本發(fā)明屬于有機合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種制備mi-2關(guān)鍵中間體的方法。

背景技術(shù)：

淋巴瘤（lymphoma）是淋巴結(jié)或結(jié)外淋巴組織的惡性腫瘤，nhl是成人淋巴瘤的主要類型，占世界上常見惡性腫瘤的第七位，彌漫性大b細胞淋巴瘤（dlbcl）是其中最為常見的一種亞型，其中abc型淋巴瘤是預(yù)后最差，治愈率最低，最易產(chǎn)生耐藥性的一種類型。因此尋求更加有效的治療手段尤其是靶向藥物用于治療abc型淋巴瘤成為目前亟待解決的難題。

大量研究數(shù)據(jù)顯示黏膜相關(guān)型淋巴組織淋巴瘤易位蛋白（malt1）是abc型淋巴瘤中有效的靶分子，它可以切割多種底物，以促進淋巴細胞增殖，提高淋巴瘤細胞的存活率。malt1的催化活性在正常情況下受抗原受體觸發(fā)的嚴格控制，通過其誘導的單泛素化依賴的二聚反應(yīng)來誘導malt1的激活。通過特異性抑制malt1的活性，可以達到抑制淋巴細胞惡性增值的目的。

mi-2是最近報道的一種骨架新穎、結(jié)構(gòu)簡單的malt1抑制劑，該化合物是fontan等人通過高通量篩選（high-throughputscreening,hts）發(fā)現(xiàn)的一種具有三氮唑環(huán)結(jié)構(gòu)骨架的小分子先導化合物。細胞實驗結(jié)果表明，mi-2的藥效活性可達到納摩爾級別并對abc型淋巴瘤具有一定的選擇性。同時，mi-2（其結(jié)構(gòu)如圖1所示）是一種不可逆的malt1抑制劑，其分子結(jié)構(gòu)中的氯甲基酰胺結(jié)構(gòu)部分可以與malt1中的活性位點共價性結(jié)合，這可能是其發(fā)揮不可逆抑制作用的原因。本課題組前期研究結(jié)果顯示，在mi-2乙二醇單甲醚支鏈區(qū)域進行合理結(jié)構(gòu)修飾能夠大大提高其抑制惡性dlbcl淋巴瘤細胞增殖的能力。

本發(fā)明以3,4-二氯苯甲酸為起始原料，經(jīng)7步常規(guī)反應(yīng)后得到mi-2關(guān)鍵中間體。發(fā)明中所涉及的反應(yīng)操作簡單、條件溫和、易于處理，所用的試劑及儀器皆為實驗室常用易得的，具有很強的操作性。通過該中間體，可快速大量獲得mi-2及其在乙二醇單甲醚支鏈區(qū)域改造后的類似物，有助于對mi-2進行系統(tǒng)全面的構(gòu)效關(guān)系研究，具有十分重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種mi-2關(guān)鍵中間體及其制備方法，通過該中間體，可快速大量獲得mi-2及其在乙二醇單甲醚支鏈區(qū)域改造后的類似物，有助于對mi-2進行系統(tǒng)全面的構(gòu)效關(guān)系研究，具有十分重要的意義。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種mi-2關(guān)鍵中間體，其結(jié)構(gòu)式為：

。

一種制備如上所述的mi-2關(guān)鍵中間體的方法，包括以下步驟：

1）以3,4-二氯苯甲酸為主要起始原料，合成3，4-二氯苯甲酰氯；

2）3，4-二氯苯甲酰氯再與硫氰酸鉀反應(yīng)得到3，4-二氯苯甲酰異硫氰酸酯；

3）3，4-二氯苯甲酰異硫氰酸酯與甲醇反應(yīng)得到3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯；

4）3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯與對硝基苯肼反應(yīng)得到3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

5）3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑與醋酸反應(yīng)得到3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

6）3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑與過量醋酸、鋅粉反應(yīng)得到3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑；

7）將3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑依次與氯乙酸和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽混合反應(yīng)得到mi-2關(guān)鍵中間體：3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氯乙酰氨基苯基）-1,2,4-三氮唑。

所述的制備mi-2關(guān)鍵中間體的方法，具體為：

1）將3，4-二氯苯甲酸溶于適量二氯甲烷溶劑中，冰浴條件下依次加入1.1當量草酰氯和催化量的n，n-二甲基甲酰胺，撤去冰浴裝置，室溫攪拌12h后低溫旋干得到3，4-二氯苯甲酰氯；

2）向3，4-二氯苯甲酰氯的丙酮溶液中加入等當量的硫氰酸鉀，混合溶液在60℃條件下攪拌反應(yīng)1小時后，反應(yīng)液經(jīng)純化后得到3，4-二氯苯甲酰異硫氰酸酯；

3）3，4-二氯苯甲酰異硫氰酸酯用丙酮溶解后，向其中加入2.5當量甲醇，混合溶液在60℃條件下攪拌反應(yīng)3小時后，反應(yīng)液經(jīng)純化后得到3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯；

4）將步驟3）制得的3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯用乙醇溶解后，加入1.2當量對硝基苯肼混合均勻，在90℃條件下攪拌反應(yīng)12小時后，反應(yīng)液經(jīng)純化后得到3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

5）將步驟4）所制得的3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑用醋酸溶解后，加入5當量質(zhì)量分數(shù)為33%hbr醋酸溶液，反應(yīng)液在100℃條件下攪拌反應(yīng)6小時，冷卻，將反應(yīng)液加入至50ml冰水中并充分攪拌，抽濾得到3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑；

6）將步驟5）所得的3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑用適量甲醇溶劑溶解后，加入鋅粉、過量醋酸并混合均勻，室溫下攪拌反應(yīng)過夜后，所得反應(yīng)液經(jīng)純化后得到3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑；

7）將步驟6）制得的3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑用適量的ch2cl2溶劑溶解，依次加入1.5當量氯乙酸和2當量1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，混合均勻，在室溫下攪拌反應(yīng)2小時后，所得反應(yīng)液經(jīng)后處理后得到所述的mi-2關(guān)鍵中間體，即3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氯乙酰氨基苯基）-1,2,4-三氮唑。

一種利用如上所述的mi-2關(guān)鍵中間體制備mi-2及其類似物的方法：將mi-2關(guān)鍵中間體與三苯基膦混合，用四氫呋喃溶劑溶解后，加入乙二醇單甲醚或醇試劑，在冰浴條件下加入偶氮二甲酸二異丙酯，反應(yīng)液在室溫條件下攪拌反應(yīng)1小時，所得反應(yīng)液經(jīng)純化后即可得到mi-2或其類似物。

所述的純化具體為：將反應(yīng)液用乙酸乙酯稀釋后，依次加入適量的水、飽和食鹽水萃取1~2次，收集有機相并加入無水硫酸鈉干燥后，過濾濃縮，得到的粗產(chǎn)物在合適的洗脫極性下經(jīng)硅膠柱層析純化后得到mi-2及其類似物。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于：

本發(fā)明所設(shè)計的合成路線中所涉及的反應(yīng)操作簡單、條件溫和、易于處理，所用的試劑及儀器皆為實驗室常用易得的，具有很強的操作性。根據(jù)本路線可以快速大量獲得malt1抑制劑mi-2及其在乙二醇單甲醚支鏈區(qū)域改造后的類似物，有助于對mi-2進行系統(tǒng)全面的構(gòu)效關(guān)系研究，具有十分重要的意義。

附圖說明

圖1為mi-2的結(jié)構(gòu)式；

圖2為mi-2關(guān)鍵中間體的合成路線。

具體實施方式

為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明所述的技術(shù)方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。

實施例1

一種制備mi-2關(guān)鍵中間體的方法，具體合成步驟為：

1）3，4二氯苯甲酰氯（c）的制備：

在磁力攪拌反應(yīng)裝置中，往裝有磁力攪拌子的200ml圓底燒瓶中加入3,4-二氯苯甲酸（9.55g，50mmol）和100ml二氯甲烷，在0℃冰水浴條件下，逐滴加入草酰氯（4.7ml，55mmol），然后接上尾氣吸收裝置，末端置于裝有氫氧化鈉溶液的燒杯中，用保鮮膜將燒杯口包裹（用于吸收反應(yīng)過程中產(chǎn)生的氯化氫氣體）。室溫下攪拌，反應(yīng)12小時，經(jīng)tlc檢測已基本無原料3,4-二氯苯甲酸即可停止反應(yīng)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去二氯甲烷溶劑，無須純化即可進行下一步的反應(yīng)；

2）3，4-二氯苯甲酰異硫氰酸酯（d）的制備：

取一個干凈干燥的100ml圓底燒瓶，先在室溫下，將步驟1）制得的3,4-二氯苯甲酰氯（10.5g，50mmol）溶于20ml丙酮中，并加入kscn（4.9g，50mmol）；放入磁力攪拌子，在磁力攪拌反應(yīng)裝置中，加熱到60℃，反應(yīng)1小時。待反應(yīng)液冷卻下來后，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行旋蒸，除去溶劑后，向粗品中加入20ml乙酸乙酯溶解后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，依次加入水（2×15ml）、飽和食鹽水（1×10ml）萃取，收集有機相并加入適量無水硫酸鈉干燥后濃縮，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析得到10.8g白色固體，洗脫劑為pe/etoac=4:1，反應(yīng)收率為93%。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13(d,j=2.1hz,1h),7.88(dd,j=8.4,2.1hz,1h),7.58(d,j=8.4hz,1h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ160.67,150.23,140.11,133.88,132.27,131.24,130.79,129.36.

3）3，4-二氯苯甲酰氨基硫代甲酸甲酯（e）的合成；

向3，4-二氯苯甲酰異硫氰酸酯（d）（504mg，2.2mmol）的丙酮（5ml）溶液中加入meoh（5ml）。將混合物在60℃下攪拌反應(yīng)3小時。將反應(yīng)混合物用etoac（15ml）稀釋，加h2o（3×5ml）萃取。有機層用無水硫酸鈉干燥，然后濃縮，得到粗產(chǎn)物。殘余物通過硅膠柱層析（pe/etoac=2:1）純化，得到目標產(chǎn)物（481mg，83％），為白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.16(s,1h),7.92(d,j=2.1hz,1h),7.68–7.63(m,1h),7.57(d,j=8.3hz,1h),4.18(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ189.84,160.81,138.07,133.87,132.71,131.18,130.04,126.81,59.74.

4）3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（f）的合成：

取50ml茄形瓶，加入e（432mg,1.6mmol），對硝基苯肼（250mg,1.6mmol），加入5ml甲醇，固體溶解后放入磁力攪拌子，將反應(yīng)瓶放在磁力攪拌反應(yīng)裝置中，設(shè)置溫度為70℃，接上冷凝水回流裝置，攪拌反應(yīng)18小時。經(jīng)tlc檢測已基本無原料e即可停止反應(yīng)。將反應(yīng)液倒入60ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯和20ml去離子水，震蕩萃取，分出水相后，有機相用飽和氯化鈉溶液再萃取一次。有機相裝于50ml錐形瓶中，加入適量無水硫酸鈉，放入磁力攪拌子，進行干燥。干燥后的有機相過濾到100ml茄形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽去溶劑。通過tlc檢測，確定洗脫劑的極性比為pe:etoac=4:1，粗品經(jīng)硅膠柱層析純化得到517mg黃色固體，反應(yīng)收率為89%。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(d,j=9.0hz,2h),7.69(d,j=2.1hz,1h),7.54(d,j=9.0hz,2h),7.45(d,j=8.4hz,1h),7.23–7.19(m,1h),4.07(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ169.07,151.90,147.14,142.45,135.62,133.78,131.07,131.01,127.94,127.24,125.25,125.12,57.34.

5）3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（g）的合成：

將步驟4）所制得的3-甲氧基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（f）（109mg,0.30mmol)用5ml醋酸溶解后，加入質(zhì)量分數(shù)為33%的hbr醋酸溶液（736mg,3.0mmol），反應(yīng)液在100℃條件下攪拌反應(yīng)6小時；冷卻，將反應(yīng)液加入至50ml冰水中并充分攪拌，抽濾得到104mg淺黃色固體物質(zhì)即3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（g），反應(yīng)收率為99%。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.83(s,1h),8.30(d,j=8.8hz,2h),7.76(d,j=2.0hz,1h),7.68(d,j=8.4hz,1h),7.62(d,j=8.8hz,2h),7.38–7.32(m,1h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ167.02,150.75,146.48,142.24,133.41,131.73,131.17,130.80,129.04,128.17,125.64,124.99.

6）3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑（h）的合成：

將3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-硝基苯基）-1,2,4-三氮唑（g）（105mg,0.3mmol）溶于2ml甲醇溶劑中，依次向反應(yīng)溶液中加入0.5ml醋酸、鋅粉（196mg,3mmol）。放進磁力攪拌子，室溫下攪拌過夜。經(jīng)tlc檢測反應(yīng)液中基本沒有原料g時停止反應(yīng)，旋轉(zhuǎn)除去甲醇。將反應(yīng)后的產(chǎn)物用乙酸乙酯溶解，用蒸餾水和飽和食鹽水萃取若干次，收集有機相，然后用無水硫酸鈉進行干燥除去有機相中的水，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙酸乙酯。得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化得到89mg淺黃色固體，洗脫劑極性為ch2cl2/meoh=10:1，反應(yīng)收率為93%。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.30(s,1h),7.66–7.55(m,2h),7.32(d,j=8.4hz,1h),7.00(d,j=8.2hz,2h),6.60(d,j=8.2hz,2h),5.50(s,2h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ166.19,149.69,149.17,132.47,131.36,130.90,129.95,128.52,128.25,126.98,125.92,113.87.

7）3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氯乙酰氨基苯基）-1,2,4-三氮唑（a）的合成：

取一個25ml茄型瓶，加入3-羥基-5-（3，4-二氯苯基）-1-（4-氨基苯基）-1,2,4-三氮唑（h）（635mg,2.0mmol），氯乙酸（260mg,3.0mmol），edci（760mg，4.0mmol），再加入2ml二氯甲烷，用超聲儀使固體溶解，放入磁力攪拌子。常溫反應(yīng)3小時。經(jīng)tlc檢測無原料后，停止反應(yīng)。將反應(yīng)后的產(chǎn)物用乙酸乙酯溶解，用蒸餾水和飽和食鹽水萃取若干次，收集有機相，然后用無水硫酸鈉進行干燥除去有機相中的水，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙酸乙酯。得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化得到725mg淺黃色固體，洗脫劑極性為ch2cl2/meoh=10:1，反應(yīng)收率為93%。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.50(s,1h),10.57(s,1h),7.73–7.61(m,4h),7.36(d,j=8.7hz,2h),7.31–7.26(m,1h),4.27(s,2h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ166.56,165.17,149.69,139.01,133.01,132.86,131.51,131.04,130.30,128.54,128.29,126.48,119.99,43.65.

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。