本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種高壓電泳提取生物縮宮素溶液的方法。
背景技術(shù)：
縮宮素（oxytocin），又稱(chēng)催產(chǎn)素，是一種由9個(gè)氨基酸殘基組成的、具有一個(gè)二硫鍵的、具有生物活性的多肽類(lèi)產(chǎn)品，分子式c43h66n12o12s2，分子量1007.2，等電點(diǎn)7.7，易溶于水，溶于丙酮、丁醇和稀醋酸，不溶于乙醚和石油醚，干品穩(wěn)定，ph為3.5～4.4的酸性溶液中穩(wěn)定，堿性溶液中不穩(wěn)定。
目前主要采用化學(xué)合成法制備縮宮素。然而化學(xué)合成的縮宮素粗品含有一些與縮宮素結(jié)構(gòu)類(lèi)似的雜肽，例如氨基酸消旋化產(chǎn)生的非對(duì)映異構(gòu)體、部分氨基酸未連接上產(chǎn)生的缺失肽、肽鍵斷裂產(chǎn)生的斷裂肽以及氧化不徹底產(chǎn)生的還原態(tài)開(kāi)環(huán)肽等，造成縮宮素產(chǎn)品收率較低，純化困難。而且采用化學(xué)合成法制備的縮宮素?zé)o法形成其天然的雙s鍵β-回折的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)品的生物活性較低。
與化學(xué)合成法相比，生物提取法不會(huì)引入縮宮素的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，如二聚體、非對(duì)映異構(gòu)體、斷裂肽、開(kāi)環(huán)肽等，但生物原料成份復(fù)雜，縮宮素的含量較低一直成為制約其應(yīng)用的瓶頸。另外，現(xiàn)有技術(shù)提取的縮宮素溶液中升壓素含量普遍在5%左右，難以滿(mǎn)足要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種高壓電泳提取生物縮宮素溶液的方法，操作簡(jiǎn)單、收率高、獲得的縮宮素溶液純度高、生物活性高，適合大規(guī)模提取生物縮宮素溶液。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：高壓電泳提取生物縮宮素溶液的方法，包括以下步驟：
（1）、稱(chēng)取動(dòng)物腦垂體后葉干粉并加水提取，離心并收集離心液；
（2）、離心液經(jīng)過(guò)制備型高壓電泳分離裝置，設(shè)置流出速度為20ml/min，分離電壓為15kv，支持物選用聚丙烯酰胺凝膠，緩沖溶液是用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5～4.0的溶液，二極管整列檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)電泳流出液250～400nm范圍內(nèi)的特征光譜，在電泳開(kāi)始后的120～240min內(nèi)首次出現(xiàn)280nm吸收峰強(qiáng)度大于0.15時(shí)開(kāi)始收集電泳流出液，在電泳開(kāi)始后的240～360min內(nèi)首次出現(xiàn)280nm吸收峰強(qiáng)度小于0.15時(shí)停止收集電泳流出液；
（3）、將收集到的電泳流出液用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5～4.0，加熱至95～100℃，保溫15～30分鐘，冷卻后過(guò)濾，收集濾液并用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5～4.0，加入10%的皂土漿攪拌吸附40～60分鐘，過(guò)濾并收集濾液，即為縮宮素溶液。
步驟（1）加水提取兩次，兩次提取加水的總量與腦垂體后葉干粉的重量之比為（10～15）：1，每次提取時(shí)間為30～40min，兩次的提取液合并待用。
步驟（3）皂土的加入量為：每100ml濾液加入3ml10%的皂土漿。
本發(fā)明利用水提取垂體后葉干粉中的縮宮素，然后利用制備型高壓電泳分離裝置進(jìn)行分離純化，將升壓素的含量降至最低，最后再利用皂土吸附除去小分子物質(zhì)、有機(jī)有色物和熱原，從而獲得純度較高的縮宮素溶液。本發(fā)明的提取方法操作簡(jiǎn)單，提取出的縮宮素溶液不僅純度高，而且具有較高的生物活性，能夠縮宮素溶液中升壓素含量控制在0.5%以下，安全性有較大幅度提高，而且適用于縮宮素的大規(guī)模生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述：
實(shí)施例1：
高壓電泳提取生物縮宮素溶液的方法，包括以下步驟：
（1）取豬腦垂體后葉干粉（市售）1000g，加入注射用水5l，攪拌提取30分鐘，離心收集液體，殘?jiān)偌铀?l，攪拌提取30分鐘，離心收集液體，合并兩次離心液；
（2）、離心液經(jīng)過(guò)制備型高壓電泳分離裝置，設(shè)置流出速度為20ml/min，支持物選用聚丙烯酰胺凝膠，緩沖溶液是用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5的溶液，緩沖液平衡兩個(gè)電泳裝置體積后，倒入離心液，開(kāi)機(jī)分離電壓15kv，計(jì)時(shí)并二極管整列檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)電泳流出液250～400nm范圍內(nèi)的特征光譜，在第126分鐘時(shí)280nm吸收峰強(qiáng)度開(kāi)始大于0.15，此時(shí)開(kāi)始收集電泳流出液；在第304分鐘時(shí)280nm吸收峰強(qiáng)度小于0.15，停止收集電泳流出液；
（3）、將收集到的電泳流出液用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5，水浴快速加熱至100℃，保溫30分鐘，立即冷卻后紙漿過(guò)濾，收集濾液并用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5，按每100ml濾液加入3ml10%皂土漿的用量加入皂土，攪拌吸附40分鐘后，經(jīng)過(guò)濾后收集近無(wú)色澄清溶液即為縮宮素溶液。經(jīng)稱(chēng)量和計(jì)算，每克豬腦垂體后葉干粉制得縮宮素約1010單位。
實(shí)施例2：
高壓電泳提取生物縮宮素溶液的方法，包括以下步驟：
（1）取豬腦垂體后葉干粉（市售）1000g，加入注射用水9l，攪拌提取40分鐘，離心收集液體，殘?jiān)偌铀?l，攪拌提取40分鐘，離心收集液體，合并兩次離心液；
（2）、離心液經(jīng)過(guò)制備型高壓電泳分離裝置，設(shè)置流出速度為20ml/min，支持物選用聚丙烯酰胺凝膠，緩沖溶液是用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5的溶液，緩沖液平衡兩個(gè)電泳裝置體積后，倒入離心液，開(kāi)機(jī)分離電壓15kv，計(jì)時(shí)并二極管整列檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)電泳流出液250～400nm范圍內(nèi)的特征光譜，在第138分鐘時(shí)280nm吸收峰強(qiáng)度開(kāi)始大于0.15，此時(shí)開(kāi)始收集電泳流出液；在第325分鐘時(shí)280nm吸收峰強(qiáng)度小于0.15，停止收集電泳流出液；
（3）、將收集到的電泳流出液用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5，水浴快速加熱至95℃，保溫40分鐘，立即冷卻后紙漿過(guò)濾，收集濾液并用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3.5，按每100ml濾液加入3ml10%皂土漿的用量加入皂土，攪拌吸附50分鐘后，經(jīng)過(guò)濾后收集近無(wú)色澄清溶液即為縮宮素溶液。經(jīng)稱(chēng)量和計(jì)算，每克羊腦垂體后葉干粉制得縮宮素約1185單位。
實(shí)施例3：
高壓電泳提取生物縮宮素溶液的方法，包括以下步驟：
（1）取羊腦垂體后葉干粉（市售）1000g，加入注射用水8l，攪拌提取40分鐘，離心收集液體，殘?jiān)偌铀?l，攪拌提取30分鐘，離心收集液體，合并兩次離心液；
（2）、離心液經(jīng)過(guò)制備型高壓電泳分離裝置，設(shè)置流出速度為20ml/min，支持物選用聚丙烯酰胺凝膠，緩沖溶液是用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至4.0的溶液，緩沖液平衡兩個(gè)電泳裝置體積后，倒入離心液，開(kāi)機(jī)分離電壓15kv，計(jì)時(shí)并二極管整列檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)電泳流出液250～400nm范圍內(nèi)的特征光譜，在第131分鐘時(shí)280nm吸收峰強(qiáng)度開(kāi)始大于0.15，此時(shí)開(kāi)始收集電泳流出液；在第318分鐘時(shí)280nm吸收峰強(qiáng)度小于0.15，停止收集電泳流出液；
（3）、將收集到的電泳流出液用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至4.0，水浴快速加熱至95℃，保溫40分鐘，立即冷卻后紙漿過(guò)濾，收集濾液并用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至4.0，按每100ml濾液加入3ml10%皂土漿的用量加入皂土，攪拌吸附60分鐘后，經(jīng)過(guò)濾后收集近無(wú)色澄清溶液即為縮宮素溶液。經(jīng)稱(chēng)量和計(jì)算，每克羊腦垂體后葉干粉制得縮宮素約1060單位。
以上實(shí)施例只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。