本發(fā)明涉及一種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，尤其涉及一種利用米渣替代部分玉米漿干粉的金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
：金霉素(chlortetracyclin)，又稱氯四環(huán)素，其抗菌譜與四環(huán)素相似，因具有抑菌、促生長(zhǎng)、飼料利用率高及在肌體內(nèi)殘留量低等優(yōu)點(diǎn)，作為藥物飼料添加劑廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)，是目前藥物飼料添加劑中使用量最大的品種。近年來(lái)由于禽畜養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大和集約化、舍飼化程度的提高，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)藥物飼料添加劑產(chǎn)品的需求日益增加，目前我國(guó)已經(jīng)成為世界上最大的金霉素生產(chǎn)國(guó)。金霉素的發(fā)酵生產(chǎn)方法，是由金色鏈霉菌(streptomycesaureofaciens)做為出發(fā)菌株，經(jīng)過(guò)純種培養(yǎng)、發(fā)酵生產(chǎn)金霉素。金霉素發(fā)酵生產(chǎn)中主要使用玉米漿干粉做為氮源，其市場(chǎng)價(jià)格較高。米渣是大米制作淀粉糖或生產(chǎn)味精的過(guò)程中產(chǎn)生的下腳料，其蛋白質(zhì)含量豐富，高達(dá)60％以上(干基)。目前，米渣大部分只是被用作飼料。福建地區(qū)具有年產(chǎn)味精80000噸的江南最大的味精生產(chǎn)基地，米渣產(chǎn)量巨大，價(jià)格低廉。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于，提供一種利用米渣替代部分玉米漿干粉的金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，既提高金霉素生產(chǎn)水平，降低金霉素生產(chǎn)成本，又解決了部分味精生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的環(huán)保問(wèn)題。為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供了一種利用米渣替代部分玉米漿干粉的金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，以米渣替代80％-90％質(zhì)量比例的玉米漿干粉。所述金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉28～32g、玉米淀粉12～16g、玉米漿干粉2～4g、米渣16～20g、kh2po40.02～0.04g、mgso40.04～0.06g、豆油0.4～0.6g。更優(yōu)選地，所述金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉30g、玉米淀粉15g、玉米漿干粉3g、米渣18g、kh2po40.03g、mgso40.05g、豆油0.5g。其中，所述米渣來(lái)源于味精生產(chǎn)中制糖工藝階段產(chǎn)生的新鮮米渣經(jīng)烘干后得到的固體產(chǎn)物，質(zhì)量要求為：蛋白質(zhì)含量≥60％，水分≤10％，總糖≤20％，脂肪≤12％，灰分≤5％，干渣顆粒通過(guò)60目篩的數(shù)量≥90％。利用米渣替代部分玉米漿干粉發(fā)酵生產(chǎn)金霉素的方法，是由金色鏈霉菌(streptomycesaureofaciens)作為出發(fā)菌株，經(jīng)過(guò)純種培養(yǎng)、二級(jí)發(fā)酵生產(chǎn)金霉素。具體工藝步驟包括了砂土孢子制備工序、母瓶斜面孢子制備工序、子瓶斜面孢子制備工序、子瓶孢子液制備工序、種子制備工序和發(fā)酵制備工序。所述發(fā)酵制備工序中發(fā)酵工藝如下：將培養(yǎng)基滅菌，滅菌完成后溫度降至30～35℃時(shí)，將培養(yǎng)好的一級(jí)種子移入發(fā)酵罐，移種后發(fā)酵生產(chǎn)采取變溫發(fā)酵，接種后培養(yǎng)溫度控制在30～33℃，培養(yǎng)48h后降溫至28～30℃，培養(yǎng)壓力控制在0.01～0.04mpa，發(fā)酵周期120～144小時(shí)。本發(fā)明具有以下有益效果：1.本發(fā)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分達(dá)到提高金霉素生產(chǎn)水平、降低金霉素生產(chǎn)成本的目的，以米渣替代部分玉米漿干粉做為發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮源，金霉素放罐效價(jià)平均提高14.12％，且原料投入成本降低。2.本發(fā)明利用福建省地域優(yōu)勢(shì)，以味精生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的米渣做為金霉素發(fā)酵生產(chǎn)中的原材料，既提高金霉素生產(chǎn)水平、降低金霉素生產(chǎn)成本，又解決了部分味精生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的環(huán)保問(wèn)題。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明的一種金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，1000升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉30kg、玉米淀粉15kg、玉米漿干粉3kg、米渣18kg、kh2po40.03kg、mgso40.05kg、豆油0.5kg。其中米渣的質(zhì)量要求為：蛋白質(zhì)含量≥60％，水分≤10％，總糖≤20％,脂肪≤12％，灰分≤5％，干渣顆粒通過(guò)60目篩的數(shù)量≥90％。利用米渣替代部分玉米漿干粉的金霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法，是由金色鏈霉菌(streptomycesaureofaciens)做為出發(fā)菌株，經(jīng)過(guò)純種培養(yǎng)、二級(jí)發(fā)酵生產(chǎn)金霉素。具體工藝步驟包括砂土孢子制備工序、母瓶斜面孢子制備工序、子瓶斜面孢子制備工序、種子制備工序、發(fā)酵制備工序。砂土孢子制備工序的步驟為：取河沙加入10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，倒去酸水，用自來(lái)水沖洗至中性，烘干過(guò)40目篩。另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。烘干碾碎，過(guò)100目篩。砂和土以3:1的比例混合均勻，裝入10×100mm的小試管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，滅菌烘干。將金霉素產(chǎn)生菌的斜面孢子在無(wú)菌條件下接入合格的砂土管中，標(biāo)識(shí)菌株名稱及保藏日期，置于放有干燥劑的容器中，蓋緊密封，于4℃冰箱冷藏保存。母瓶孢子斜面制備工序的步驟為：在無(wú)菌條件下從砂土管中挑取適量砂土接于母瓶斜面培養(yǎng)基上，標(biāo)識(shí)后，放于溫度34±1℃，濕度30％～50％的恒溫室培養(yǎng)7天，成熟后放于4℃冰箱冷藏備用。子瓶孢子斜面制備工序的步驟為：在無(wú)菌條件下用接種鏟從母瓶孢子菌種斜面上刮取一定量孢子，劃線接至子瓶孢子斜面培養(yǎng)基上，同時(shí)做露碟和肉湯無(wú)試檢查，接好的斜面標(biāo)識(shí)后放于溫度34±1℃，濕度30％～50％的恒溫室培養(yǎng)6天，成熟后放于4℃冰箱冷藏備用。子瓶孢子液制備工序的步驟為：選取生長(zhǎng)合格的5個(gè)子瓶孢子斜面，在無(wú)菌條件下用接種鏟將子瓶孢子斜面上的菌層刮下碾散后各加入20ml無(wú)菌水，攪拌均勻后過(guò)濾得到子瓶孢子液，標(biāo)識(shí)后放于4℃冰箱保存。其中，種子制備工序的步驟為：在無(wú)菌條件下，將合格的100ml子瓶孢子液以火焰法接種到一級(jí)種子罐中，溫度控制在26～28℃，罐壓控制在0.04～0.06mpa，攪拌轉(zhuǎn)速120～140r/min條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間24～28小時(shí)，種子生長(zhǎng)良好可移入發(fā)酵罐。發(fā)酵制備工序中發(fā)酵工藝如下：將培養(yǎng)基滅菌，滅菌完成后溫度降至30～35℃時(shí)，將培養(yǎng)好的一級(jí)種子移入發(fā)酵罐，移種后發(fā)酵生產(chǎn)采取變溫發(fā)酵，接種后培養(yǎng)溫度控制在30～33℃，培養(yǎng)48h后降溫至28～30℃，培養(yǎng)壓力控制在0.01～0.04mpa，發(fā)酵周期120～144小時(shí)。實(shí)施例2為驗(yàn)證本發(fā)明中利用米渣替代部分玉米漿干粉的培養(yǎng)基配方對(duì)金霉素發(fā)酵產(chǎn)生的有益影響，采用米渣替代部分玉米漿干粉的培養(yǎng)基(以下簡(jiǎn)稱米渣組)及全部使用玉米漿干粉的培養(yǎng)基(以下簡(jiǎn)稱玉米漿干粉組)按照實(shí)施例1的生產(chǎn)方法分別進(jìn)行金霉素發(fā)酵生產(chǎn)，測(cè)定金霉素效價(jià)。米渣組發(fā)酵制備工序中發(fā)酵罐內(nèi)1000升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉30kg、玉米淀粉15kg、玉米漿干粉3kg、米渣18kg、kh2po40.03kg、mgso40.05kg、豆油0.5kg。其中米渣的質(zhì)量要求為：蛋白質(zhì)含量≥60％，水分≤10％，總糖≤20％,脂肪≤12％，灰分≤5％，干渣顆粒通過(guò)60目篩的數(shù)量≥90％。玉米漿干粉組發(fā)酵制備工序中發(fā)酵罐內(nèi)1000升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉30kg、玉米淀粉15kg、玉米漿干粉21kg、kh2po40.03kg、mgso40.05kg、豆油0.5kg。上述培養(yǎng)基按照實(shí)施例1的生產(chǎn)方法分別進(jìn)行5批次的發(fā)酵。表1米渣組及玉米漿干粉組的金霉素效價(jià)項(xiàng)目玉米漿干粉組發(fā)酵效價(jià)(μg/ml)米渣組發(fā)酵效價(jià)(μg/ml)1224612576822276524700321488257544220172533152208924917平均值2216425294相對(duì)效價(jià)(％)100.00114.12如表1所示，以利用米渣替代部分玉米漿干粉的培養(yǎng)基配方發(fā)酵生產(chǎn)金霉素比完全使用玉米漿干粉，其發(fā)酵效價(jià)提高14.12％，有效地提高了產(chǎn)量。目前市場(chǎng)價(jià)格玉米漿干粉3000-4000元/噸，而米渣系味精生產(chǎn)的廢棄下腳料，價(jià)格低廉，降低了發(fā)酵原料投入成本。本發(fā)明提高金霉素生產(chǎn)產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，并解決了部分味精生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的環(huán)保問(wèn)題。實(shí)施例3本發(fā)明的一種金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，每1000升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉28kg、玉米淀粉12kg、玉米漿干粉4kg、米渣16kg、kh2po40.02kg、mgso40.04kg、豆油0.4kg。其余條件同實(shí)施例1。實(shí)施例4本發(fā)明的一種金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，每1000升培養(yǎng)基水溶液中含有：玉米粉32kg、玉米淀粉16kg、玉米漿干粉2kg、米渣20kg、kh2po40.04kg、mgso40.06kg、豆油0.6kg。其余條件同實(shí)施例1。雖然以上描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但是熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，我們所描述的具體的實(shí)施例只是說(shuō)明性的，而不是用于對(duì)本發(fā)明的范圍的限定，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在依照本發(fā)明的精神所作的等效的修飾以及變化，都應(yīng)當(dāng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求所保護(hù)的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12