本發(fā)明涉及機械工業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種用于細胞體外培養(yǎng)的管路。

背景技術(shù)：

msc(mesenchymalstemcells，間充質(zhì)干細胞)細胞、nk(naturalkillercell，自然殺傷細胞)、car-t(chimericantigenreceptort-cell，嵌合抗原受體t細胞)細胞等需采用分離培養(yǎng)罐進行培養(yǎng)，然而細胞在培養(yǎng)罐過程中需多次分離培養(yǎng)罐中添加液體，增大細胞于培養(yǎng)過程中受污染的風(fēng)險。

因此，如何使細胞在利用分離培養(yǎng)罐于體外培養(yǎng)時因向分離培養(yǎng)罐中添加液體等而遭受污染，是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供一種管路，其具有蠕動泵，能夠使用于添加至上述分離培養(yǎng)罐的液體由該管路輸送，避免在添加液體的過程中污染分離培養(yǎng)罐內(nèi)的細胞。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種用于細胞體外培養(yǎng)的管路，包括：

第一管，所述第一管的第一端設(shè)有多個第一輸入支路，且各所述第一輸入支路上分別設(shè)有管壓閥；

第二管，所述第二管的第一端連接蠕動泵；

第三管，所述第三管將所述蠕動泵連接至分離培養(yǎng)罐；

第四管，所述第四管的第一端設(shè)有多個第二輸入支路，且各所述第二輸入支路上分別設(shè)有管壓閥；

其中，所述第一管的第二端、所述第二管的第二端和所述第四管的第二端連通。

優(yōu)選的，上述管路中，還包括：

第五管，所述第五管的第一端連接于所述第三管，第二端與所述第一管的第二端、所述第二管的第二端以及所述第四管的第二端連通；

第六管，所述第六管的第一端與所述第三管連通，且該第一端位于所述第五管和所述蠕動泵之間；所述第六管的第二端設(shè)有多個輸出支路；

第七管，所述第七管的兩端分別與所述第六管和所述第四管連通；

第八管，所述第八管的兩端分別連通所述第三管和所述第七管；

第九管，所述第九管的兩端分別連通所述第三管和所述第八管，且所述第九管上設(shè)有計數(shù)池；所述第八管和所述第九管連通于所述第三管的端部分別位于所述第六管和所述蠕動泵之間，且所述第八管連通于所述第三管的端部位于所述蠕動泵和所述第九管上連通于所述第三管的端部之間；

第十管，所述第十管的兩端分別連通一個所述第二輸入支路和一個所述輸出支路。

優(yōu)選的，上述管路中，所述第三管上設(shè)有兩個管壓閥，其中，一個管壓閥位于所述第八管和第九管之間；另一個管壓閥位于所述第五管和所述第六管之間。

優(yōu)選的，上述管路中，所述第五管上設(shè)有管壓閥。

優(yōu)選的，上述管路中，所述第四管上設(shè)有管壓閥，且該管壓閥位于所述第四管的第二端和所述第七管之間；所述第七管位于所述第四管的第二端和所述第四管上設(shè)置所述第二輸入支路的部位之間。

優(yōu)選的，上述管路中，所述第七管上設(shè)有管壓閥，且該管壓閥位于所述第八管和所述第六管之間；所述第八管上設(shè)有管壓閥，且該管壓閥位于所述第九管和所述第七管之間。

優(yōu)選的，上述管路中，所述第六管上設(shè)有管壓閥，且該管壓閥位于所述第六管的第一端和所述第七管之間，所述第七管連通于所述第六管的主干部位。

優(yōu)選的，上述管路中，所述第十管上設(shè)有磁分選部件；與所述第十管連通的所述第二輸入支路上設(shè)有兩個管壓閥，所述第十管連通于該第二輸入支路上兩個管壓閥之間的部位；與所述第十管連通的所述輸出支路上設(shè)有兩個管壓閥，所述第十管連通于該輸出支路上兩個管壓閥之間的部位。

本發(fā)明提供一種管路，其包括第一管、第二管、第三管、第三管和第四管；第一管的第一端設(shè)有多個第一輸入支路，且各第一輸入支路上分別設(shè)有管壓閥；第二管的第一端連接蠕動泵；第三管將蠕動泵連接至分離培養(yǎng)罐；第四管的第一端設(shè)有多個第二輸入支路，且各第二輸入支路上分別設(shè)有管壓閥；第一管的第二端、第二管的第二端和第四管的第二端連通。

應(yīng)用上述管路時，將各第一輸入支路和第二輸入支路分別連接于盛裝有待輸入分離培養(yǎng)罐的物質(zhì)的容置袋，然后根據(jù)需要打開蠕動和相應(yīng)的管壓閥即可向分離培養(yǎng)罐中加入所需物質(zhì)。

顯然，本發(fā)明提供的管路能夠輸送用于添加至分離培養(yǎng)罐中的物質(zhì)，輸入過程中與外界環(huán)境無接觸，能夠避免在添加過程中污染分離培養(yǎng)罐內(nèi)的細胞。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實施例提供的管路的結(jié)構(gòu)示意圖；

上圖1中：

容置袋01；分離培養(yǎng)罐02；混合氣體盛裝瓶03；第一管101；第二管102；第三管103；第四管104；第五管105；第六管106；第七管107；第八管108；第九管109；第十管110；第十一管111。

具體實施方式

本發(fā)明實施例公開了一種管路，其具有蠕動泵，能夠使用于添加至上述分離培養(yǎng)罐的液體由該管路輸送，避免在添加液體的過程中污染分離培養(yǎng)罐內(nèi)的細胞。

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

請參閱圖1，本發(fā)明實施例提供一種管路，其包括第一管101、第二管102、第三管103、第三管103和第四管104；第一管101的第一端設(shè)有多個第一輸入支路，且各第一輸入支路上分別設(shè)有管壓閥；第二管102的第一端連接蠕動泵；第三管103將蠕動泵連接至分離培養(yǎng)罐02；第四管104的第一端設(shè)有多個第二輸入支路，且各第二輸入支路上分別設(shè)有管壓閥；第一管101的第二端、第二管102的第二端和第四管104的第二端連通。上述第一輸入支路和第二輸入支路分別用于連接容置袋01，該容置袋01為盛裝有待輸入分離培養(yǎng)罐02的物質(zhì)的容置袋01。

應(yīng)用上述管路時，將各第一輸入支路和第二輸入支路分別連接于盛裝有待輸入分離培養(yǎng)罐02的物質(zhì)的容置袋01，然后根據(jù)需要打開蠕動和相應(yīng)的管壓閥即可向分離培養(yǎng)罐02中加入所需物質(zhì)。

顯然，本發(fā)明提供的管路能夠輸送用于添加至分離培養(yǎng)罐02中的物質(zhì)，輸入過程中與外界環(huán)境無接觸，能夠避免在添加過程中污染分離培養(yǎng)罐02內(nèi)的細胞。

由于細胞利用分離培養(yǎng)罐02進行體外培養(yǎng)時不僅需需要輸入物質(zhì)，還需排出廢液等，并且在不同的階段需排出分離培養(yǎng)罐02進行分選、質(zhì)量監(jiān)測等，為了進一步避免細胞在排出廢液等物質(zhì)以及于分離培養(yǎng)罐02和磁分選部件等之間進行流轉(zhuǎn)時受污染，上述管路還包括：

第五管105述第五管105的第一端連接于所述第三管103，第二端與第一管101的第二端、第二管102的第二端以及第四管104的第二端連通；

第六管106，第六管106的第一端與第三管103連通，且該第一端位于第五管105和蠕動泵之間；第六管106的第二端設(shè)有多個輸出支路；

第七管107，第七管107的兩端分別與第六管106和第四管104連通；

第八管108，第八管108的兩端分別連通第三管103和第七管107；

第九管109，第九管109的兩端分別連通第三管103和第八管108，且第九管109上設(shè)有計數(shù)池；第八管108和第九管109連通于第三管103的端部分別位于第六管106和蠕動泵之間，且第八管108連通于第三管103的端部位于蠕動泵和第九管109上連通于第三管103的端部之間；

第十管110，第十管110的兩端分別連通一個第二輸入支路和一個輸出支路。

具體的，第三管103上設(shè)有兩個管壓閥14、15，其中，一個管壓閥15位于第八管108和第九管109之間；另一個管壓閥14位于第五管105和第六管106之間。第五管105上設(shè)有管壓閥8。

第四管104上設(shè)有管壓閥9，且該管壓閥9位于第四管104的第二端和第七管107之間；第七管107位于第四管104的第二端和第四管104上設(shè)置第二輸入支路的部位之間，即第氣管連接于第四管104的主干部位，上述第二輸入支路為第四管104的分支部位。

第七管107上設(shè)有管壓閥12，且該管壓閥12位于第八管108和第六管106之間；所述第八管108上設(shè)有管壓閥11，且該管壓閥11位于第九管109和第七管107之間。

第六管106上設(shè)有管壓閥13，且該管壓閥13位于第六管106的第一端和第七管107之間，第七管107連通于第六管106的第一端和第六管106上設(shè)置輸出支路的部位之間，即第七管107連接于第六管106的主干部位，上述輸出支路為第六管106的分支部位。

第十管110上設(shè)有磁分選部件；與第十管110連通的第二輸入支路上設(shè)有兩個管壓閥7、10，第十管110連通于該第二輸入支路上兩個管壓閥7和10之間的部位；與第十管110連通的輸出支路上設(shè)有兩個管壓閥18、21，第十管110連通于該輸出支路上兩個管壓閥18和21之間的部位。與第十管110連通的第二輸入支路用于連接盛裝分選磁珠的容置袋01，與第十管110連通的輸出支路用于連接盛裝終產(chǎn)品細胞的容置袋01。

上述第一輸入支路為5個，第二輸入支路為2個，輸出支路為4個。上述管路還包括第十一管111，第十一管111的第一端連通第三管103，并位于分離培養(yǎng)罐02和第五管105之間；第十一管111的第二端用于連通混合氣體盛裝瓶03。上述第三管103上設(shè)有位于分離培養(yǎng)罐02和第十一管111之間的顏色傳感器和第一氣泡傳感器；第三管103上還設(shè)有壓力傳感器，壓力傳感器位于蠕動泵和第八管108之間；第九管109上設(shè)有第三汽包傳感器，第三氣泡傳感器位于第三管103和計數(shù)池之間；與第十管110連通的第二輸入支路上設(shè)有第四氣泡傳感器，第四氣泡傳感器位于管壓閥7和第十管110之間。

優(yōu)選的，上述管路中，各管分別為透明管，且各管分別為經(jīng)過殺菌消毒處理的無菌管。

應(yīng)用上述管路時，將各輸入支路和輸出支路分配連接與之配合的容置袋01，然后根據(jù)細胞培養(yǎng)進程的需要開閉相應(yīng)的管壓閥和蠕動泵即可完成相應(yīng)操作，使細胞培養(yǎng)的整個過程中不接觸外界環(huán)境。具體的，上述各容置袋01可設(shè)置為與管路為分體，優(yōu)選設(shè)置為一體式結(jié)構(gòu)，無需額外裝配，方便使用。

上述管路能夠用于制備msc(mesenchymalstemcells，間充質(zhì)干細胞)細胞、nk(naturalkillercell，自然殺傷細胞)細胞以及car-t(chimericantigenreceptort-cell，嵌合抗原受體t細胞)細胞等，下面以制備msc細胞為例具體介紹：

先確保各管壓閥處于關(guān)閉狀態(tài)，并使設(shè)有管壓閥1的第一輸入支路連接盛有生理鹽水的容置袋，使設(shè)有管壓閥2的第一輸入支路連接盛有細胞樣品的容置袋，使設(shè)有管壓閥3的第一輸入支路連接盛有分離液的容置袋，使設(shè)有管壓閥4的第一輸入支路連接盛有培養(yǎng)基的容置袋，使設(shè)有管壓閥5的第一輸入支路連接盛有微載體的容置袋，使設(shè)有管壓閥6的第二輸入支路連接盛有消化酶的容置袋，使設(shè)有管壓閥7的第二輸入支路連接盛有磁珠的容置袋；使設(shè)有管壓閥17的輸出支路連接用于盛裝廢液的容置袋，使設(shè)有管壓閥19的輸出支路連接用于中轉(zhuǎn)的容置袋，使設(shè)有管壓閥20的輸出支路連接用于盛裝非目的細胞的容置袋，使設(shè)有管壓閥21的輸出支路連接用于盛裝非目的細胞的容置袋；

然后對整個管路預(yù)沖，排出管路中大部分空氣：打開蠕動泵和管壓閥1、15、14，以將鹽水從物料袋加至分離培養(yǎng)罐02，分離培養(yǎng)罐02啟動低速到高速離心運轉(zhuǎn)一段時間，讓生理鹽水和部分空氣進入分離培養(yǎng)罐02；關(guān)閉蠕動泵、分離培養(yǎng)罐02、所有管壓閥，然后再開蠕動泵和管壓閥1、15、13、12、10、18、17，運行一段時間，讓鹽水和部分空氣進入廢液袋；關(guān)閉蠕動泵、所有管壓閥，然后再開蠕動泵和管壓閥8、9、11、13、17，讓分離培養(yǎng)罐02的鹽水和空氣進入廢液袋。

再對細胞進行分離：開蠕動泵和管壓閥2、15、14，將樣本從物料袋全部加至分離培養(yǎng)罐02，關(guān)管壓閥2，開管壓閥1，將殘留在管中的樣本用鹽水沖進分離培養(yǎng)罐02；啟動蠕動泵，開管壓閥3、15、14，加入等體積的淋巴細胞分離液，充分混勻；啟動分離培養(yǎng)罐02離心分離細胞，分層完畢后，啟動蠕動泵，開管壓閥8、11、12、19，抽取分層界面上的部分至用于中轉(zhuǎn)的容置袋中；上述動作完成后，開管壓閥1、11、12、19，將管路中細胞沖洗到中轉(zhuǎn)袋，以防止浪費細胞。

之后進行細胞分選：啟動蠕動泵，開管壓閥8、11、12、17，抽取分離培養(yǎng)罐02中其他廢棄液體至廢棄液容置袋；啟動蠕動泵，開管壓閥1、15、14，用生理鹽水沖洗分離培養(yǎng)罐02，分離培養(yǎng)罐02啟動，關(guān)蠕動泵和管壓閥，清洗完畢后開蠕動泵以及管壓閥8、11、12、17，將沖洗液抽取至廢液容置袋；開蠕動泵，管壓閥19、12、9、15、14，將中轉(zhuǎn)容置袋內(nèi)細胞抽回分離培養(yǎng)罐02；啟動蠕動泵，開管壓閥1、15、14，向分離培養(yǎng)罐02室中加生理鹽水進行細胞洗滌，之后啟動蠕動泵，開管壓閥8、11、12、17，將廢棄上清液抽至廢棄液容置袋；啟動分離培養(yǎng)罐02運轉(zhuǎn)將細胞混勻，然后開啟蠕動泵，開管壓閥8、13、19，讓細胞進入計數(shù)池進行檢測；

啟動蠕動泵，開管壓閥7、10、9、15、14，加入帶抗體的磁珠混勻后孵育15min；為避免浪費開管壓閥1、15、14放入少量鹽水沖洗管路；孵育完畢后啟動蠕動泵，開管壓閥1、15、14，加入鹽水洗滌細胞，啟動離心功能；之后啟動蠕動泵，開管壓閥8、11、12、17，將廢棄上清液抽至廢棄液袋，除去未結(jié)合的磁珠；再加入生理鹽水混勻洗滌后，開啟磁場進行分選，啟動蠕動泵，開管壓閥14、15、9、10、18、20，將非目的細胞洗脫至非目的細胞容置袋；分選完畢后，移去磁場，啟動蠕動泵，開管壓閥1、11、10、18、13、14，用鹽水對分選柱進行洗脫，獲得目的細胞并移至分離培養(yǎng)罐02；

啟動分離培養(yǎng)罐02運轉(zhuǎn)將細胞混勻，然后開啟蠕動泵，開管壓閥8、13、19，讓細胞進入計數(shù)池進行檢測；

再貼覆微載體：啟動蠕動泵，開啟4、15、14以向分離培養(yǎng)罐02中輸入培養(yǎng)基，開啟5、15、14以向分離培養(yǎng)罐02中輸入微載體，以使細胞貼覆微載體生長；

再進行細胞擴增：每隔預(yù)設(shè)時間開啟蠕動泵，管壓閥8、13、19，以對細胞進行計數(shù)檢測，并根據(jù)檢測結(jié)果進行如下操作：開啟蠕動泵，管壓閥8、11、12、17，以將廢液抽至廢液容置袋；開啟蠕動泵，管壓閥4、15、14，以將培養(yǎng)基加入分離培養(yǎng)罐02；

最后收獲msc細胞，進行洗滌、包裝：開啟蠕動泵，開管壓閥8、11、12、17，抽取上清液至廢液袋；啟動蠕動泵，開管壓閥1、15、14，以向分離培養(yǎng)罐02中加入生理鹽水洗滌msc細胞；啟動蠕動泵，開管壓閥8、11、12、17，將廢棄上清液抽至廢棄液容置袋；啟動蠕動泵，開管壓閥6、9、15、14以向分離培養(yǎng)罐02中加入消化酶，使msc細胞與微載體脫離；開啟蠕動泵，開管壓閥8、11、12、19，將細胞轉(zhuǎn)移至中轉(zhuǎn)袋，然后開管壓閥1、15、14，加入鹽水再次洗滌，開啟管壓閥8、11、12、19，將細胞轉(zhuǎn)移至中轉(zhuǎn)袋；洗滌完畢，開啟蠕動泵和管壓閥8、11、12、17，將微載體排至廢液容置袋，然后開管壓閥1、15、14，加入鹽水對分離培養(yǎng)罐02清洗干凈，開管壓閥19、12、9、15、14，將細胞轉(zhuǎn)移至分離培養(yǎng)罐02進行洗滌；洗滌結(jié)束后開啟蠕動泵和管壓閥8、11、12、18、21，以將msc細胞轉(zhuǎn)移至終產(chǎn)品細胞容置袋進行封裝。

上述管路進行nk細胞體外培養(yǎng)時，帶有管壓閥4的第一輸入支路用于連接誘導(dǎo)培養(yǎng)液容置袋，帶有管壓閥5的第一輸入支路用于連接擴增培養(yǎng)液容置袋，帶有管壓閥6的第二輸入支路用于連接血漿容置袋；上述管路進行car-t細胞體外培養(yǎng)時，帶有管壓閥4的第一輸入支路用于連接誘導(dǎo)培養(yǎng)液容置袋，帶有管壓閥5的第一輸入支路用于連接擴增培養(yǎng)液容置袋，帶有管壓閥6的第二輸入支路用于慢病毒載體容置袋或者基因載體培養(yǎng)袋(相應(yīng)的，該管路中第九管109上設(shè)有位于計數(shù)池和第八管108之間的電轉(zhuǎn)換部件)；如上用于msc細胞體外培養(yǎng)的管路，通過對管壓閥和蠕動泵的控制能夠?qū)崿F(xiàn)完全避免細胞培養(yǎng)過程中與外界環(huán)境發(fā)生接觸，防止污染發(fā)生，本實施例不再贅述。

本發(fā)明實施例提供的管路使細胞體外培養(yǎng)在封閉環(huán)境中進行，無需提供gmp環(huán)境，避免對維持生產(chǎn)環(huán)境的投入，利于降低成本。

上述管路為一次性使用產(chǎn)品，且其是用環(huán)氧乙烷滅菌和γ鈷60輻照消毒滅菌的管路，以確保無菌條件，該管路采用醫(yī)用級別滅菌包裝袋進行包裝，且包裝袋上將貼有針對不同類型細胞制備工藝流程的二維碼以便區(qū)分，還貼有遇菌變色標志，方便檢查管路在運輸過程中或開啟使用前包裝袋是否破損導(dǎo)致被污染。使用完畢后該管路可以用熱合封管設(shè)備進行管路封閉，防止醫(yī)療廢棄物泄露造成二次污染，使用過且封閉完好的管路裝置按照醫(yī)療廢棄物處理要求進行處理操作。

為了確保無菌環(huán)境，部分第一輸入支路上需要設(shè)置過濾除菌濾器，如圖1所示；第十一管111上設(shè)有疏水通氣濾器，疏水通氣濾器位于混合氣體盛裝瓶03和管壓閥16之間；用于連通盛裝廢液的容置袋的輸出支路上設(shè)有單向止回閥，該單向止回閥位于用于盛裝廢液的容置袋和該輸出支路上的管壓閥之間，如圖1所示；用于盛裝廢液的容置袋上需設(shè)置連接有疏水通氣濾器的管路，用以排氣。

本說明書中各個實施例采用遞進的方式描述，每個實施例重點說明的都是與其他實施例的不同之處，各個實施例之間相同相似部分互相參見即可。

對所公開的實施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。