本發(fā)明涉及一種蛋白多肽，尤其涉及一種桑葉蛋白多肽及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

桑樹屬桑科桑屬，為落葉喬木，據(jù)研究，干桑葉中含粗蛋白25-45％，碳水化合物20-25％，粗脂肪5％，以及豐富的鉀、鈣和維生素c、b1、b2、a等，還有各種微量元素銅、鋅、硼、錳等物質(zhì)。桑葉中含有蛻皮固酮、羽扁豆酮以及靶香甙、桑甙等許多氨基酸、維生素、絳原酸、葉酸、延胡索酸、內(nèi)消旋肌酸、植物雌激素等人體所必需的各種生理活性物質(zhì)，具有抗應(yīng)激、降血糖、降血脂、降血壓、抗炎、抗衰老、增強肌體耐力、抗腫瘤和調(diào)節(jié)腎上腺素功能等效果，桑葉因含有許多生理活性成分，而具有營養(yǎng)保健功能，是國家衛(wèi)生部公布的藥食兩用品。目前，國內(nèi)桑葉的用途主要用于養(yǎng)殖蠶，但是由于紡織業(yè)工業(yè)化的發(fā)展，人造蠶絲的質(zhì)量和手感越來越接近手工蠶絲，因此人工養(yǎng)蠶的數(shù)量也逐漸減少，這也造成了桑葉的大批量剩余，現(xiàn)有的學(xué)者逐漸開始進行桑葉活性肽的研究。

但是，現(xiàn)有的桑葉活性肽的存在以下缺陷：

(1)提取困難，目前桑葉活性肽的化學(xué)提取法反應(yīng)快，產(chǎn)量大，但是提取出的肽類活性低，而物理提取法雖然肽類活性高，但是反應(yīng)慢，產(chǎn)量小；

(2)專利cn201510908614.4公開了一種微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，但該方法得到的?；钚噪牟贿m于應(yīng)用在飲品中。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種桑葉蛋白多肽，該蛋白多肽利用桑葉為原料，通過蛋白改性、兩次酶解、滅酶活和濃縮等步驟制備得到，不僅提取方便，而且適合人體食用。

本發(fā)明的第二個目的是為了提供一種將桑葉蛋白多肽應(yīng)用在保健飲品中，該保健飲品既含有桑葉蛋白的豐富營養(yǎng)，又具有多肽功能，有益于身體健康。

本發(fā)明的目的之一采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種桑葉蛋白多肽，其制備方法包括：

預(yù)處理步驟：取新鮮桑木葉經(jīng)洗滌去除雜質(zhì)，干燥后，粉碎至10-30目，得到桑葉粉；

蛋白改性步驟：常溫下，向桑葉粉中依次加入純凈水和穩(wěn)定劑后，調(diào)節(jié)ph為8-9，再加熱至50-60℃，在此溫度下保溫0.8-1.5h，過濾得到桑葉粗濾液；

一次酶解步驟：待桑葉粗濾液降至常溫，再調(diào)節(jié)ph為8-9后，向桑葉粗濾液中加入堿性蛋白酶和果膠酶，充分攪拌，再次加熱12-16min，溫度控制在50-60℃，在加熱過程中保持ph值大于7.5，得到一次酶解液；

二次酶解步驟：待一次酶解液降至常溫，再次調(diào)整ph值至7.6-7.7，向一次酶解液中加入多肽復(fù)合酶，充分攪拌，再次加熱12-16min，溫度控制在50-60℃，當ph值降至7.1-7.3，酶解完成，得到二次酶解液；

滅酶活步驟：將二次酶解液加溫至85-95℃，保持8-12min，離心，得到蛋白肽液；

濃縮步驟：待蛋白肽液降至常溫，過濾濃縮后，得到桑葉蛋白多肽。

進一步地，所述蛋白改性步驟中，穩(wěn)定劑為亞硫酸氫鈉。

進一步地，所述蛋白改性步驟中，桑葉粉、穩(wěn)定劑和純凈水的固液比為1：(0.1-0.2)：(13-17)。

進一步地，所述一次酶解步驟中，桑葉粗濾液、堿性蛋白酶和果膠酶的體積比為1：(0.02-0.04)：(0.01-0.02)。

進一步地，所述二次酶解步驟中，一次酶解液與多肽復(fù)合酶的體積比為1：(0.01-0.03)。

進一步地，所述蛋白改性步驟、一次酶解步驟、二次酶解步驟和滅酶活步驟中，加溫均為微波加熱，微波加熱的頻率為2500mhz，功率為20kw。

實現(xiàn)本發(fā)明的第二個目的可以通過采取如下技術(shù)方案達到：

上述的桑葉蛋白多肽在制備保健飲品上的應(yīng)用。

進一步地，桑葉蛋白多肽在制備保健酒的應(yīng)用，所述保健酒的制備方法包括：

勾兌步驟：向桑葉蛋白多肽中加入米酒勾兌，勾兌至酒精度為25-30度，浸泡150-200天，得到桑葉酒母液；

陳化步驟：對桑葉酒母液進行微波陳化處理后，微濾去沉渣，再超濾，得到桑葉蛋白肽原酒；

成品步驟：將桑葉蛋白肽原酒灌裝、封口、殺菌，檢驗合格后，得到桑葉蛋白肽酒，上市。

進一步地，所述陳化步驟中，微波陳化的溫度為35-45℃，時間為46-48min。

進一步地，所述陳化步驟中，微濾的濾網(wǎng)的孔徑為800-1000目，超濾的濾網(wǎng)為一萬分子量超濾膜。

本發(fā)明的有益效果在于：

1、本發(fā)明的桑葉蛋白多肽，該蛋白多肽利用桑葉為原料，通過蛋白改性、兩次酶解、滅酶活和濃縮等步驟制備得到，不僅提取方便，而且適合人體食用；

2、本發(fā)明將桑葉蛋白多肽應(yīng)用在保健飲品中，該保健飲品既含有桑葉蛋白豐富營養(yǎng)，又具有多肽功能，有益于身體健康。

具體實施方式

下面，結(jié)合具體實施方式，對本發(fā)明做進一步描述，需要說明的是，在不相沖突的前提下，以下描述的各實施例之間或各技術(shù)特征之間可以任意組合形成新的實施例。

一種桑葉蛋白多肽，其制備方法包括：

預(yù)處理步驟：取新鮮桑木葉經(jīng)洗滌去除雜質(zhì)，干燥后，粉碎至10-30目，得到桑葉粉，桑葉粉為該目數(shù)是為了便于與米酒充分接觸、發(fā)酵，如果目數(shù)過大，桑葉粉會漂浮在米酒表面，并且難以與米酒發(fā)酵反應(yīng)；

蛋白改性步驟：常溫下，向桑葉粉中依次加入純凈水和亞硫酸氫鈉，桑葉粉、穩(wěn)定劑和純凈水的固液比為1：(0.1-0.2)：(13-17)，調(diào)節(jié)ph為8-9，再加熱至50-60℃，在此溫度下保溫0.8-1.5h，過濾得到桑葉粗濾液；該步驟中，向桑葉粉中加入純凈水而不是酸堿是為了保證人體健康，如果加入酸堿液損傷人體；

一次酶解步驟：待桑葉粗濾液降至常溫，再調(diào)節(jié)ph為8-9后，向桑葉粗濾液中加入堿性蛋白酶和果膠酶，加入果膠酶可以提高桑葉的出汁率，加入堿性蛋白酶和果膠酶則是因為大部分蛋白質(zhì)保留在桑葉粗濾液的濾渣中，加入堿性蛋白酶和果膠酶可以加快過濾速度，又可有效水解桑葉蛋白質(zhì)為氨基酸和多肽，提高桑葉汁的營養(yǎng)含量和人體吸收率，桑葉粗濾液、堿性蛋白酶和果膠酶的體積比為1：(0.02-0.04)：(0.01-0.02)，充分攪拌，再次加熱12-16min，溫度控制在50-60℃，在加熱過程中保持ph值大于7.5，得到一次酶解液；

二次酶解步驟：待一次酶解液降至常溫，再次調(diào)整ph值至7.6-7.7，向一次酶解液中加入多肽復(fù)合酶，一次酶解液與多肽復(fù)合酶的體積比為1：(0.01-0.03)，充分攪拌，再次加熱12-16min，溫度控制在50-60℃，當ph值降至7.1-7.3，酶解完成，得到二次酶解液；

滅酶活步驟：將二次酶解液加溫至85-95℃，保持8-12min，離心，得到蛋白肽液；

濃縮步驟：待蛋白肽液降至常溫，過濾濃縮后，得到桑葉蛋白多肽。

作為進一步地實施方式，蛋白改性步驟、一次酶解步驟、二次酶解步驟和滅酶活步驟中，加溫均為微波加熱，微波加熱的頻率為2500mhz，功率為20kw。

上述的桑葉蛋白多肽在制備保健飲品上的應(yīng)用。

作為進一步地實施方式，桑葉蛋白多肽在制備保健酒的應(yīng)用，保健酒的制備方法包括：

勾兌步驟：向桑葉蛋白多肽中加入米酒勾兌，勾兌至酒精度為25-30度，浸泡150-200天，得到桑葉酒母液；

陳化步驟：對桑葉酒母液進行微波陳化處理，微波陳化的溫度為35-45℃，時間為46-48min，微濾去沉渣，微濾的濾網(wǎng)的孔徑為800-1000目，再用一萬分子量超濾膜超濾，得到桑葉蛋白肽原酒；

成品步驟：將桑葉蛋白肽原酒灌裝、封口、殺菌，檢驗合格后，得到桑葉蛋白肽酒，上市。

實施例1：

一種桑葉蛋白多肽的制備方法包括：

預(yù)處理步驟：取新鮮桑木葉經(jīng)洗滌去除雜質(zhì)，干燥后，粉碎至20目，得到桑葉粉；

蛋白改性步驟：常溫下，向桑葉粉中依次加入純凈水和亞硫酸氫鈉，桑葉粉、穩(wěn)定劑和純凈水的固液比為1：0.2：15，調(diào)節(jié)ph為8.5，再加熱至55℃，在此溫度下保溫1h，過濾得到桑葉粗濾液；

一次酶解步驟：待桑葉粗濾液降至常溫，再調(diào)節(jié)ph為8.5后，向桑葉粗濾液中加入堿性蛋白酶和果膠酶，桑葉粗濾液、堿性蛋白酶和果膠酶的體積比為1：0.03：0.02，充分攪拌，再次加熱15min，溫度控制在55℃，在加熱過程中保持ph值大于7.5，得到一次酶解液；

二次酶解步驟：待一次酶解液降至常溫，再次調(diào)整ph值至7.6，向一次酶解液中加入多肽復(fù)合酶，一次酶解液與多肽復(fù)合酶的體積比為1：0.02，充分攪拌，再次加熱15min，溫度控制在55℃，當ph值降至7.2，酶解完成，得到二次酶解液；

滅酶活步驟：將二次酶解液加溫至90℃，保持10min，離心，得到蛋白肽液；

濃縮步驟：待蛋白肽液降至常溫，過濾濃縮后，得到桑葉蛋白多肽。

其中，蛋白改性步驟、一次酶解步驟、二次酶解步驟和滅酶活步驟中，加溫均為微波加熱，微波加熱的頻率為2500mhz，功率為20kw。

實施例2：

一種桑葉蛋白多肽的制備方法包括：

預(yù)處理步驟：取新鮮桑木葉經(jīng)洗滌去除雜質(zhì)，干燥后，粉碎至10目，得到桑葉粉；

蛋白改性步驟：常溫下，向桑葉粉中依次加入純凈水和亞硫酸氫鈉，桑葉粉、穩(wěn)定劑和純凈水的固液比為1：0.1：13，調(diào)節(jié)ph為8，再加熱至50℃，在此溫度下保溫0.8h，過濾得到桑葉粗濾液；

一次酶解步驟：待桑葉粗濾液降至常溫，再調(diào)節(jié)ph為8后，向桑葉粗濾液中加入堿性蛋白酶和果膠酶，桑葉粗濾液、堿性蛋白酶和果膠酶的體積比為1：0.02：0.01，充分攪拌，再次加熱12min，溫度控制在50℃，在加熱過程中保持ph值大于7.5，得到一次酶解液；

二次酶解步驟：待一次酶解液降至常溫，再次調(diào)整ph值至7.6，向一次酶解液中加入多肽復(fù)合酶，一次酶解液與多肽復(fù)合酶的體積比為1：0.01，充分攪拌，再次加熱12min，溫度控制在50℃，當ph值降至7.1，酶解完成，得到二次酶解液；

滅酶活步驟：將二次酶解液加溫至85℃，保持8min，離心，得到蛋白肽液；

濃縮步驟：待蛋白肽液降至常溫，過濾濃縮后，得到桑葉蛋白多肽。

其中，蛋白改性步驟、一次酶解步驟、二次酶解步驟和滅酶活步驟中，加溫均為微波加熱，微波加熱的頻率為2500mhz，功率為20kw。

實施例3：

一種桑葉蛋白多肽的制備方法包括：

預(yù)處理步驟：取新鮮桑木葉經(jīng)洗滌去除雜質(zhì)，干燥后，粉碎至30目，得到桑葉粉；

蛋白改性步驟：常溫下，向桑葉粉中依次加入純凈水和亞硫酸氫鈉，桑葉粉、穩(wěn)定劑和純凈水的固液比為1：0.2：17，調(diào)節(jié)ph為9，再加熱至60℃，在此溫度下保溫1.5h，過濾得到桑葉粗濾液；

一次酶解步驟：待桑葉粗濾液降至常溫，再調(diào)節(jié)ph為9后，向桑葉粗濾液中加入堿性蛋白酶和果膠酶，桑葉粗濾液、堿性蛋白酶和果膠酶的體積比為1：0.04：0.02，充分攪拌，再次加熱16min，溫度控制在60℃，在加熱過程中保持ph值大于7.5，得到一次酶解液；

二次酶解步驟：待一次酶解液降至常溫，再次調(diào)整ph值至7.7，向一次酶解液中加入多肽復(fù)合酶，一次酶解液與多肽復(fù)合酶的體積比為1：0.03，充分攪拌，再次加熱16min，溫度控制在60℃，當ph值降至7.3，酶解完成，得到二次酶解液；

滅酶活步驟：將二次酶解液加溫至95℃，保持12min，離心，得到蛋白肽液；

濃縮步驟：待蛋白肽液降至常溫，過濾濃縮后，得到桑葉蛋白多肽。

其中，蛋白改性步驟、一次酶解步驟、二次酶解步驟和滅酶活步驟中，加溫均為微波加熱，微波加熱的頻率為2500mhz，功率為20kw。

實施例4：

一種桑葉蛋白肽酒，其制備方法包括：

勾兌步驟：向?qū)嵤├?得到的桑葉蛋白多肽中加入米酒勾兌，勾兌至酒精度為26度，浸泡180天，得到桑葉酒母液；

陳化步驟：對桑葉酒母液進行微波陳化處理，微波陳化的溫度為40℃，時間為46min，微濾去沉渣，微濾的濾網(wǎng)的孔徑為800目，再用一萬分子量超濾膜超濾，得到桑葉蛋白肽原酒；

成品步驟：將桑葉蛋白肽原酒灌裝、封口、殺菌，檢驗合格后，得到桑葉蛋白肽酒，上市。

實施例5：

一種桑葉蛋白肽酒，其制備方法包括：

勾兌步驟：向?qū)嵤├?得到的桑葉蛋白多肽中加入米酒勾兌，勾兌至酒精度為25度，浸泡150天，得到桑葉酒母液；

陳化步驟：對桑葉酒母液進行微波陳化處理，微波陳化的溫度為35℃，時間為47min，微濾去沉渣，微濾的濾網(wǎng)的孔徑為800目，再用一萬分子量超濾膜超濾，得到桑葉蛋白肽原酒；

成品步驟：將桑葉蛋白肽原酒灌裝、封口、殺菌，檢驗合格后，得到桑葉蛋白肽酒，上市。

實施例6：

一種桑葉蛋白肽酒，其制備方法包括：

勾兌步驟：向?qū)嵤├?得到的桑葉蛋白多肽中加入米酒勾兌，勾兌至酒精度為30度，浸泡200天，得到桑葉酒母液；

陳化步驟：對桑葉酒母液進行微波陳化處理，微波陳化的溫度為45℃，時間為48min，微濾去沉渣，微濾的濾網(wǎng)的孔徑為1000目，再用一萬分子量超濾膜超濾，得到桑葉蛋白肽原酒；

成品步驟：將桑葉蛋白肽原酒灌裝、封口、殺菌，檢驗合格后，得到桑葉蛋白肽酒，上市。

對比例1：

對比例1與實施例1不同之處在于，預(yù)處理步驟中，粉碎至100目，得到桑葉粉。

對比例2：

對比例2與實施例1不同之處在于，蛋白改性步驟、一次酶解步驟、二次酶解步驟和滅酶活步驟中，加溫均為水浴加熱。

對比例3：

對比例3與實施例1不同之處在于，一次酶解步驟中，只向桑葉粗濾液中加入堿性蛋白酶，桑葉粗濾液和堿性蛋白酶的體積比為1：0.04。

對比例4：

對比例1與實施例1不同之處在于，桑葉蛋白肽酒制備方法的陳化步驟未采用微波陳化處理。

對比例5：

對比例5為市面上酒精度為30度的白酒。

性能檢測與效果評定

實驗1

檢驗實施例1-3和對比例1-3的桑葉蛋白肽的提取率，結(jié)果如下表所示。

表1實施例1-3和對比例1-3的提取率

由上表可見，本發(fā)明的實施例1-3的桑葉蛋白提取率以及活性肽得率均高于對比例1-3，說明預(yù)處理步驟中粉碎目數(shù)小、微波加熱以及堿性蛋白酶和果膠酶協(xié)同作用均能提高桑葉蛋白的提取率以及活性肽得率，而且實施例1為最優(yōu)實施例。

實驗2

根據(jù)q/jcwoois對實施例4-6、對比例4的桑葉蛋白肽酒以及對比例5的白酒進行檢驗，檢驗結(jié)果如下：

表2實施例4-6和對比例4-5的感官結(jié)果

表3實施例4-6和對比例4-5的指標結(jié)果

a酒精度標簽標示值與實測值不得超過±1.0％vol

b總糖標簽標示值與實測值不得超過±10.0％

c甲醇、氰化物指標按100％vol酒精度折算

由表2-3可見，實施例4-6的感官效果優(yōu)于對比例4-5的感官效果，并且總糖、肽含量、總酸、總酯均高于對比例4-5，說明實施例4-6的微波陳化處理步驟能夠增加前述物質(zhì)的浸出率，而且實施例4為最優(yōu)實施例。

綜上所述，本發(fā)明的桑葉蛋白多肽，該蛋白多肽利用桑葉為原料，通過蛋白改性、兩次酶解、滅酶活和濃縮等步驟制備得到，該制備方法提取率高，桑葉蛋白多肽應(yīng)用的保健飲品既含有桑葉蛋白豐富營養(yǎng)，又具有多肽功能，有益于身體健康。

上述實施方式僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，不能以此來限定本發(fā)明保護的范圍，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明的基礎(chǔ)上所做的任何非實質(zhì)性的變化及替換均屬于本發(fā)明所要求保護的范圍。