(shí)別某些可以作為對(duì)給定療法的響應(yīng)的預(yù)后標(biāo)志物的ras突變，一種用于識(shí)別本文所描述的患有實(shí)體腫瘤的患者對(duì)raf抑制劑(例如那波拉非尼或貝伐非尼)和mek抑制劑(例如曲美替尼或考比替尼)的組合治療的響應(yīng)的方法，相應(yīng)的治療方法和相關(guān)的發(fā)明方面或?qū)嵤┓桨冈谙挛闹性敿?xì)描述。特別地，本發(fā)明提供了用于治療具有ras密碼子q61突變或具有g(shù)13r突變的實(shí)體腫瘤的raf抑制劑和mek抑制劑的組合。在一個(gè)方面，待治療的實(shí)體腫瘤是具有ras密碼子q61突變或具有g(shù)13r突變的實(shí)體腫瘤，該實(shí)體腫瘤不是黑色素瘤，或不是nras突變型黑色素瘤。在另一個(gè)方面，待治療的實(shí)體腫瘤是具有ras密碼子q61突變或具有g(shù)13r突變的實(shí)體腫瘤，該實(shí)體腫瘤不是橫紋肌肉瘤。在另一個(gè)方面，待治療的實(shí)體腫瘤是具有nras中的密碼子q61突變的黑色素瘤或具有nras中的g13r突變的黑色素瘤。

背景技術(shù)：

1、ras突變型癌癥

2、ras是癌癥中突變最頻繁的基因家族。除了nras之外，kras和程度較小的hras原癌基因兩者在多種不同類型的人類癌癥中也經(jīng)常突變。ras突變的發(fā)生率在癌癥中差異很大；然而，kras中的激活突變?cè)诜伟⒔Y(jié)直腸癌和胰腺癌中很常見(cox等人2014；nat.rev.drugdiscov.13,828–851)。

3、在絕大多數(shù)情況下，kras、nras和hras基因中的激活突變改變各自蛋白質(zhì)中的氨基酸g12、g13和q61。然而，每種氨基酸改變有的頻率、特定的氨基酸取代以及改變哪種ras旁系同源物在不同的癌癥類型之間差異顯著。例如，在肺腺癌中，g12c變體代表＞40％的總ras變體，而g12c分別代表結(jié)直腸癌和胰腺癌中發(fā)現(xiàn)的kras變體的約6％和2％(cook等人2021)。一些該kras變體失衡源于組織類型之間的誘變壓力差異(例如肺癌中的吸煙)。然而，單獨(dú)誘變壓力差異似乎并不能解釋大部分這些等位基因失衡，表明不同的ras變體可具有獨(dú)特的與不同癌癥類型的病因交叉的生物學(xué)特性(cook等人2021)。

4、盡管ras是癌癥中最常見的突變基因家族并且與不良結(jié)局有關(guān)的事實(shí)，但目前只有一種靶向ras突變的獲批療法。索托拉西布，一種kras?g12c抑制劑，在含有kras密碼子g12c突變的局部晚期或轉(zhuǎn)移性nsclc患者中表現(xiàn)出抗癌活性，并于2021年獲得fda的加速批準(zhǔn)。對(duì)于其他實(shí)體腫瘤類型和ras變體，對(duì)于在可用的標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理下進(jìn)展的晚期癌癥患者，或沒有可用的標(biāo)準(zhǔn)治療選擇的患者，仍然存在巨大的未滿足需求。

5、黑色素瘤

6、黑色素瘤是所有皮膚癌中最具侵襲性的一種。全球黑色素瘤發(fā)生率約為每年324,635例新病例，死亡人數(shù)為57,043人(sung等人2020；global?cancer?statistics?2020:globocan?estimates?of?incide?nce?and?mortality?worldwide?for?36cancers?in185countries.可得于：https://doi.org/10.3322/caac.21660(2021年8月2日獲取))。在40歲以下患者的癌癥中，黑色素瘤的發(fā)生率僅次于女性乳腺癌和男性前列腺癌。大多數(shù)黑色素瘤患者在早期就被診斷出來，在其中手術(shù)切除可以治愈，具有極高生存率(5年約90％)。相比之下，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的預(yù)后非常差，5年生存率約為27％(american?cancer?society?2021；cancer?facts?and?figures?2021.acs網(wǎng)址https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/cutaneous_melanoma.pdf.2021年出版)。

7、對(duì)于無法切除或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的主要全身療法包括抗程序性細(xì)胞死亡蛋白質(zhì)-1(抗pd-1)單藥療法(即納武單抗或派姆單抗)或抗pd-1組合抗ctla-4療法(即伊匹單抗)。對(duì)于發(fā)生在約40-60％的病例中的含有braf?v600突變的黑色素瘤患者(robert等人2019；the?lancet?oncology,第20卷,第9期,keynote-006)，治療還包括用braf抑制劑組合mek抑制劑(例如達(dá)拉非尼和曲美替尼)的靶向療法(nccn?melanoma第2版2021，https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/colon.pdf；esmoguidelines?michielin等人2019；ann?oncol；30(12):1884-1901)。

8、除braf突變外，黑色素瘤中第二常見的絲裂原激活蛋白質(zhì)激酶(mapk)通路異常是nras突變。與其他黑色素瘤亞型相比，具有nras突變的黑色素瘤與較差預(yù)后相關(guān)(devitt等人2011)。

9、nras的選擇性藥劑抑制在技術(shù)上仍然具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)槠駷橹?，其gtpase活性使得特定的小分子拮抗劑的成功設(shè)計(jì)尚未實(shí)現(xiàn)。目前正在進(jìn)行多項(xiàng)臨床試驗(yàn)以評(píng)估組合nras下游分子的抑制劑的替代策略，例如braf和mek抑制劑組合以及pi3k通路抑制劑與抑制erk通路的藥物的組合。這些不同方法的療效尚未確定。

10、事實(shí)上，目前還沒有針對(duì)nras突變黑色素瘤的靶向療法獲得批準(zhǔn)，且轉(zhuǎn)移性疾病患者通常接受抗pd-1單藥療法或抗pd-1組合抗ctla4(伊匹單抗)作為一線治療。此外，lag-3阻斷抗體瑞拉利單抗組合抗pd-1最近在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的3期試驗(yàn)中顯示出相比抗pd-1單藥療法的統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的pfs益處。如果獲得衛(wèi)生部門批準(zhǔn)，該方案可成為該患者群體的新標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理。對(duì)于患有nras突變型不可切除或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的對(duì)pd-1抑制劑(具有或不具有伊匹單抗)有進(jìn)展或難治性的患者，目前尚無既定的標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理。

11、目前的nccn指南對(duì)既往抗pd(l)1失敗的轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者建議了多種全身療法用于二線及后續(xù)多線療法，作為單藥療法或與伊匹單抗組合，包括伊匹單抗單藥療法、高劑量il-2和細(xì)胞毒性藥劑如達(dá)卡巴嗪、白蛋白結(jié)合型紫杉醇、替莫唑胺或紫杉醇加卡鉑(nccn，同上)。esmo指南承認(rèn)二線nras突變轉(zhuǎn)移性黑色素瘤治療選擇非常有限。建議包括使用mek抑制劑治療(盡管已知活性有限)、納入臨床試驗(yàn)或免疫療法再激發(fā)(例如如果之前未使用過伊匹單抗)。如果沒有可用的臨床試驗(yàn)或新化合物，則可以施用諸如達(dá)卡巴嗪或替莫唑胺的細(xì)胞毒性藥物(esmo指南michielin等人2019，同上)。

12、在一項(xiàng)162名患者中的回顧性研究中評(píng)估了作為單藥療法的伊匹單抗，所述患者具有不可切除iii/iv期轉(zhuǎn)移性黑色素瘤，無論突變狀態(tài)如何均對(duì)抗pd(l)-1療法具有耐藥性，并且顯示了13％的有限客觀響應(yīng)率(orr)，中位無進(jìn)展生存期(pfs)為2.6個(gè)月，并且中位總生存期(mos)為8.8個(gè)月(da?silva等人2021；lancet?oncol；22(6)：836-847)–兩項(xiàng)較小的回顧性研究也觀察到伊匹單抗單藥療法的療效有限。一項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照的3期研究在402名nras突變黑色素瘤患者中比較性地評(píng)估了達(dá)卡巴嗪與mek抑制劑貝美替尼，包括未治療的患者(～79％)和之前免疫療法治療過的患者(～21％)。orr分別為7％相比于15％，mpfs分別為1.7個(gè)月相比于2.8個(gè)月，mos分別為10.1個(gè)月相比于11個(gè)月(dummer等人2017；lancetoncol?2017；18:435-45)。其他治療僅顯示出有限的成功。

13、缺乏標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理和獲批療法，加上可用療法的療效有限，凸顯了nras突變黑色素瘤患者尚未得到滿足的醫(yī)療需求，并且尤其是nras突變型不可切除或轉(zhuǎn)移性皮膚黑色素瘤。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明現(xiàn)在提供了一種治療具有除kras?g12之外的ras中的突變(例如除krasg12c之外和/或除kras?g12d之外)的實(shí)體腫瘤的方法。

2、現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，ras密碼子q61的突變和/或ras?g31r的突變，無論突變發(fā)生在hras、kras或nras中，可預(yù)測(cè)含有所述突變的實(shí)體腫瘤對(duì)raf抑制劑和mek抑制劑組合治療的響應(yīng)。這一發(fā)現(xiàn)因此提供任何腫瘤，特別是實(shí)體腫瘤的治療，只要該腫瘤含有ras密碼子q61突變或特別是ras?g13r突變，從而可以滿足重大需求，提供預(yù)測(cè)對(duì)治療的響應(yīng)和治療已識(shí)別腫瘤的精確方法。因此，待治療的腫瘤不必是器官或組織特異性的(例如肺癌或胰腺癌或結(jié)直腸癌或乳腺癌)。

3、換言之，無論突變發(fā)生在hras、kras或nras中，在腫瘤中或在從患有腫瘤的患者獲得的腫瘤樣本中，也無論從患有腫瘤(例如實(shí)體腫瘤)的患者獲得的樣本中腫瘤的組織來源，ras密碼子q61的突變和/或ras?g31r的突變的檢測(cè)和存在，允許對(duì)患有這種腫瘤的患者是否會(huì)受益并因此響應(yīng)于raf抑制劑和mek抑制劑的組合治療(例如，那波拉非尼和曲美替尼的組合，或貝伐非尼和考比替尼(cobinmetinib)的組合)做出預(yù)后。因此，本發(fā)明提供了對(duì)含有這種突變的實(shí)體腫瘤的治療。

4、通過對(duì)來自那波拉非尼與其他作用于mpak通路的藥劑的臨床研究的臨床前數(shù)據(jù)以及過去和現(xiàn)在的新興臨床研究數(shù)據(jù)的全新且深入的分析回顧發(fā)現(xiàn)，raf抑制劑和mek抑制劑的組合可對(duì)治療患有泛ras密碼子q61或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者特別有益。

5、例如，腫瘤中含有kras密碼子q61或g13r突變的非小細(xì)胞肺癌(nsclc)患者有四分之三對(duì)那波拉非尼和曲美替尼組合的治療有響應(yīng)，而腫瘤中含有除密碼子q61或g13r突變以外的kras突變的nsclc患者為43分之1。此外，來自lxh254首次人體研究(clxh254x2101)的臨床數(shù)據(jù)顯示，含有泛ras密碼子q61或g13r突變的實(shí)體腫瘤(唾液腺腫瘤和nsclc)患者被發(fā)現(xiàn)是對(duì)lxh254單一藥劑療法極好的響應(yīng)者。此外，非臨床模型已顯示lxh254作為單一藥劑或組合曲美替尼在各種腫瘤類型(nsclc、黑色素瘤、pdac、橫紋肌肉瘤)的泛ras密碼子q61/g13r突變型模型中具有一致的活性，與特定的突變r(jià)as基因(泛ras)和腫瘤的組織來源(泛組織)無關(guān)。總體而言，這些數(shù)據(jù)的總和表明泛ras密碼子q61/g13r突變可代表對(duì)raf抑制劑和mek抑制劑組合的響應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。

6、該數(shù)據(jù)，連同臨床前證據(jù)，以及使用另一種raf抑制劑貝伐非尼的臨床數(shù)據(jù)，合理化了密碼子q61/g13r(泛)ras突變作為對(duì)raf抑制劑(如那波拉非尼或貝伐非尼)和mek抑制劑(如曲美替尼或考比替尼)組合的組合的響應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。

7、此外，在諾華(novartis)進(jìn)行的分子動(dòng)力學(xué)模擬分析中，發(fā)現(xiàn)g13r與q61重疊且動(dòng)力學(xué)行為相似，并可能采用與q61相似的構(gòu)象。因此，ras基因中的突變r(jià)as?q61和g13r，無論是從hras、kras、nras基因中選擇的ras基因及其組合都是允許識(shí)別強(qiáng)烈依賴mapk且可能受益于組合療法的腫瘤亞型的合適的生物標(biāo)志物。一旦mapk通路被激活，raf的同源或異源二聚體激活mek1和mek2，它們是主要的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)節(jié)點(diǎn)。鑒于raf和mek在同一通路中垂直整合，這兩個(gè)節(jié)點(diǎn)的組合抑制可提供更有效的該通路的抑制并延緩耐藥性的產(chǎn)生。

8、因此本發(fā)明的基礎(chǔ)是通過使用ras密碼子q61或特別是ras?g13r突變作為針對(duì)可通過raf抑制劑和mek抑制劑組合治療的實(shí)體腫瘤的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，可以選擇和治療含有這種突變的腫瘤患者。本文發(fā)現(xiàn)g13r突變是一種重要的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。

9、本發(fā)明因此提供了以下實(shí)施方案：

10、實(shí)施方案1。一種選擇性治療患有實(shí)體腫瘤的患者的方法，包括基于腫瘤具有ras密碼子q61突變或g13r突變選擇性地向患者施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

11、實(shí)施方案2。一種使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合選擇性治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的方法，包括：

12、a)基于腫瘤具有ras密碼子q61突變或g13r突變選擇使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療的患者；以及

13、b)此后，向患者施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

14、實(shí)施方案3。一種選擇性治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的方法，包括：

15、a)針對(duì)實(shí)體腫瘤中ras密碼子q61突變或g13r突變的存在對(duì)患者的生物樣本或腫瘤樣本進(jìn)行測(cè)定；以及

16、b)此后，選擇性地向患者施用以下任一種：

17、i.當(dāng)存在ras密碼子q61突變或g13r突變時(shí)，施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合；或

18、ii.基于在患者的生物或腫瘤樣本中不存在或未檢測(cè)到ras密碼子q61突變或g13r突變，施用治療有效量的除raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合之外的藥物。

19、實(shí)施方案4。使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合選擇性治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的方法，包括：

20、a)針對(duì)ras密碼子q61突變或g13r突變的存在對(duì)患者的生物樣本或腫瘤樣本進(jìn)行測(cè)定；

21、b)隨后，基于具有ras密碼子q61突變或g13r突變的患者的生物或腫瘤樣本選擇使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療的患者；以及

22、c)隨后，向患者施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

23、實(shí)施方案5。根據(jù)實(shí)施方案3或4中任一項(xiàng)的方法，其中生物樣本選自滑液、血液、血清、糞便、血漿、尿液、淚液、唾液、腦脊液、白細(xì)胞樣本和腫瘤樣本(也稱為腫瘤活檢)。

24、實(shí)施方案6。根據(jù)實(shí)施方案3-5中任一項(xiàng)的方法，其中測(cè)定步驟包括選自northern印跡分析、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(rt-pcr)、基于taqman的測(cè)定、直接測(cè)序、動(dòng)態(tài)等位基因特異性雜交、高密度寡核苷酸snp陣列、限制性片段長度多態(tài)性(rflp)測(cè)定、引物延伸測(cè)定、寡核苷酸連接酶測(cè)定、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、溫度梯度凝膠電泳(tgge)、變性高效液相色譜、高分辨率熔解分析、dna錯(cuò)配結(jié)合蛋白質(zhì)測(cè)定、毛細(xì)管電泳、southern印跡、免疫測(cè)定、免疫組織化學(xué)、elisa、流式細(xì)胞術(shù)、western印跡、hplc和質(zhì)譜的技術(shù)。

25、實(shí)施方案7。用于治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合，特征在于在所述患者患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的基礎(chǔ)上向患者施用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

26、實(shí)施方案8。用于治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合，包括a)對(duì)患者的樣本進(jìn)行測(cè)定，

27、b)確定樣本是否顯示存在具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤，以及

28、c)如果存在ras密碼子q61突變或g13r突變，則向患者施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

29、實(shí)施方案9。用于治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合，特征在于：

30、a)基于患者患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤選擇用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合進(jìn)行治療的患者；以及

31、b)此后，向患者施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

32、實(shí)施方案10。用于治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合，特征在于：

33、a)對(duì)患者的生物樣本進(jìn)行具有ras密碼子q61突變或g13r突變的測(cè)定；以及

34、b)基于具有ras密碼子q61突變或g13r突變的患者的生物樣本選擇性地向患者施用治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合。

35、實(shí)施方案11。用于治療患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合，特征在于：

36、a)對(duì)患者的生物樣本或腫瘤樣本針對(duì)ras密碼子q61突變或g13r突變的存在進(jìn)行測(cè)定；

37、b)基于具有ras密碼子q61突變或g13r突變的患者的生物樣本選擇用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療的患者；以及

38、c)將治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合選擇性地施用于患者。

39、實(shí)施方案12。一種預(yù)測(cè)患有具有ras密碼子q61突變或g13r突變的實(shí)體腫瘤的患者對(duì)使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療將有響應(yīng)的可能性的方法，包括針對(duì)具有ras密碼子q61突變或g13r突變的存在或缺失對(duì)患者的生物樣本或腫瘤樣本進(jìn)行測(cè)定，其中：

40、a)存在ras密碼子q61突變或g13r突變表明患者對(duì)raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療將有響應(yīng)的可能性增加；以及

41、b)不存在具有ras密碼子q61突變或g13r突變表明患者對(duì)raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療將有響應(yīng)的可能性減少。

42、實(shí)施方案13。根據(jù)實(shí)施方案12的方法，還包括獲取患者的生物樣本的步驟，其中獲取步驟在檢測(cè)步驟之前進(jìn)行。

43、實(shí)施方案14。根據(jù)實(shí)施方案12-13中任一項(xiàng)的方法，其中生物樣本選自滑液、血液、血清、糞便、血漿、尿液、淚液、唾液、腦脊液、白細(xì)胞樣本、組織樣本和腫瘤樣本。

44、實(shí)施方案15。根據(jù)實(shí)施方案12-14中任一項(xiàng)的方法，其中測(cè)定步驟包括選自northern印跡分析、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(rt-pcr)、基于taqman的測(cè)定、直接測(cè)序、動(dòng)態(tài)等位基因特異性雜交、高密度寡核苷酸snp陣列、限制性片段長度多態(tài)性(rflp)測(cè)定、引物延伸測(cè)定、寡核苷酸連接酶測(cè)定、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、溫度梯度凝膠電泳(tgge)、變性高效液相色譜、高分辨率熔解分析、dna錯(cuò)配結(jié)合蛋白質(zhì)測(cè)定、毛細(xì)管電泳、southern印跡、免疫測(cè)定、免疫組織化學(xué)、elisa、流式細(xì)胞術(shù)、western印跡、hplc和質(zhì)譜中的技術(shù)。

45、實(shí)施方案16。一種用于產(chǎn)生預(yù)測(cè)患有實(shí)體腫瘤的患者對(duì)使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療的響應(yīng)的可傳輸形式的信息的方法，包括：

46、a)基于腫瘤中ras密碼子q61突變或g13r突變的存在確定患者對(duì)使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療有響應(yīng)的可能性增加；以及

47、b)將確定步驟的結(jié)果記錄在有形或無形媒體形式上以用于傳輸?shù)挠猛尽?/p>

48、實(shí)施方案17。一種用于預(yù)測(cè)患有實(shí)體腫瘤的患者對(duì)使用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療將有響應(yīng)的可能性的用途的試劑盒，包括：

49、a)至少一種能夠檢測(cè)存在具有ras密碼子q61突變或g13r突變的探針；以及

50、b)使用探針測(cè)定患者的生物樣本中ras密碼子q61突變或g13r突變的存在的說明，其中存在ras密碼子q61突變或g13r突變表明患者對(duì)raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療將有響應(yīng)的可能性增加，而不存在ras密碼子q61突變或g13r突變則表明患者對(duì)raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合治療將有響應(yīng)的可能性減少。

51、實(shí)施方案18。一種用于治療患有實(shí)體腫瘤的患者的用途的試劑盒，包括：

52、a)治療有效量的raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合；

53、b)至少一種能夠檢測(cè)實(shí)體腫瘤中ras密碼子q61突變或g13r突變的存在的探針；

54、c)使用探針對(duì)患者的生物樣本或腫瘤樣本中ras密碼子q61突變或g13r突變的存在進(jìn)行測(cè)定的說明，

55、d)如果患者的生物樣本或腫瘤樣本表明存在ras密碼子q61突變或g13r突變則向患者施用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合的說明；以及

56、e)可選地，向患者施用raf抑制劑和mek抑制劑的藥劑組合的手段。

57、實(shí)施方案19。根據(jù)實(shí)施方案17或18中任一項(xiàng)的試劑盒，其中探針是特異性雜交到編碼ras密碼子q61突變或g13r突變的核酸區(qū)域的寡核苷酸、檢測(cè)ras密碼子q61突變或g13r突變的多肽產(chǎn)物的抗體、或特異性雜交到編碼ras密碼子q61突變或g13r突變的等效遺傳標(biāo)志物的核酸區(qū)域的寡核苷酸。

58、在上述實(shí)施方案中，具有ras密碼子q61突變或具有g(shù)13r突變的實(shí)體腫瘤可以選自：

59、非黑色素瘤或非nras突變型黑色素瘤的實(shí)體腫瘤；

60、非橫紋肌肉瘤的實(shí)體腫瘤；

61、為具有nras中的密碼子q61突變的黑色素瘤或具有nras中的g13r突變的黑色素瘤的實(shí)體腫瘤；

62、選自非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、甲狀腺癌和結(jié)直腸癌的實(shí)體腫瘤。