本發(fā)明涉及兩棲類副產(chǎn)物綜合利用領(lǐng)域，特別是一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法。
背景技術(shù)：
：明膠，作為膠原的水解產(chǎn)物，因其良好的生物降解性、生物相容性和低免疫原性，而廣泛應(yīng)用于食品、生物醫(yī)藥和組織工程等領(lǐng)域。例如，nagarajan等利用明膠復(fù)合膜包裝馬鮫魚(yú)粉末，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)期儲(chǔ)存后，馬鮫魚(yú)粉末仍難以被氧化。在食品領(lǐng)域，明膠可作為膠凝劑、乳化劑、發(fā)泡劑等應(yīng)用于甜點(diǎn)、奶制品和肉類產(chǎn)品等各類食品中。目前，傳統(tǒng)的商業(yè)明膠原料仍主要來(lái)源于牛骨、牛皮和豬皮等。然而，由于宗教信仰，豬源明膠產(chǎn)品難以被印度教和伊斯蘭教地區(qū)接受；另一方面，受到瘋牛病和口蹄疫等人畜共患病的影響，哺乳動(dòng)物明膠的安全性受到限制。由于魚(yú)類無(wú)傳染病風(fēng)險(xiǎn)，且可被穆斯林和猶太教接受，以水產(chǎn)加工副產(chǎn)物制備明膠替代哺乳動(dòng)物明膠成為研究重點(diǎn)，但是水產(chǎn)明膠的凝膠性、乳化性較哺乳動(dòng)物明膠差，使其應(yīng)用受到了限制。因此，尋找一種安全穩(wěn)定的新型原料生產(chǎn)明膠成為明膠行業(yè)的發(fā)展新方向。牛蛙(ranacatesbianashaw)是一種兩棲綱、無(wú)尾目、蛙科的兩棲動(dòng)物，其肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有一定的藥用價(jià)值。近年來(lái)，牛蛙已成為我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖重要的名特水產(chǎn)品之一。食用牛蛙將產(chǎn)生大量的蛙皮副產(chǎn)物，其附加值較低，因此建立蛙皮明膠生產(chǎn)工藝，制備高品質(zhì)蛙皮明膠可提高蛙皮附加值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：所要解決的問(wèn)題：本發(fā)明提供一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法，能夠從牛蛙皮中提取明膠，該方法提取率高，明膠質(zhì)量好，該明膠可以成為食用明膠、藥用明膠，最大程度利用牛蛙皮，具有良好的工業(yè)化前景。技術(shù)方案一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法，第一步、堿處理：堿液攪拌浸泡牛蛙皮2-4小時(shí)，每隔30min更換一次堿液；第二步、用蒸餾水洗滌至中性；第三步、胃蛋白酶和乙酸處理：浸酸料液比為1:8-1:12(g/ml)；胃蛋白酶量為10-20u/g，處理溫度為20-25℃,處理時(shí)間36-72h；第四步：將第三步所得物調(diào)節(jié)ph至7.5；調(diào)節(jié)用的試劑naoh,并于4℃下攪拌1-2h；第五步:水浴提膠將第四步所得物在40-60℃,水浴12-18h；第六步：取第五步所得提取液進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)速為10000-12000轉(zhuǎn)/分鐘離心20-30min,留上清液；第七步，冷凍干燥：將第六步所得物在零下45-50℃下冷凍干燥48-72h得到成品明膠。更進(jìn)一步的，第一步中所述的堿液為0.05mol/l的naoh溶液，堿液體積與物料質(zhì)量比例為10：1，即10ml體積堿液對(duì)應(yīng)1g牛蛙皮。更進(jìn)一步的，第三步所述的料液比為1:8；第三步所述的胃蛋白酶添加量為15u/g，提取溫度50℃，提取時(shí)間12h，乙酸濃度為0.2mol/l。第一步中所述的堿液為0.05mol/l的naoh溶液。更進(jìn)一步的，第四步所述調(diào)節(jié)試劑為：10mol/l的naoh。更進(jìn)一步的，第五步所述水浴溫度為50℃，水浴時(shí)間為12小時(shí)。更進(jìn)一步的，第六步所述轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分鐘下離心30min，取上清液并冷凍干燥。更進(jìn)一步的，第七步，冷凍干燥：將第六步所得物在零下50℃下冷凍干燥48h,所述的冷凍干燥法為冷凍真空干燥。更進(jìn)一步的，第一步之前設(shè)有牛蛙皮預(yù)處理步驟，所述的牛蛙皮預(yù)處理步驟為，殺蛙取皮洗凈去除雜質(zhì)，剪成片狀，瀝干，置于聚乙烯袋后于-18℃保藏備用。更進(jìn)一步的，第一步：將牛蛙皮置于10倍體積的0.05mol/l的naoh溶液中攪拌2h并每隔30min換一次料液；然后用蒸餾水洗滌，直至ph為中性，隨后在加入胃蛋白酶(15u/g)和8倍體積的0.2mol/l的乙酸處理48h，用10mol/l的naoh調(diào)ph至7.5，再于4℃下攪拌1h，然后再在50℃下溫浴12h；最后，混合樣品于10000轉(zhuǎn)/分鐘下離心30min，取上清液并零下50℃,冷凍干燥48h得到明膠樣品。所述的牛蛙皮的單位為g,液體的體積為ml。更進(jìn)一步的，該方法制備得到明膠的亞氨基酸含量18.25％；明膠的黏度和凝凍強(qiáng)度分別為3.85mpa·s和223g。有益效果本發(fā)明提供一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法，能夠從牛蛙皮中提取明膠，該方法提取率高，明膠質(zhì)量好，該明膠可以成為食用明膠、藥用明膠，最大程度利用牛蛙皮，具有良好的工業(yè)化前景。所得的明膠甘氨酸含量為33.21％，約占總氨基酸含量的1/3，表明牛蛙皮明膠分子結(jié)構(gòu)中存在(gly-x-y)n的重復(fù)結(jié)構(gòu)，這種氨基酸組成對(duì)于維持明膠分子的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性具有重要作用。而在gly-x-y序列中，以gly-pro-hyp序列最為穩(wěn)定。本試驗(yàn)中亞氨基酸(pro+hyp)含量達(dá)到18.25％，約占總氨基酸含量的1/5，說(shuō)明獲得產(chǎn)品的明膠分子的穩(wěn)定性，為食用、藥用、和工業(yè)用都提供了可能。1更進(jìn)一步的，第三步所述的料液比為1:8；第三步所述的胃蛋白酶添加量為15u/g，提取溫度50℃，提取時(shí)間12h。經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)分析，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以明膠提取率為指標(biāo)，對(duì)料液比、胃蛋白酶添加量、提取溫度和提取時(shí)間4個(gè)因素設(shè)計(jì)l9(34)正交試驗(yàn)，影響牛蛙皮明膠提取率的各因素主次關(guān)系為提取溫度>胃蛋白酶添加量>料液比>提取時(shí)間。提取溫度對(duì)明膠提取率影響最顯著，提取時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響相對(duì)較小。即料液比1:8、胃蛋白用量15u/g、熬膠溫度50℃、提取時(shí)間12h。在此優(yōu)化工藝條件下提取牛蛙皮明膠，最終提取率為11.69％。2第一步中所述的堿液為0.05mol/l的naoh溶液，堿液體積與物料質(zhì)量比例為10：1，即10ml體積堿液對(duì)應(yīng)1g牛蛙皮，用量節(jié)約，容易配置，濃度低不傷明膠，在攪拌情況下可以充分處理牛蛙皮。3第四步所述調(diào)節(jié)試劑為：10mol/l的naoh性溫和，容易配置，反應(yīng)迅速，容易清洗無(wú)殘留。4℃下攪拌有促進(jìn)明膠在后續(xù)提膠過(guò)程中的溶出。4第五步所述水浴溫度為50℃，水浴時(shí)間為12小時(shí)。第六步所述轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分鐘下離心30min，取上清液并冷凍干燥，該配置下明膠能充分分離。5第七步，冷凍干燥：將第六步所得物在零下45-50℃下冷凍干燥48-72h,所述的冷凍干燥法為冷凍真空干燥，所述的冷凍干燥法為冷凍真空干燥,明膠為蛋白質(zhì),具有一定的生物活性,冷凍真空干燥可以保持蛋白質(zhì)原有的性質(zhì)而不被破壞。6第一步之前設(shè)有牛蛙皮預(yù)處理步驟，所述的牛蛙皮預(yù)處理步驟為，殺蛙取皮洗凈去除雜質(zhì)，剪成片狀，瀝干，置于聚乙烯袋后于-18℃保藏備用。該處理防止雜質(zhì)污染牛蛙皮，造成明膠純度下降，同時(shí)該處理方式得到產(chǎn)物可以長(zhǎng)期保存，隨時(shí)取用。7該方法明膠提取率高，操作簡(jiǎn)單方便。8該方法制備得到明膠的亞氨基酸含量18.25％；明膠的黏度和凝凍強(qiáng)度分別為3.85mpa·s和223g，效果好,符合國(guó)家明膠要求。附圖說(shuō)明圖1為第三步料液比對(duì)明膠提取率的影響；圖2為第三步胃蛋白酶用量對(duì)明膠提取率的影響；圖3為第五步溫度對(duì)明膠提取率的影響；圖4為第五步水浴提膠處理步驟時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響；圖5為一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法步驟示意圖。具體實(shí)施方式實(shí)施例1一、生產(chǎn)。1.1原料與試劑。試驗(yàn)原料：牛蛙皮原料取自于本地農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，洗凈去除雜質(zhì)，剪成片狀，片狀規(guī)格為0.5cm×0.5cm，瀝干，置于聚乙烯袋后于-18℃保藏備用。主要試劑：胃蛋白酶，阿拉丁生物試劑有限公司；其它試劑均為分析純。1.2儀器與設(shè)備。ta-xtzi物性測(cè)定儀：英國(guó)ta公司；sjia-10n型冷凍干燥機(jī)：寧波雙嘉儀器有限公司；phs-3c型精密ph計(jì)：上海雷磁儀器廠；sc-3612型離心機(jī)：安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；hhs-8s型電熱恒溫水浴鍋：上海宜昌儀器紗篩廠；f48010-33型馬弗爐：上海電威貿(mào)易有限公司；78hw-1型磁力攪拌器：上海皓莊儀器有限公司；l-8900氨基酸自動(dòng)分析儀：日本hitachi公司。1.3試驗(yàn)方法。1.3.1牛蛙皮基本成分測(cè)定。分別依據(jù)gb5009.3-2010《食品中水分的測(cè)定》、gb/t5009.6-2003《食品中脂肪的測(cè)定》、gb5009.5-2010《食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》、gb5009.4-2008《肉與肉制品：總灰分測(cè)定》和gb/t9695.23-2008《肉與肉制品：羥脯胺酸含量測(cè)定》分析牛蛙皮中的水分、脂肪、蛋白質(zhì)、總灰分和膠原蛋白的含量。1.3.2明膠提取。牛蛙皮明膠的提取工藝流程為：牛蛙皮-堿處理-水洗至中性-胃蛋白酶和乙酸處理-調(diào)ph至7.5-水浴提膠-離心-冷凍干燥-成品明膠明膠提取率按下式進(jìn)行計(jì)算：ω(％)＝m1/m2*100，式中,ω為提取率，m1和m2分別為明膠凍干質(zhì)量和新鮮牛蛙皮濕重,單位為g。1.3.3單因素試驗(yàn)。牛蛙皮明膠單因素試驗(yàn)的基本條件設(shè)置為：浸酸料液比為1：10(g/ml)，胃蛋白酶量為15u/g，提取溫度為50℃，時(shí)間為16h。改變其中一個(gè)條件，固定其它條件以確定料液比、胃蛋白酶、溫度和時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響。其中，料液比為：1:4、1:6、1:8、1:10、1:12；胃蛋白酶量：5、10、15、20、25u/g；溫度：30、40、50、60、70℃；時(shí)間：4、8、12、16、20h.根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以明膠提取率為指標(biāo)，對(duì)浸酸料液比、胃蛋白酶量、溫度和時(shí)間4個(gè)因素設(shè)計(jì)l9(34)正交試驗(yàn)，各因素及水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取平均值，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，優(yōu)化明膠提取工藝。分別得到料液比對(duì)明膠提取率的影響圖1、胃蛋白酶量對(duì)明膠提取率的影響圖2、提取溫度對(duì)明膠提取率的影響圖3、提取時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響圖4。表1正交試驗(yàn)因素水平表。2.1牛蛙皮基本成分測(cè)定得到表2。表2牛蛙皮基本成分。牛蛙皮的膠原蛋白含量約13.8％，占總蛋白的74.39％，說(shuō)明牛蛙皮是提取和利用明膠的理想原料。2.2單因素試驗(yàn)結(jié)果。料液比對(duì)明膠提取率的影響。如圖1所示，明膠的提取率隨料液比的增加呈先增加后趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)。當(dāng)料液比為1:10時(shí)，明膠的提取率達(dá)到最大，表明增加提膠溶劑有利于牛蛙皮中明膠的溶出。然而，料液比過(guò)高，體系內(nèi)有效水分濃度降低，影響水分子的運(yùn)動(dòng)，不利于膠原的降解。此外，料液比過(guò)高也會(huì)造成后續(xù)濃縮干燥過(guò)程中能耗的增加，不利于實(shí)際生產(chǎn)。綜合考慮，選取1:10為最佳料液比。2.2.2胃蛋白酶含量對(duì)明膠提取率的影響。胃蛋白酶含量對(duì)明膠提取率的影響如圖2所示胃蛋白酶通過(guò)作用于肽鏈中芳香族氨基酸或酸性氨基酸的氨基組成的肽鍵，而將膠原蛋白酶解為明膠分子。胃蛋白酶添加量對(duì)牛蛙皮明膠提取率的影響如圖2所示。由圖可知，隨著胃蛋白酶用量的增加，明膠的提取率呈現(xiàn)持續(xù)增大的趨勢(shì)，當(dāng)酶的用量達(dá)到15u/g時(shí)，明膠提取率達(dá)到10.98％，酶量繼續(xù)增大時(shí)，提取率變化不明顯。適當(dāng)提高酶的用量有利于促進(jìn)膠原蛋白分子的酶解，使明膠在熱水中更易被提取，從而導(dǎo)致明膠提取率增大。然而，一定量膠原蛋白的肽鍵作用位點(diǎn)是相對(duì)不變的，因此，持續(xù)增大酶的用量不再促進(jìn)明膠提取率的增大。此外，酶的用量過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致明膠的凝膠強(qiáng)度和黏度降低。因此，15u/g為最佳胃蛋白酶的用量。2.2.3熬膠溫度對(duì)明膠提取率的影響。熬膠溫度對(duì)明膠提取率的影響如圖3所示。由圖可見(jiàn)，隨著熬膠溫度的升高，膠原蛋白逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄缘拿髂z分子，導(dǎo)致明膠提取率不斷增大。然而，當(dāng)溫度高于50℃以后，明膠的提取率趨于平緩，增加不明顯。溫度是明膠提取過(guò)程中的重要參數(shù)，加熱可有效促進(jìn)膠原蛋白分子端肽區(qū)域及三股螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域的次級(jí)鍵發(fā)生斷裂，使明膠溶于水中。熬膠溫度較低，可獲得性能優(yōu)良的明膠，但其提取率較低、提取時(shí)間較長(zhǎng)。溫度過(guò)高，提取率較高，但高溫不僅使能耗增加，也會(huì)促使明膠分子的次級(jí)水解，從而降低明膠的理化性質(zhì)，影響明膠的應(yīng)用。由此可見(jiàn)，牛蛙皮明膠的提取溫度為50℃較為合適。這一溫度低于真鱈魚(yú)骨明膠和羅非魚(yú)皮明膠[18]的熬膠溫度，這主要是由于牛蛙皮明膠前期經(jīng)過(guò)胃蛋白酶處理，使其在較低溫度下也可得到較大的提取率，也降低了膠原蛋白分子的過(guò)度水解。2.2.4提取時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響。提取時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響見(jiàn)圖4。熬膠時(shí)間太短，明膠溶液的濃度太低，使明膠得率降低；反之，提取時(shí)間太長(zhǎng)，也會(huì)引起明膠分子降解成更小的分子，導(dǎo)致明膠產(chǎn)品的質(zhì)量下降?？梢?jiàn)，提取時(shí)間對(duì)明膠提取率具有重要的影響。如圖4所示，隨著提取時(shí)間的增加，明膠的提取率不斷提高，16h以后幾乎趨于穩(wěn)定，所以選擇16h為明膠提取的最佳時(shí)間。2.3牛蛙皮明膠提取工藝優(yōu)化。表3正交試驗(yàn)結(jié)果。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以明膠提取率為指標(biāo)，對(duì)料液比、胃蛋白酶添加量、提取溫度和提取時(shí)間4個(gè)因素設(shè)計(jì)l9(34)正交試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3中正交試驗(yàn)極差分析結(jié)果可知，影響牛蛙皮明膠提取率的各因素主次關(guān)系為提取溫度>胃蛋白酶添加量>料液比>提取時(shí)間。提取溫度對(duì)明膠提取率影響最顯著，提取時(shí)間對(duì)明膠提取率的影響相對(duì)較小。料液比對(duì)明膠提取的影響為k1>k2>k3，胃蛋白酶添加量對(duì)明膠提取的影響為k2>k3>k1，熬膠溫度對(duì)明膠提取的影響為k2>k3>k1，時(shí)間對(duì)明膠提取的影響為k1>k3>k2。綜上結(jié)果，牛蛙皮明膠提取的最佳組合為a1b2c2d1，即料液比1:8、胃蛋白用量15u/g、熬膠溫度50℃、提取時(shí)間12h。在此優(yōu)化工藝條件下提取牛蛙皮明膠，最終提取率為11.69％。實(shí)施例2在室溫下將牛蛙皮(剪碎的,牛蛙皮的單位為g,液體的體積為ml)置于10倍體積的0.05mol/l的naoh溶液中攪拌2h并每隔30min換一次料液；然后用蒸餾水洗滌，直至ph為中性，隨后在加入胃蛋白酶(15u/g)和8倍體積的0.2mol/l的乙酸常溫處理，所述的常溫為25℃處理48h，用10mol/l的naoh調(diào)ph至7.5，再于4℃下攪拌1h，然后再；最后，混合樣品于10000轉(zhuǎn)/分鐘下離心30min，取上清液并冷凍干燥，得到明膠樣品。在此優(yōu)化工藝條件下提取牛蛙皮明膠，最終提取率為11.69％。對(duì)生產(chǎn)得到的明膠進(jìn)行分析：1、按照aoac的方法，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)6.67％的明膠溶液在10℃下冷卻16h，通過(guò)物性測(cè)定儀在下壓高度4mm和下壓速度1mm/s條件下測(cè)定凝凍強(qiáng)度。同時(shí)，將明膠溶液采用奧氏黏度計(jì)測(cè)定60℃下的黏度進(jìn)行凝膠凝凍強(qiáng)度、黏度分析。結(jié)果見(jiàn)表4。明膠的黏度和凝膠強(qiáng)度是體現(xiàn)明膠品質(zhì)的重要指標(biāo)，達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，能夠滿足生產(chǎn)需求。2、將凍干的明膠樣品置于6mol/l的hcl中，于110℃下水解24h。然后將水解液蒸發(fā)，沉淀用25ml檸檬酸緩沖液溶解后，取50μl液體樣品用氨基酸分析儀進(jìn)行定量分析，進(jìn)行明膠氨基酸組成分析。結(jié)果見(jiàn)表5。甘氨酸是牛蛙皮明膠的主要氨基酸，其含量分別為33.21％，約占總氨基酸含量的1/3，表明牛蛙皮明膠分子結(jié)構(gòu)中存在(gly-x-y)n的重復(fù)結(jié)構(gòu)，這種氨基酸組成對(duì)于維持明膠分子的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性具有重要作用。而在gly-x-y序列中，以gly-pro-hyp序列最為穩(wěn)定。本試驗(yàn)中亞氨基酸(pro+hyp)含量達(dá)到18.25％，約占總氨基酸含量的1/5，說(shuō)明獲得產(chǎn)品的明膠分子的穩(wěn)定性，為食用、藥用、和工業(yè)用都提供了可能。表4牛蛙皮明膠的黏度和凝凍強(qiáng)度。指標(biāo)gb6783—2013《食品添加劑明膠》牛蛙皮明膠黏度(mpa·s)未作要求3.85±0.24凝凍強(qiáng)度(g)≥50223±6.23表5牛蛙皮明膠氨基酸組成分析。氨基酸含量(％)氨基酸含量(％)天門(mén)冬氨酸4.72纈氨酸1.32絲氨酸4.47蛋氨酸0.58谷氨酸8.02賴氨酸3.75甘氨酸33.21異亮氨酸1.01組氨酸0.72亮氨酸2.03精氨酸5.52苯丙氨酸1.73蘇氨酸2.12脯氨酸11.57丙氨酸11.71羥脯氨酸6.68半胱氨酸0.72亞氨基酸18.25酪氨酸0.12實(shí)施例3一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法預(yù)處理：殺蛙取皮洗凈去除雜質(zhì)，剪成片狀，瀝干，置于聚乙烯袋后于-18℃保藏備用。第一步、在室溫下將牛蛙皮(剪碎的,牛蛙皮的單位為g,液體的體積為ml)置于10倍體積的0.05mol/l的naoh溶液中攪拌4h并每隔30min換一次料液；第二步，然后用蒸餾水洗滌，0.05mol/l的naoh直至ph為7.5,；第三步,胃蛋白酶和乙酸處理：浸酸料液比為1:10(g/ml)；胃蛋白酶量為10u/g，處理溫度為20℃，處理時(shí)間72h；第四步：將第三步所得物調(diào)節(jié)ph至7.5；調(diào)節(jié)用的試劑naoh,并于4℃下攪拌1.5h；第五步:水浴提膠將第四步所得物在40℃,水浴18h；第六步：取第五步所得提取液進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)速為11000轉(zhuǎn)/分鐘離心25min,留上清液；第七步，冷凍干燥：將第六步所得物在零下45℃下冷凍干燥72h得到成品明膠。更進(jìn)一步的，第一步中所述的堿液為0.05mol/l的naoh溶液，堿液體積與物料質(zhì)量比例為10：1，即10ml體積堿液對(duì)應(yīng)1g牛蛙皮。實(shí)施例4牛蛙皮預(yù)處理步驟為，殺蛙取皮洗凈去除雜質(zhì)，剪成片狀，瀝干，置于聚乙烯袋后于-18℃保藏備用。一種牛蛙皮為原料提取明膠的方法，第一步、在室溫下將牛蛙皮(剪碎的,牛蛙皮的單位為g,液體的體積為ml)置于10倍體積的0.05mol/l的naoh溶液中攪拌3h并每隔30min換一次料液；第二步，然后用蒸餾水洗滌至中性；第三步,胃蛋白酶和乙酸處理：浸酸料液比為1:12(g/ml)；胃蛋白酶量為20u/g，處理溫度為23℃，處理時(shí)間36h；第四步：將第三步所得物調(diào)節(jié)ph至7.5；調(diào)節(jié)用的試劑naoh,并于4℃下攪拌2h；第五步:水浴提膠將第四步所得物在60℃,水浴15h；第六步：取第五步所得提取液進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)速為12000轉(zhuǎn)/分鐘離心20min,留上清液；第七步，冷凍干燥：將第六步所得物在零下48℃下冷凍干燥60h得到成品明膠。實(shí)施例5在室溫下將牛蛙皮(剪碎的,牛蛙皮的單位為g,液體的體積為ml)置于10倍體積的0.05mol/l的naoh溶液中攪拌1.5h并每隔30min換一次料液；然后用蒸餾水洗滌，直至ph為中性，隨后在加入胃蛋白酶(15u/g)和8倍體積的0.2mol/l的乙酸常溫處理，所述的常溫為20℃處理48h，用10mol/l的naoh調(diào)ph至7.5，再于4℃下攪拌1.5h，然后再；最后，混合樣品于10000轉(zhuǎn)/分鐘下離心30min，取上清液并冷凍干燥，得到明膠樣品。當(dāng)前第1頁(yè)12