本發(fā)明屬于微生物的培養(yǎng)，特別是指一種利用光照培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法。
背景技術(shù)：
：巖藻黃素(fucoxanthin)，又稱巖藻黃質(zhì)、褐藻素，主要來自大藻、硅藻及金藻等大型海藻和微藻，是一種天然的類胡蘿卜素，參與光合作用中光系統(tǒng)ii的反應(yīng)。因其具有獨(dú)特的丙二烯結(jié)構(gòu)，巖藻黃素是一種具有強(qiáng)抗氧化性的活性分子。近年來研究發(fā)現(xiàn)，巖藻黃素在細(xì)胞、動(dòng)物以及人體都證實(shí)具有多種功能活性，包括抗氧化、抗炎癥、抗癌、抗肥胖、抗糖尿病、抗血管生成和抗瘧等生理活性，且對(duì)肝臟、腦部血管、骨骼、皮膚和眼睛等器官具有保護(hù)作用。綜合以上功能，巖藻黃素是一種具有廣闊保健食品和藥物開發(fā)前景的天然產(chǎn)物，巖藻黃素的市場容量500噸，10％含量的巖藻黃素浸膏價(jià)格即高達(dá)40000元/公斤，因此具有巨大的市場價(jià)值。巖藻黃素的功效中減肥方面的顯著作用使其受到越來越多的關(guān)注，它可以通過抑制脂肪細(xì)胞的生成和加速脂肪分解代謝兩條途徑達(dá)到減肥的效果。目前市場上巖藻黃素主要是通過裙帶菜(undariapinnatifida)、海帶(laminariajaponica)等大型海藻中提取獲得。但是上述方法存在著大型海藻在細(xì)胞壁厚、多糖類物質(zhì)含量高、純化困難和海洋污染等問題，且大型海藻中巖藻黃素含量極低(僅為干重的0.01％-0.07％)，綜上所述，巖藻黃素的產(chǎn)品質(zhì)量在一定程度上難以保證，并且下游分離純化的難度加大，因其對(duì)提取分離純化有更高的技術(shù)要求，從而導(dǎo)致高純巖藻黃素價(jià)格昂貴，進(jìn)一步限制了巖藻黃素的應(yīng)用。相對(duì)大型海藻而言，海洋微藻是巖藻黃素更好的替代來源。目前市場上大型海藻中提取的濃縮巖藻黃素的含量普遍低于1％，而一些海洋微藻細(xì)胞中巖藻黃素含量即高達(dá)0.6％，是大型海藻的近100倍。硅藻為分布廣泛的海洋微藻，在海洋、淡水及潮濕的表面上均廣泛存在，一般依靠光能合成自身所需的養(yǎng)分。平滑菱形藻(nitzchialaevis)為一種單細(xì)胞藻類，屬于硅藻門(bacillariophyta)。利用平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的研究較少。申請(qǐng)人通過檢索發(fā)現(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)枮?01310329269.x的專利文獻(xiàn)中公開了一種提高硅藻中巖藻黃素產(chǎn)率的培養(yǎng)方法，該專利過優(yōu)化培養(yǎng)基，添加番茄提取物在一定程度上促進(jìn)合成了巖藻黃素，后期采用光照處理最終使得小環(huán)藻達(dá)到7.77mg/(l·d)的巖藻黃素產(chǎn)率，其中提出平滑菱形藻可用于光照培養(yǎng)生產(chǎn)巖藻黃素，但是該文獻(xiàn)僅公開了利用小環(huán)藻制備巖藻黃素的方法、步驟及工藝條件。并未公布采用其他菌種可進(jìn)行巖藻黃素的生產(chǎn)，同時(shí)其中也并未相關(guān)的培養(yǎng)條件、光照強(qiáng)度、培養(yǎng)基組成、生物量濃度等培養(yǎng)結(jié)果以及巖藻黃素含量和產(chǎn)率等一系列關(guān)鍵技術(shù)信息。guo及本申請(qǐng)中的設(shè)計(jì)人通過篩選，獲得能夠合成巖藻黃素的數(shù)株硅藻，發(fā)現(xiàn)小環(huán)藻cyclotellacrypticaccmp333的巖藻黃素含量可達(dá)0.77％，是十余株微藻中最適合巖藻黃素生產(chǎn)藻株，但其生物量濃度和巖藻黃素產(chǎn)率較低，工業(yè)化應(yīng)用仍然困難。其中所用培養(yǎng)條件下，平滑菱形藻nitzschialaevisutex2047在光照自養(yǎng)條件下生產(chǎn)巖藻黃素，其含量(占細(xì)胞干重)高達(dá)0.7％，但生物量濃度<0.2g/l，產(chǎn)率僅為0.06mg/(l·d)，而此論文中并未對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)條件的優(yōu)化(guo,etal.,2016)。因此有必要通過優(yōu)化培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件等技術(shù)手段，提高光養(yǎng)條件下平滑菱形藻的生物量濃度和巖藻黃素產(chǎn)率，同時(shí)進(jìn)一步提高巖藻黃素含量。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種利用光照培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，通過優(yōu)化培養(yǎng)條件能夠?qū)崿F(xiàn)高產(chǎn)制備巖藻黃素。本發(fā)明的整體技術(shù)構(gòu)思是：1、利用光照培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于包括如下步驟：a、種子液的制備將活化好的平滑菱形藻置于無菌種子培養(yǎng)基中異養(yǎng)培養(yǎng)3-9天制成種子液，使平滑菱形藻細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期；b、發(fā)酵培養(yǎng)將步驟a中的種子液按照體積比為3％-20％的接種量轉(zhuǎn)接入無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，在光照條件下通氣培養(yǎng)制備發(fā)酵液，培養(yǎng)基裝量為20％-80％，培養(yǎng)溫度20℃-30℃，培養(yǎng)周期4-12天；所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下含量范圍的原料：nacl10g/l-32g/l；na2sio3·9h2o30mg/l-700mg/l；mgso4·7h2o1.09g/l-2.18g/l；cacl2·2h2o0.1g/l-0.27g/l；kh2po40.031g/l-0.062g/l；k2hpo40.00375g/l-0.0075g/l；fecl3·6h2o0.291mg/l-0.582mg/l；mncl2·4h2o0.025mg/l-0.246mg/l；zncl20.031mg/l-0.311mg/l；cocl2·6h2o0.0114mg/l-0.0228mg/l；na2moo4·2h2o0.012mg/l-0.024mg/l；h3bo33.06g/l-30.56g/l；(nh4)6mo7o24·4h2o0.028mg/l-0.278mg/l；tris-buffer0.089g/l-0.892g/l；h2so41.64μg/l-16.4μg/l；vitaminb121.5g/l-15×10-5g/l；biotin2.5g/l-25×10-5g/l；氮源0.2g/l-7g/l；ph＝6-9，所述氮源選用有機(jī)氮源、無機(jī)氮源或其組合，其中有機(jī)氮源包括但不限于：酵母膏、蛋白胨、酵母提取物、氨基酸、尿素、蛋白水解物或其組合，無機(jī)氮源包括但不限于選用硝酸鉀、硝酸鈉、氯化銨、碳酸氫銨或其組合；所述的光照強(qiáng)度為不超過200μmol·m-2·s-1；所述的平滑菱形藻選自平滑菱形藻(nitzschialaevis)utex2047(購自美國德克薩斯大學(xué)奧斯汀分校微藻保藏庫，culturecollectionofalgaeattheuniversityoftexasataustin，簡稱utex)、平滑菱形藻(nitzschialaevis)ccmp559(購自美國海洋微藻和微生物保藏中心，nationalcenterformarinealgaeandmicrobiota，簡稱ncma)、或平滑菱形藻(nitzschialaevis)ccmp1092(購自美國海洋微藻和微生物保藏中心，nationalcenterformarinealgaeandmicrobiota，簡稱ncma)，其中優(yōu)選平滑菱形藻(nitzschialaevis)utex2047。c、從步驟b發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液中提取巖藻黃素。因從發(fā)酵液中分離平滑菱形藻細(xì)胞以及從平滑菱形藻細(xì)胞中提取巖藻黃素屬于現(xiàn)有技術(shù)，申請(qǐng)人在此不再贅述。本發(fā)明中各步驟的具體技術(shù)方案如下：為便于工業(yè)發(fā)酵過程的進(jìn)行，所述的培養(yǎng)基置于生物反應(yīng)器內(nèi)，生物反應(yīng)器選用三角瓶或柱式光生物反應(yīng)器。其中的光照光源可以采用多種形式，均不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，優(yōu)選的技術(shù)方案是，光照所用的光源包括但不局限于太陽光、熒光燈燈光、led燈燈光或其組合。光照培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是，采用三角瓶時(shí)將其置于光照搖床中震蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/分鐘-240轉(zhuǎn)/分鐘；采用柱式光生物反應(yīng)器時(shí)通入二氧化碳體積含量低于5％的無菌空氣培養(yǎng)，通氣量為3升/分鐘。為提高巖藻黃素的產(chǎn)率及含量，優(yōu)選的培養(yǎng)條是，發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮源選用如下含量的原料：nano31g/l；蛋白胨1g/l，光照強(qiáng)度為30μmol·m-2·s-1。更為優(yōu)選的培養(yǎng)條件是，所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基中還包括如下含量范圍的原料：葡萄糖5-40g/l。更進(jìn)一步的優(yōu)選技術(shù)方案是，選用柱式光生物反應(yīng)器，在光照強(qiáng)度為5-200μmol·m-2·s-1的條件下通氣培養(yǎng)。本發(fā)明中的涉及的檢測方法如下：1、平滑菱形藻細(xì)胞干重的測定接種后每隔24小時(shí)取3ml發(fā)酵液，在轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心5分鐘，ddh2o洗滌后重新離心，重復(fù)2次；將發(fā)酵液濾至預(yù)稱重的濾紙上，放入80℃真空干燥箱中烘干至恒重。2、巖藻黃素的檢測目前申請(qǐng)人未發(fā)現(xiàn)巖藻黃素檢測的國家或者企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，主要通過紫外可見吸光法(uv法)和高效液相色譜儀(hplc)檢測，因uv法特異性差，易受其他色素的干擾，因此hplc法是巖藻黃素目前較好的檢測手段。本申請(qǐng)參照guo等人的研究，并在其基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，具體如下：稱取20mg凍干后的藻粉，低溫研磨后加入5ml無水乙醇震蕩提取10分鐘，離心(條件為溫度4℃、轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分鐘、時(shí)間5分鐘)收集上清，沉淀中重新加入3ml無水乙醇震蕩提取，直至藻粉呈白色。收集提取液，在溫度4℃、轉(zhuǎn)速為12000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心10分鐘，取上清氮?dú)獯蹈?，再加?ml無水乙醇溶解色素，過膜后高效液相色譜儀(hplc)分析，整個(gè)過程避光條件下進(jìn)行。3、hplc分析方法高效液相色譜儀waters2695，配置pda檢測器，檢測波長450nm，選用c18反相柱(250mm×4.6mm×5mm)。流動(dòng)相為：a相為純乙酸乙酯，b相為乙腈：甲醇：水＝84:2:14，c相為純甲醇，采用梯度洗脫，流動(dòng)相均采用hplc級(jí)。梯度洗脫條件如下：時(shí)間(min)a(％)b(％)c(％)流速(ml/min)0010000.815320680.830320680.835010000.8本發(fā)明所具備的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和取得的顯著技術(shù)進(jìn)步在于：1、本發(fā)明首次提出利用平滑菱形藻通過規(guī)模化發(fā)酵方法生產(chǎn)巖藻黃素，經(jīng)申請(qǐng)人實(shí)驗(yàn)證實(shí)，所制備的平滑菱形藻干燥藻粉中巖藻黃素的含量高(至少可達(dá)0.7-1.0％，最高可達(dá)1.38％，較現(xiàn)有技術(shù)提高97.1％)，巖藻黃素的產(chǎn)率高(至少可達(dá)1.02mg/(l·d)，最高可達(dá)9.88mg/(l·d)，較現(xiàn)有技術(shù)提高163.7倍)。2、本發(fā)明提供的方法具有應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)巖藻黃素的潛力。一是優(yōu)化培養(yǎng)條件后平滑菱形藻的巖藻黃素含量大大提高；二是巖藻黃素產(chǎn)率遠(yuǎn)高于目前報(bào)道的所有硅藻和其他藻類。3、本發(fā)明所獲得的平滑菱形藻粉，在不受外界條件限制下可以穩(wěn)定實(shí)現(xiàn)連續(xù)工業(yè)化生產(chǎn)的基礎(chǔ)上，能夠從培養(yǎng)基的源頭控制重金屬、多氯聯(lián)苯等海洋常見污染物，較大型海藻來源的巖藻黃素更安全。4、相對(duì)其他微藻培養(yǎng)生產(chǎn)巖藻黃素，生產(chǎn)周期大大縮短，最短可4天結(jié)束發(fā)酵，在提高生產(chǎn)效率、降低生產(chǎn)成本的同時(shí)，大大降低了培養(yǎng)過程中的污染風(fēng)險(xiǎn)。附圖說明圖1是平滑菱形藻在自養(yǎng)(光養(yǎng)無糖)和混養(yǎng)(光照條件下培養(yǎng)基中添加5g/l葡萄糖)初始濃度條件下的生長曲線。從圖中可見，其中自養(yǎng)的生物量濃度極低，6天后生物量僅為0.5g/l，而混養(yǎng)條件下的生物量是自養(yǎng)的5倍以上。圖2是平滑菱形藻在自養(yǎng)(光養(yǎng)無糖)和5g/l葡萄糖初始濃度下的巖藻黃素的含量(即巖藻黃素/凍干藻粉的質(zhì)量比)及產(chǎn)率的比較。從圖中可見，其中a代表光養(yǎng)無糖，m代表光養(yǎng)5g/l葡萄糖：混養(yǎng)不僅生物量顯著提高，巖藻黃素含量同時(shí)顯著提高，最高可達(dá)1.2％，而自養(yǎng)僅為1.0％；巖藻黃素產(chǎn)率也高于自養(yǎng)條件(自養(yǎng)為1.02mg/(l·d))，最高達(dá)4.59mg/(l·d)。圖3是平滑菱形藻在不同光照強(qiáng)度的生長曲線。由圖中可見，混養(yǎng)條件下低光強(qiáng)更有利于平滑菱形藻生物量，光照強(qiáng)度為5μmol·m-2·s-1時(shí)生物量濃度最高，隨著光強(qiáng)加強(qiáng)，生物量濃度顯著降低，當(dāng)為光照強(qiáng)度為70μmol·m-2·s-1時(shí)，生物量約為0.7g/l。圖4是不同光照強(qiáng)度對(duì)平滑菱形藻細(xì)胞中巖藻黃素含量和產(chǎn)率的影響。由圖中可見，低光強(qiáng)利于平滑菱形藻生長的同時(shí)，也利于巖藻黃素的積累。光照強(qiáng)度為5μmol·m-2·s-11時(shí)，巖藻黃素的含量及產(chǎn)量均為最高，最高濃度和產(chǎn)率分別達(dá)1.38％和9.88mg/(l·d)，較現(xiàn)有技術(shù)分別提高97.1％和163.7倍，同時(shí)也是申請(qǐng)人所了解到的目前現(xiàn)有微藻培養(yǎng)生產(chǎn)巖藻黃素的最大產(chǎn)率。具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作進(jìn)一步描述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定，本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求記載的內(nèi)容為準(zhǔn)，任何依據(jù)說明書做出的等效技術(shù)手段替換，均不脫離本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1平滑菱形藻自養(yǎng)培養(yǎng)生產(chǎn)菌種選用平滑菱形藻(nitzschialaevis)utex2047(購自美國德克薩斯大學(xué)奧斯汀分校微藻保藏庫，culturecollectionofalgaeattheuniversityoftexasataustin，簡稱utex)。工藝步驟如下：a、將活化后生產(chǎn)菌種的平滑菱形藻接種在置于搖瓶中的無菌種子培養(yǎng)基中異養(yǎng)培養(yǎng)3天制成種子液，種子液中平滑菱形藻細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期；b、以250ml錐形瓶為培養(yǎng)容器，轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)基100ml并滅菌。按體積比為10％的接種量將步驟a中的種子液接入無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床自養(yǎng)培養(yǎng)制備發(fā)酵液，培養(yǎng)條件如下：光照強(qiáng)度為30μmol·m-2·s-1，溫度為23℃，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)周期5天。c、從步驟b發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液中提取巖藻黃素：培養(yǎng)結(jié)束后收集發(fā)酵液，離心洗滌，冷凍干燥。種子培養(yǎng)基包括如下含量的原料：nacl10g/l；na2sio3·9h2o60mg/l；mgso4·7h2o2.18g/l；cacl2·2h2o0.27g/l；kh2po40.062g/l；k2hpo40.0075g/l；fecl3·6h2o0.582mg/l；mncl2·4h2o0.246mg/l；zncl20.311mg/l；cocl2·6h2o0.0228mg/l；na2moo4·2h2o0.024mg/l；h3bo330.56g/l；(nh4)6mo7o24·4h2o0.278mg/l；tris-buffer0.892g/l；h2so416.4μg/l；vitaminb1215×10-5g/l；biotin25×10-5g/l。發(fā)酵培養(yǎng)基在種子培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上還包含如下含量的原料：nano31g/l、蛋白胨1g/l，ph＝8.5。實(shí)施例2平滑菱形藻混養(yǎng)培養(yǎng)實(shí)施例2與實(shí)施例1的區(qū)別在于，實(shí)施例2中的種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基中還包含有如下含量的原料：葡萄糖5g/l，其余內(nèi)容與實(shí)施例1相同。實(shí)施例1、2的效果分析：平滑菱形藻在自養(yǎng)和混養(yǎng)條件下比較，混養(yǎng)培養(yǎng)生長狀態(tài)較佳，混養(yǎng)生物量最高達(dá)2.68g/l，自養(yǎng)僅為0.70g/l(見圖1)。如圖2，自養(yǎng)巖藻黃素含量為1.0％，混養(yǎng)最高為1.2％。計(jì)算得混養(yǎng)條件下巖藻黃素產(chǎn)率高于自養(yǎng)，最優(yōu)產(chǎn)率為4.59mg/(l·d)。實(shí)施例3平滑菱形藻混養(yǎng)培養(yǎng)實(shí)施例3與實(shí)施例2的區(qū)別是種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基中還包含有如下含量的原料：葡萄糖20g/l，生產(chǎn)菌種選用平滑菱形藻(nitzschialaevis)ccmp559(購自美國海洋微藻和微生物保藏中心，nationalcenterformarinealgaeandmicrobiota，簡稱ncma)，其余內(nèi)容同實(shí)施例2。實(shí)施例3的效果分析：本實(shí)施例中的生產(chǎn)菌種生長狀態(tài)較佳，生物量最高達(dá)2.88g/l。自養(yǎng)巖藻黃素含量為0.9％。計(jì)算得本實(shí)施例中的生產(chǎn)菌種發(fā)酵生產(chǎn)巖藻黃素產(chǎn)率高于自養(yǎng)，最優(yōu)產(chǎn)率為4.32mg/(l·d)。實(shí)施例4實(shí)施例4與實(shí)施例2的區(qū)別在于生物反應(yīng)器選用250ml柱式光生物反應(yīng)器，同時(shí)在步驟b中輔以光照強(qiáng)度為5μmol·m-2·s-1的光照，通氣量為3l/分鐘，其余內(nèi)容與實(shí)施例2相同。實(shí)施例5-8實(shí)施例5-8與實(shí)施例4的區(qū)別在于實(shí)施例5-8的步驟b中的光照強(qiáng)度依次分別為15、30、50和70μmol·m-2·s-1，步驟b中培養(yǎng)周期為4天；其余內(nèi)容與實(shí)施例4相同。實(shí)施例4-8的效果分析：參見圖3和圖4，進(jìn)行光照處理輔助培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為5-200μmol·m-2·s-1。光照處理可進(jìn)一步提高巖藻黃素含量，使得巖藻黃素進(jìn)一步提高，當(dāng)光照強(qiáng)度為5μmol·m-2·s-1時(shí)，巖藻黃素含量最高達(dá)1.38％，此時(shí)巖藻黃素的產(chǎn)率最高可達(dá)9.88mg/(l·d)，最高產(chǎn)率較未優(yōu)化前提高了863.9％。實(shí)施例9實(shí)施例9與實(shí)施例4的區(qū)別在于：實(shí)施例9中生產(chǎn)菌種選用平滑菱形藻(nitzschialaevis)ccmp1092(購自美國海洋微藻和微生物保藏中心，nationalcenterformarinealgaeandmicrobiota，簡稱ncma)，步驟b中通氣量為1升/分鐘，種子液按照體積比為3％的接種量轉(zhuǎn)接入無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，在光照條件下通氣培養(yǎng)制備發(fā)酵液，培養(yǎng)基裝量為80％，培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)周期12天；所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下含量范圍的原料：nacl32g/l；na2sio3·9h2o410mg/l；mgso4·7h2o2.18g/l；cacl2·2h2o0.1g/l；kh2po40.031g/l；k2hpo40.0055g/l；fecl3·6h2o0.291mg/l；mncl2·4h2o0.025mg/l；zncl20.031mg/l；cocl2·6h2o0.0180mg/l；na2moo4·2h2o0.012mg/l；h3bo316.1g/l；(nh4)6mo7o24·4h2o0.278mg/l；tris-buffer0.089g/l；h2so49.4μg/l；vitaminb1215×10-5g/l；biotin0.21g/l；氮源0.2g/l；ph＝6，所述氮源采用如下質(zhì)量份數(shù)的原料組成：酵母膏：碳酸氫銨：蛋白胨：尿素＝1：2：1：2；所述的光照強(qiáng)度為200μmol·m-2·s-1，燈光為led來源。其余內(nèi)容與實(shí)施例4相同。實(shí)施例9效果分析：巖藻黃素含量為1.21％，巖藻黃素產(chǎn)量為9.1mg/(l·d)。實(shí)施例10實(shí)施例10與實(shí)施例4的區(qū)別在于：實(shí)施例9中生產(chǎn)菌種選用平滑菱形藻(nitzschialaevis)ccmp1092(購自美國海洋微藻和微生物保藏中心，nationalcenterformarinealgaeandmicrobiota，簡稱ncma)，種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖濃度為40g/l，種子液按照體積比為20％的接種量轉(zhuǎn)接入無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，在光照條件下通氣培養(yǎng)制備發(fā)酵液，通氣量3l/min(其中空氣：二氧化碳比例為95:5),培養(yǎng)基裝量為20％，培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)周期4天；所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下含量范圍的原料：nacl10g/l；na2sio3·9h2o30mg/l；mgso4·7h2o1.09g/l；cacl2·2h2o0.16g/l；kh2po40.062g/l；k2hpo40.00375g/l；fecl3·6h2o0.582mg/l；mncl2·4h2o0.112mg/l；zncl20.031mg/l；cocl2·6h2o0.0228mg/l；na2moo4·2h2o0.024mg/l；h3bo33.06g/l；(nh4)6mo7o24·4h2o0.140mg/l；tris-buffer0.892g/l；h2so416.4μg/l；vitaminb121.5g/l；biotin25×10-5g/l；氮源0.2g/l-7g/l；ph＝6-9，所述氮源選用如下質(zhì)量份數(shù)的原料組成：蛋白胨：酵母提取物：氨基酸：硝酸鉀＝1：1：1：2；所述的光照強(qiáng)度為不超過5μmol·m-2·s-1，光源為為遮蔽調(diào)整后的太陽光。實(shí)施例10效果分析：巖藻黃素含量為1.11％，巖藻黃素產(chǎn)量為7.8mg/(l·d)。實(shí)施例11實(shí)施例11與實(shí)施例10的區(qū)別在于：種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖濃度為20g/l，種子液按照體積比為14％的接種量轉(zhuǎn)接入無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，在光照條件下通氣培養(yǎng)制備發(fā)酵液，通氣量3l/min(其中空氣：二氧化碳比例為98:2),培養(yǎng)基裝量為40％，培養(yǎng)溫度20℃，培養(yǎng)周期7天；所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下含量范圍的原料：nacl22g/l；na2sio3·9h2o700mg/l；mgso4·7h2o1.66g/l；cacl2·2h2o0.27g/l；kh2po40.045g/l；k2hpo40.0075g/l；fecl3·6h2o0.431mg/l；mncl2·4h2o0.246mg/l；zncl20.151mg/l；cocl2·6h2o0.0114mg/l；na2moo4·2h2o0.018mg/l；h3bo330.56g/l；(nh4)6mo7o24·4h2o0.028mg/l；tris-buffer0.451g/l；h2so41.64μg/l；vitaminb120.1g/l；biotin2.5g/l；氮源0.2g/l-7g/l；ph＝6-9，所述氮源選用如下質(zhì)量份數(shù)的原料組成：氨基酸：蛋白水解物：硝酸鈉：氯化銨＝2：2：1：2；所述的光照強(qiáng)度為不超過100μmol·m-2·s-1，光源為熒光燈。實(shí)施例11效果分析：巖藻黃素含量為1.11％，巖藻黃素產(chǎn)量為7.8mg/(l·d)。當(dāng)前第1頁12