本發(fā)明涉及一種玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m及其在提高植物耐低磷中的應(yīng)用；屬于植物基因工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

玉米是重要的糧食作物，目前已成為全球第二大消耗糧食產(chǎn)物，預(yù)計(jì)到2020年，全球?qū)τ衩椎男枨罅繉⒊鲂←満退尽Ｓ衩撞粌H是重要的糧食和飼料，它還是重要的工業(yè)原料，廣泛用于醫(yī)藥、化工等行業(yè)。在玉米主栽區(qū)，土壤速效磷的供應(yīng)不足已成為限制玉米籽粒產(chǎn)量的主要因素之一，而推廣利用磷高效品種能有效的提高產(chǎn)量，因此研究玉米磷高效機(jī)制并對(duì)其進(jìn)行遺傳改良具有重要的意義。

為應(yīng)對(duì)低磷的脅迫，植物可采取兩種策略：一是提高獲得磷的能力。植物可增強(qiáng)根系生長(zhǎng)和修飾根系構(gòu)型(lópez-bucioetal,2002；svistoonoffetal,2007)，增加根系吸收面積；增強(qiáng)根系分泌有機(jī)酸、質(zhì)子等酸化土壤以提高難溶性礦物磷酸鹽的溶解度，增加pi可用性等(mudgeetal,2002；raghothama,1999)。二是提高磷的利用效率。提高磷利用率的生理和分子適應(yīng)包括加速老葉衰老促進(jìn)無(wú)機(jī)磷向初生組織轉(zhuǎn)運(yùn)、調(diào)整碳代謝和磷脂代謝等途徑(dentonetal,2007；lambersetal,2012；richardson,etal,2011)。其中通過脂質(zhì)更替從膜磷脂釋放無(wú)機(jī)磷是植物應(yīng)對(duì)低磷脅迫的重要機(jī)制(nakamuraetal,2013；okazakietal,2013；siebersetal,2015)。細(xì)胞中約15～30％的有機(jī)磷存在于磷脂中，低磷下允許植物利用這些包含在磷脂中的pi以應(yīng)對(duì)低磷脅迫。激活脂質(zhì)代謝及脂質(zhì)更替的途徑有：一是由磷脂(phospholipid)至二?；视?diacylglycerol)的轉(zhuǎn)化，該途徑中pi饑餓誘導(dǎo)的非特異性plc(非特異性磷脂酶c)、pld(磷脂酶d)、pap(磷脂酸磷酸酶)等起關(guān)鍵作用；二是參與半乳糖脂/硫脂累積的途徑，包括pi饑餓時(shí)誘導(dǎo)mgdg、dgdg合成；三是pi饑餓時(shí)誘導(dǎo)sqdg合成。由此可導(dǎo)致脂質(zhì)組成產(chǎn)生重大的變化)。在磷脅迫期間用不含磷的甘油脂如sqdg和dgdg替代膜磷脂，促進(jìn)pi的再轉(zhuǎn)移是典型的脂質(zhì)更替代謝特征，且在磷脅迫時(shí)sqdg能彌補(bǔ)pg含量的下降,使細(xì)胞內(nèi)陰離子脂的含量維持在一個(gè)穩(wěn)定水平。

植物的生存環(huán)境復(fù)雜多變，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上經(jīng)常遭受低磷逆境脅迫，影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育，造成作物減產(chǎn)。udp-硫代異鼠李糖合成酶基因參與植物對(duì)低磷脅迫的應(yīng)答。但研究對(duì)象大多是模式生物擬南芥，其他物種中udp-硫代異鼠李糖合成酶基因的功能研究較少。迄今為止，還未見有關(guān)玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因參與耐低磷應(yīng)答的相關(guān)報(bào)導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)：

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技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有研究的狀況，本發(fā)明提供了一種玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m及其在提高植物耐低磷中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m，其特征在于：該基因zmsqd1m的cdna的核苷酸序列如seqidno.1所示，其編碼的氨基酸序列如seqidno.2所示。

本發(fā)明還提供了含有上述玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m的重組質(zhì)粒pcambia1300-35s-zmsqd1m-35s-epsp。通過pcr引物向sqidno.1序列兩側(cè)引入xbai和kpni雙酶切位點(diǎn)，獲得含有xbai和kpni雙酶切位點(diǎn)的核苷酸序列。xbai和kpni雙酶切植物表達(dá)載體pcambia1300-epsp回收載體片段，回收的載體片段與含有xbai和kpni雙酶切位點(diǎn)的核苷酸序列連接獲得重組質(zhì)粒pcambia1300-35s-zmsqd1m-35s-epsp。

所述pcr引物序列為：

f-3:5’-gctctagacctccttttctgggcgt-3’

r-3:5’-ggggtacccacctcactacctagca-3’

上述重組質(zhì)粒的特征在于外源基因的表達(dá)框中含有zmsqd1m基因的完整的編碼框，即全長(zhǎng)orf(openreadingframe)。

本發(fā)明所述玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m在提高植物耐低磷中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述重組質(zhì)粒pcambia1300-35s-zmsqd1m-35s-epsp在提高植物耐低磷中的應(yīng)用。

其中：所述植物優(yōu)選是煙草、玉米或棉花。

本發(fā)明提供了提高含有基因zmsqd1m植物耐低磷的方法，是將基因zmsqd1m導(dǎo)入宿主植物細(xì)胞、組織或植株個(gè)體，得到具有耐低磷性能的植株。

具體的，高保真pcr擴(kuò)增玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m的cdna序列，獲得zmsqd1m全長(zhǎng)cdna。構(gòu)建包含zmsqd1m基因完整orf的過表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化煙草、玉米、棉花等植物，實(shí)現(xiàn)提高煙草、玉米、棉花等植物耐低磷能力。

本發(fā)明的有益效果是：采用分子生物學(xué)技術(shù)克隆了玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m，該基因zmsqd1m的cdna的核苷酸序列如seqidno.1所示，并構(gòu)建含有上述玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m的重組質(zhì)粒pcambia1300-35s-zmsqd1m-epsp，通過根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將該基因轉(zhuǎn)入植物中，實(shí)驗(yàn)證實(shí)：應(yīng)用本發(fā)明所述玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m獲得的轉(zhuǎn)基因植株的耐低磷能力明顯提高，應(yīng)用前景廣闊。

附圖說(shuō)明

圖1、質(zhì)粒pcambia1300-zmsqd1m-35s-epsp的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2、重組質(zhì)粒質(zhì)粒pcambia1300-zmsqd1m-35s-epsp經(jīng)xbai和kpni酶切的酶切鑒定電泳圖

其中：泳道2、8產(chǎn)生預(yù)期片段大小1576bp的泳帶，2、8號(hào)正確。

圖3、重組質(zhì)粒質(zhì)粒pcambia1300-zmsqd1m-35s-epsp經(jīng)ecori酶切鑒定電泳圖

其中：泳道2、8產(chǎn)生預(yù)期片段大小1336bp的泳帶，2、8號(hào)正確。

圖4、重組質(zhì)粒pcambia1300-35s-zmsqd1m-35s-epsp經(jīng)xhoi酶切鑒定電泳圖。

其中：泳道2、8產(chǎn)生預(yù)期片段大小3369bp的泳帶，2、8號(hào)正確。

圖5、重組質(zhì)粒pcambia1300-35s-zmsqd1m-35s-epsp轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌所得菌落的菌落pcr鑒定。

其中：泳道m(xù)：dl2000；泳道-：陰性農(nóng)桿菌菌落。泳道+：農(nóng)桿菌陽(yáng)性菌落。片段預(yù)期大小1575bp。

圖6、轉(zhuǎn)zmsqd1m基因煙草的pcr分析。

其中：泳道：p:陽(yáng)性對(duì)照(質(zhì)粒)；wt：野生型(wisconsin38)；h2o:空白對(duì)照；s1-s4是轉(zhuǎn)基因zmsqd1m基因煙草。

圖7、轉(zhuǎn)zmsqd1m基因煙草在+p(a)、-p(b)培養(yǎng)基生長(zhǎng)30d表型

其中：煙草在組培室生長(zhǎng)(溫度：25℃，相對(duì)濕度：50～70％)，光周期為16小時(shí)/8小時(shí)(晝/夜)，光照強(qiáng)度200μmolm^-2s^-1。+p：含有600μmkh2po4的ms培養(yǎng)基，-p：含有5μmkh2po4的ms培養(yǎng)基。wt(wisconsin38)，s1、s2、s3轉(zhuǎn)zmsqd1m基因煙草。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

高保真pcr擴(kuò)增zmsqd1m目的基因

取玉米齊319四葉期幼嫩的葉片，參照植物總rna提取試劑盒(tiangen，北京)說(shuō)明書，提取植物總rna，用primescriptrtreagentkit(takara，大連)反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄得到cdna。以特異引物進(jìn)行高保真pcr擴(kuò)增。特異引物序列如下：

forwardprimer：cctccttttctgggcgttta

reverseprimer：cacctcactacctagcaaatcat

pcr反應(yīng)體系(25μl)，具體為5×psbuffer(mg²⁺)，5μl；dntp(2.5mmeach)2μl；primer1(100μm)，0.5μl；primer2(100μm)，0.5μl；primerstarase(2.5u/μl)，0.25ul；模板cdna文庫(kù)，2ul；ddh2o:14.75ul。pcr擴(kuò)增條件，95℃預(yù)變性5min；98℃變性10sec，63℃復(fù)性5sec，72℃延伸1min36sec，循環(huán)30次；72℃延伸6min。

將pcr產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠dna回收試劑盒回收(tiangen，北京)純化后，連接到peasy-bluntcloningvector(transgen，北京)上。然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌transt1(transgen，北京)，進(jìn)行測(cè)序分析。通過上述步驟，獲得了玉米齊319的udp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m的cdna，核苷酸序列如seqidno.1所示，并推導(dǎo)出其編碼的氨基酸序列如seqidno.2所示。

zmsqd1m基因cdna克隆的結(jié)果如下：

通過高保真酶擴(kuò)增獲得zmsqd1m基因的cdna序列為1419bp，編碼473個(gè)氨基酸，zmsqd1m的cdna核苷酸序列如seqidno.1所示，其編碼的zmsqd1m蛋白的氨基酸如seqidno.2所示。

實(shí)施例2

35s啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的植物表達(dá)載體的構(gòu)建

植物表達(dá)載體pcambia1300-epsp是含有35s啟動(dòng)子和epsp基因的雙元載體，在其多克隆位點(diǎn)上含有限制性內(nèi)切酶xbai和kpni位點(diǎn)。根據(jù)基因zmsqd1m的cdna序列，設(shè)計(jì)包含完整orf的基因特異性引物，且在引物5′端引入xbai、kpni雙酶切位點(diǎn)，引物序列為：

f-3:5’-gctctagacctccttttctgggcgt-3’

r-3:5’-ggggtacccacctcactacctagca-3’

以重組的p-easyblunt載體為模版，用該對(duì)引物高保真擴(kuò)增zmsqd1m的cdna序列。然后分別用限制性內(nèi)切酶xbai和kpni雙酶切載體pcambia1300-epsp和目的基因片段。完全酶切的載體在1％瓊脂糖凝膠上電泳分離后，經(jīng)膠回收，然后與雙酶切且膠回收的cdna片段連結(jié)，構(gòu)建獲得植物表達(dá)載體pcambia1300-35s-zmsqd1m-35s-epsp(圖1，植物表達(dá)載體結(jié)構(gòu)示意圖)。其中植物表達(dá)載體pcambia1300-epsp為全人工合成epsp基因(兩端分別加bamhⅰ、kpni酶切位點(diǎn))鏈接到pcambia1300的多克隆位點(diǎn)上獲得。植物表達(dá)載體pcambia1300-epsp中的pcambia1300載體為cambia公司產(chǎn)品，genbank注冊(cè)號(hào)af134296；epsp基因注冊(cè)號(hào)為ay573186.1。具體流程：

2.1質(zhì)粒pcambia1300-epsp和目的基因片段xbai和kpni雙酶切

酶切體系如下(100μl)：10×buffer(m)，10μl；質(zhì)粒pcambia1300-epsp或目的基因片段，30μl；xbai(10u/μl)，1μl；kpni(10u/μl)，1μl；ddh2o，58μl。于37℃恒溫水浴鍋中酶切8小時(shí)。

2.2酶切產(chǎn)物的電泳與回收

雙酶切完成后，以0.5×tbe為電泳緩沖液，將酶切產(chǎn)物進(jìn)行1％瓊脂糖凝膠電泳。在紫外透射儀下用潔凈刀片切下pcambia1300-epsp中載體的大片段和目的基因片段，瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收目的條帶。

2.3連接

經(jīng)酶切的pcambia1300-epsp載體片段和目的基因片段以摩爾比1:3的比例進(jìn)行，酶切體系如下：回收的目的基因片段(86.847ng/μl)，1μl；10×t4連接酶緩沖液，2μl；pcambia1300-epsp載體(18.038ng/μl)，10μl；t4dna連接酶(350u/μl)(takara)，1μl；ddh2o至20μl。22℃,1h，65℃,10min連接。

2.4轉(zhuǎn)化

連接產(chǎn)物熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌dh5α感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化菌在含50μg/ml的kana的lb固體平板上37℃培養(yǎng)16小時(shí)左右。

2.5重組子的鑒定

質(zhì)粒酶切鑒定。

提取陽(yáng)性克隆質(zhì)粒，對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行xbai和kpni雙酶切，酶切體系(100μl)：10×buffer(m)，10μl；質(zhì)粒，30μl；xbai(10u/μl)，1μl；kpni(10u/μl)，1μl；ddh2o，58μl。于37℃恒溫水浴鍋中酶切8小時(shí)。經(jīng)xbai和kpni酶切的產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳后，其中泳道2、8產(chǎn)生預(yù)期片段大小1576bp的泳帶，2、8號(hào)正確。(圖2)。

提取陽(yáng)性克隆質(zhì)粒，對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行ecori單酶切，酶切體系(100μl)：10×buffer(m)，10μl；質(zhì)粒，30μl；ecori(10u/μl)，1μl；ddh2o，59μl。于37℃恒溫水浴鍋中酶切8小時(shí)。經(jīng)ecori酶切的產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳后，其中泳道2、8產(chǎn)生預(yù)期片段大小1336bp的泳帶，2、8號(hào)正確。(圖3)。

提取陽(yáng)性克隆質(zhì)粒，對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行xhoi單酶切，酶切體系(100μl)：10×buffer(m)，10μl；質(zhì)粒，30μl；xhoi(10u/μl)，1μl；ddh2o，59μl。于37℃恒溫水浴鍋中酶切8小時(shí)。經(jīng)xhoi酶切的產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳后，其中泳道2、8產(chǎn)生預(yù)期片段大小3369bp的泳帶，2、8號(hào)正確。(圖4)。

因此2、8號(hào)為重組正確的質(zhì)粒，即pcambia1300-zmsqd1m-35s-epsp。經(jīng)華大和鉑尚兩家生物技術(shù)公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明序列正確，且2、8號(hào)序列相同，測(cè)序結(jié)果表明所得序列包含一個(gè)完整的orf，長(zhǎng)1419bp。全長(zhǎng)orf序列見sqidno.1。將正確菌液放于-76℃低溫冰箱及-40℃低溫冰箱保存。

實(shí)施例3

凍融法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌lba4404

農(nóng)桿菌lba4404感受態(tài)購(gòu)買自tiangen。取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心待其部分融化處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰上。

每100μl感受態(tài)加1μg(體積不大于10μl)質(zhì)粒dna，用手撥打管混勻。依次于冰上靜止5min，液氮5min，37℃水浴5min,冰浴5min。

加入無(wú)抗生素的yep700μl，28℃振蕩培養(yǎng)2-3h；

6000rpm離心1min收集菌體，留取100μl上清輕輕吹打重懸，涂布于含50μg/ml利福平、50μg/mlkana的yep平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。

菌落pcr鑒定

菌落pcr所用引物序列為：f-3:5’-gctctagacctccttttctgggcgt-3’；r-3:5’-ggggtacccacctcactacctagca-3’。pcr反應(yīng)體系(25μl)：10×buffer(mg²⁺)，2.5μl；primer1(100μm)，1μl；primer2(100μm)，1μl；dntp(2.5mmeach)，2μl；taqase(5u/μl)，0.15μl；模板dna，1μl；ddh2o，17.35μl。

pcr產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳后，檢測(cè)到目的條帶為1575bp，與預(yù)期1575bp大小一致(圖5)。結(jié)果表明質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌lba4404成功，可用于相關(guān)植物的浸染轉(zhuǎn)化。

實(shí)施例4

煙草的葉盤轉(zhuǎn)化、篩選及表型分析

4.1野生型煙草的種植

將野生型煙草種子用10％次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，然后用無(wú)菌水漂洗5-6次，點(diǎn)播于含有ms培養(yǎng)基的平皿上，于25℃處理4-5天。

然后移植到含有ms培養(yǎng)基的廣口瓶中，25℃培養(yǎng)，16/8h光周期，光照強(qiáng)度為300-600μmol·m^-2·s^-1；植株生長(zhǎng)至3-4葉期，取葉片制備葉盤進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。

4.2煙草的葉盤轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌lba4404在含有利福平(rifampicin)50μg/l和卡那霉素(kanamycin)50μg/l的yep液體培養(yǎng)基中28℃振蕩培養(yǎng)至生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期(od600＝0.5-0.6)。將煙草無(wú)菌苗葉片切割成0.5cm²的小塊，浸入用a2液體培養(yǎng)基重懸的農(nóng)桿菌菌液中，浸染10分鐘。取出葉片后，用無(wú)菌紙吸去多余菌液，置于a2固體培養(yǎng)基上于28℃黑暗處共培養(yǎng)2天，然后轉(zhuǎn)移到加有8mg/l草甘膦和300mg/l頭孢霉素(cefotaxime)的a3選擇培養(yǎng)基上。三次連續(xù)繼代篩選后，將煙草葉片轉(zhuǎn)移到只含頭孢不含草甘膦的a3培養(yǎng)基照繼續(xù)培養(yǎng)，待煙草葉盤邊緣小芽長(zhǎng)出，用手術(shù)刀片小心將小芽切下，轉(zhuǎn)移至a4壯苗培養(yǎng)基上誘導(dǎo)苗繼續(xù)生長(zhǎng)。小苗長(zhǎng)到3-4cm高，轉(zhuǎn)到a5生根培養(yǎng)基上生根。待小苗長(zhǎng)到5-6cm移栽到花盆中。其中a2、a3、a4培養(yǎng)基成分參見王鮮艷的文獻(xiàn)(王先艷.植物雙抗表達(dá)載體的構(gòu)建及其功能鑒定.山東大學(xué),2000(學(xué)位年度)。

4.3轉(zhuǎn)基因煙草的pcr鑒定

4.3.1.煙草基因組dna的提取

(1)取10-20mg左右的新鮮葉片，放入1.5ml離心管中，液氮速凍，研磨器中磨碎，加入400μl預(yù)熱至65℃的ctab提取緩沖液，混勻置于65℃水浴中放置30min；(2)混合物冷至室溫后加入等體積的氯仿：異戊醇(24:1)，抽提10分鐘，12500rpm，常溫，離心15min；(3)取上清，加入2倍體積的4℃預(yù)冷的無(wú)水乙醇，-20℃放置15分鐘，12500rpm，4℃，離心12min；(4)棄上清，用400μl70％乙醇洗滌兩遍，每次30分鐘。(5)37℃風(fēng)干，使乙醇揮發(fā)干凈。(6)用無(wú)菌水溶解，-20℃保存。

4.3.2.pcr擴(kuò)增

以上面提取的煙草基因組dna為模板，用基因特異性引物進(jìn)行pcr擴(kuò)增。

特異性引物：sqd1-f1:5-gtgtctgtccttgtacggca-3；sqd1-r1:5-ggacctaacagaactcgccg-3。pcr反應(yīng)體系(25μl)：其中10×buffer(mg²⁺)，2.5μl；primer1(100μm)，1μl；primer2(100μm)，1μl；dntp(2.5mmeach)，2μl；taqase(5u/μl)，0.15μl；模板dna，1μl；ddh2o，17.35μl。pcr程序：預(yù)變性：94℃，5min；變性：94℃，60sec，退火：57.4℃，40sec，延伸：72℃，45sec，循環(huán)34次；后延伸：72℃，7min。

pcr擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后檢測(cè)到在轉(zhuǎn)基因煙草植株中擴(kuò)增出750bp目的條帶，在轉(zhuǎn)空載體和野生型植株中未見擴(kuò)增條帶(圖6)。

4.4轉(zhuǎn)基因煙草的表型鑒定

4.4.1.煙草的萌發(fā)

野生型(wisconsin38)和轉(zhuǎn)zmsqd1m基因的t3代單拷貝純合煙草株系的種子用10％次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，然后用無(wú)菌水漂洗5-6次，點(diǎn)播于含有ms培養(yǎng)基的平皿上。于25℃萌發(fā)4-5d。

4.4.2.低磷處理：將萌發(fā)后5d的煙草幼苗(對(duì)照及轉(zhuǎn)基因株系)移植到分別含有低磷(5μmkh2po4)和足磷(600μmkh2po4)的ms培養(yǎng)基光口瓶中，16/8h光周期(晝/夜)，光照強(qiáng)度300-600μmol·m^-2·s^-1，25℃培養(yǎng)30天后觀測(cè)定植株干重。結(jié)果表明低磷處理30d，野生型煙草植株矮小，轉(zhuǎn)了zmsqd1m外源基因的煙草植株長(zhǎng)勢(shì)旺盛(圖7)。在含有600μmkh2po4的ms培養(yǎng)基生長(zhǎng)30d的煙草小苗鮮重在0.57～0.62g之間，轉(zhuǎn)基因煙草和wt間未見差異(表1)。在含有5μmkh2po4的ms培養(yǎng)基生長(zhǎng)30d的煙草鮮重在各株系間差異明顯，表達(dá)zmsqd1m的s1、s2、s3株系鮮重分別比wt提高43.75％、62.50％和18.75％。低磷影響了煙草的生長(zhǎng)，表達(dá)zmsqd1m的煙草具有更好的低磷耐受性。

表1：低磷處理對(duì)煙草生物量影響

wt(wisconsin38)，s1、s2、s3轉(zhuǎn)zmsqd1m基因煙草

*表示在相同處理?xiàng)l件下與wt相比“t”檢驗(yàn)差異顯著(p<0.05)。

序列表

<110>山東大學(xué)

<120>玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m及其在提高植物耐低磷中的應(yīng)用

<141>2017-5-23

<160>2

<210>1

<211>1419

<212>cdna

<213>玉米

<221>玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m

<222>（1）…（1419）

<400>1

atgaaaatggcgcacttgatcactaattgcagctttcagacattctcgagttcttctaat60

tactgccgcaatattgggcaactacagaactcaaaatcttcaaatctgtccctcaaatcc120

tgttccaggagacaaaagaagtcatatgttacctgtgctagcgctgccgtacaaggacag180

acacaaacacctcttactggtagccagcaagcttatgagcattcatcctccaaacctaaa240

aaggtaatggttattggtggagatggatactgtgggtgggcaacagcacttcatctctca300

aacaaaggttatgaggttgcgattgttgataatcttgtccgccgtgcttttgataaccaa360

ctcggtcttgattcccttacccccataacctccatccagaatcgtgtccgtagatggaag420

tctctcactgctaagacaatccagctctttattggtgacatatgtgattttgaattcctc480

tcagaaaccttcaagtcttttgagccggatgccgctgtccactttggcgagcaaagatcc540

gcgccatactctatgattgatcgttcgcgggcagtctacacacagcataacaatgtcatt600

gggacacttaatgtcttgtttgccataaaggaatacagtgaagagtgccatcttgttaag660

ctaggaactatgggtgagtatggaacaccaaacattgacatcgaagaggggtttatcact720

attactcacaatggaagaacagacaccttgccttatccaaaacaagccagctctttctat780

catctgagcaaagtgcatgattcccacaacatagcatttacatgcaaggcttggggtata840

agggccactgatcttaaccaaggtgtggtctatggtgtcagaacagatgaaactgcaatg900

cacgaagagctatctaacagatttgattacgatggggtctttgggaccgcactaaatagg960

ttctgtgttcaggctgctgttgggcatccacttacagtttatggaaaaggtggtcagacc1020

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ctagccaaactggtgactgcggcaggagcgaaacttgggcttgaagtggagaccaaatcg1200

atacccaacccacgagtcgaggctgaggagcactactacaacgccaagcacacgaagctt1260

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aagaagatgggtgccaagccacggacagtctctgtttag1419

<210>2

<211>472

<212>prt

<213>玉米

<221>玉米u(yù)dp-硫代異鼠李糖合成酶基因zmsqd1m編碼的氨基酸序列

<222>（1）…（472）

<400>2

mkmahlitncsfqtfssssnycrnigqlqnskssnlslkscsrrqkksyvtcasaavqgq60

tqtpltgsqqayehssskpkkvmviggdgycgwatalhlsnkgyevaivdnlvrrafdnq120

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ithngrtdtlpypkqassfyhlskvhdshniaftckawgiratdlnqgvvygvrtdetam300

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