本發(fā)明涉及酶或微生物的測(cè)定或檢驗(yàn)方法，具體是一種復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查方法。

背景技術(shù)：

復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液簡(jiǎn)稱醋林格，用于補(bǔ)充體液，調(diào)整電解質(zhì)平衡、酸中毒及出血熱,其組分為：氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、醋酸鈉，其中醋酸鈉對(duì)酵母菌、霉菌等有較強(qiáng)的抑菌作用?；谄湟志再|(zhì)，在設(shè)計(jì)無菌方法上采用沖洗液沖洗抑菌成分，以消除其抑菌性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明就是為了解決現(xiàn)有的復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查方法操作復(fù)雜，試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確等問題，所提出的一種復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查方法。

本發(fā)明是按照以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查方法，包括以下步驟：

ⅰ.抽取少量沖洗液潤濕無菌濾筒的薄膜后過濾復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液；

ⅱ.待醋酸鈉電解質(zhì)注射液全部過濾后，將沖洗液分次抽入，每次抽入總沖洗量的1/3，過濾沖洗濾膜；

ⅲ.加入培養(yǎng)基在不同條件下進(jìn)行培養(yǎng)，并檢測(cè)結(jié)果。

所述沖洗液的成分為蛋白胨干粉和吐溫-80，二者的質(zhì)量份數(shù)比為1:1。

所述沖洗液的制備方法為：稱蛋白胨干粉1份、吐溫-801份，溶于1000份水中，調(diào)ph使滅菌后的ph值為7.1±0.2，115-121℃高壓滅菌15-30分鐘。

所述總沖洗量為150ml。

所述培養(yǎng)基為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基于30-35℃培養(yǎng)14天，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基于20-25℃培養(yǎng)14天。

本發(fā)明獲得了如下的有益效果。

本發(fā)明有效的解決了現(xiàn)有的復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查方法操作復(fù)雜，試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確等問題。使用本發(fā)明所述方法進(jìn)行復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查沖洗液用量少，使濾膜損傷最小化，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)，本發(fā)明所述方法也降低了試驗(yàn)繁瑣程度，大大提高了試驗(yàn)效率。本發(fā)明的試驗(yàn)方法科學(xué)，操作簡(jiǎn)單，試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，更加適合復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液無菌檢查，具有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。

一、試驗(yàn)準(zhǔn)備：

1．供試品：

復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液

2.菌種：

金黃色葡萄球菌（cmcc（b）26003）

大腸埃希菌（cmcc（b）44102）

生孢梭菌（cmcc（b）64941）

枯草芽孢桿菌（cmcc（b）63501）

白色念珠菌（cmcc（f）98001）

黑曲霉菌（cmcc（f）98003）

以上標(biāo)準(zhǔn)菌株均購自中國藥品生物制品檢定所或天津市藥品檢驗(yàn)所。

3．培養(yǎng)基（詳見表1）

4．培養(yǎng)基、沖洗液、中和劑配制方法（詳見表2）

5．試驗(yàn)儀器（詳見表3）

6.菌懸液的制備：

a.增菌：分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上，生孢梭菌于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30~35℃恒溫箱培養(yǎng)18~24小時(shí)；接種白色念珠菌、黑曲霉菌于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，20~25℃恒溫箱，白色念珠菌培養(yǎng)24~48小時(shí)，黑曲霉菌5~7天，用3~5ml含0.05%吐溫80的0.9%無菌nacl溶液將黑曲霉孢子洗脫，用管口帶有無菌脫脂棉的毛細(xì)管收集孢子懸液于無菌試管中保存，備用。

b.菌液稀釋：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物用0.9%無菌nacl溶液按10倍稀釋，制成試驗(yàn)菌液；試驗(yàn)菌液每毫升含菌量小于100cfu。

c.新制備的菌懸液在室溫條件下應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，2~8℃冷藏可保存24小時(shí)。

二、試驗(yàn)方法的建立

1.薄膜制備

抽取少量沖洗液（使無菌濾筒中薄膜潤濕即可），按每筒過濾量5000ml（10袋/筒）過濾供試品。待供試品全部過濾后，將沖洗液（150ml/筒）分3次抽入，每次50ml/筒，輕輕振搖，過濾沖洗濾膜。在最后50ml沖洗液中加入小于100cfu試驗(yàn)菌，全量過濾，加入培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)，做為試驗(yàn)組。

另取一裝有同體積培養(yǎng)基濾筒加入等量試驗(yàn)菌作為對(duì)照組。每一菌種同法操作。

2.培養(yǎng)

加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和生孢梭菌的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基濾筒，30～35℃恒溫箱培養(yǎng)5天；加入枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉菌的胰酪胨大豆液體培養(yǎng)基濾筒，20～25℃恒溫箱培養(yǎng)5天。

3.方法適用性試驗(yàn)結(jié)果（詳見表4）

1.4結(jié)論

以上適用性試驗(yàn)結(jié)果表明:試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，試驗(yàn)菌生長(zhǎng)良好，該試驗(yàn)方法及所用試驗(yàn)材料對(duì)試驗(yàn)菌生長(zhǎng)無影響，故該試驗(yàn)方法可以用于該產(chǎn)品的無菌檢查。

1.5日常無菌檢查方法

依據(jù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)論，復(fù)方醋酸鈉電解質(zhì)注射液日常無菌檢查方法：抽取少量沖洗液（使無菌濾筒中薄膜潤濕即可），按每筒過濾量5000ml過濾供試品，待供試品全部過濾后，將沖洗液（150ml/筒）分次抽入，每次50ml/筒，輕輕振搖，過濾沖洗濾膜，對(duì)濾筒內(nèi)壁進(jìn)行沖洗，避免死角，過濾。分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基于30~35℃培養(yǎng)14天，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基于20~25℃培養(yǎng)14天。觀察結(jié)果，結(jié)果見下表（表5）。